மென்மையான கையாளுதல்: டிஎன்ஏ துண்டு தேர்வுக்கான பேச்சுவார்த்தைக்குட்பட்ட அடிப்படை

முன்னுரை

சிலிக்கா அடிப்படையிலான காந்த மணிகளின் டிஎன்ஏ துண்டுத் தேர்வின் பணிப்பாய்வு, ஆபரேட்டர்கள் வெளித்தோற்றத்தில் முரண்பாடான தேவையை எதிர்கொள்கின்றனர்: அவர்கள் பராமரிக்கும் போது திறமையான பிணைப்புக்காக மணிகள் மற்றும் டிஎன்ஏவின் முழுமையான கலவையை உறுதி செய்ய வேண்டும் “தீவிர மென்மை” எந்தவொரு தீவிரமான உடல் கிளர்ச்சியையும் தவிர்க்க முழுவதும். பல பரிசோதனையாளர்கள் பிந்தையவற்றின் முக்கியத்துவத்தை குறைத்து மதிப்பிடுகின்றனர், கசிவுகளைத் தடுப்பதற்கான வழக்கமான ஆலோசனையாக இது கருதுகிறது. எனினும், உடல் வெட்டுதல் ஒரு அமைதியான 'கொலையாளி' என்பதை அறிவியல் தரவு தெளிவாகக் காட்டுகிறது’ தேர்வு தயாரிப்பு தரம் குறைவதற்கு வழிவகுக்கிறது, மறுக்க முடியாத முடிவுகள், மற்றும் சோதனை தோல்வியும் கூட. இந்த கட்டுரை அடிப்படை மூலக்கூறு வழிமுறைகளை ஆராய்வதோடு, கடுமையான வெட்டு எதிர்ப்பு செயல்பாட்டு தரநிலைகளை வழங்கும்..

1. முக்கிய அறிவியல் கோட்பாடு: டிஎன்ஏ மூலக்கூறுகள் உடையக்கூடிய நேரியல் பாலிமர்கள்

டிஎன்ஏ ஒரு திடமான கம்பி அல்ல, ஆனால் ஒரு நெகிழ்வான கரைசலில் உள்ளது, சீரற்ற சுருள் இணக்கத்தில் நீண்ட சங்கிலி பாலிமர். திரவ வெட்டு சக்திகளுக்கு அதன் எதிர்ப்பு, உடல் அடிப்படையில் விவரிக்கப்பட்டது, அதன் நிலைத்தன்மையின் நீளத்தைப் பொறுத்தது (தோராயமாக 50 nm) மற்றும் அதன் விளிம்பு நீளம் (மொத்த நீளம்).

ஷீர் படையின் ஆதாரங்கள்: தீவிரமான சுழல் போன்ற செயல்பாடுகள், வலுவான ஆசை மற்றும் விநியோகத்துடன் கூடிய விரைவான குழாய், மற்றும் நன்றாக குழாய் குறிப்புகள் மூலம் மீண்டும் மீண்டும் குழாய் (குறிப்பாக அதிக வேகத்தில் அமைக்கப்படும் குழாய்கள்) திரவத்திற்குள் சக்திவாய்ந்த லேமினார் அல்லது கொந்தளிப்பான வெட்டு சக்திகளை உருவாக்குகிறது.

வெட்டுதல் பொறிமுறை: ஒரு திரவ வெட்டு சாய்வு ஒரு தளர்வான பயன்படுத்தப்படும் போது, நீண்ட டிஎன்ஏ சங்கிலி, சங்கிலி அனுபவத்தின் வெவ்வேறு பிரிவுகள் வெவ்வேறு திசைகளிலும் வெவ்வேறு வேகங்களிலும் இழுக்கப்படுகின்றன. இந்த இழுவிசை விசை டிஎன்ஏ சங்கிலியின் இயந்திர வலிமையை மீறும் போது (குறிப்பாக பாஸ்போடிஸ்டர் பிணைப்புகளின் சகிப்புத்தன்மை வரம்பு), சங்கிலி அதன் இயந்திரரீதியாக பலவீனமான புள்ளிகளில் குறிப்பிடப்படாத உடைப்புக்கு உட்படுகிறது.

நீளம் சார்ந்து உடையக்கூடிய தன்மை: டிஎன்ஏ சங்கிலி நீளமானது, அதன் ஹைட்ரோடினமிக் ஆரம் பெரியது மற்றும் ஒரு வெட்டு ஓட்டப் புலத்தில் அது அனுபவிக்கும் பதற்ற வேறுபாடு அதிகமாகும், வெட்டுவதற்கு அதிக வாய்ப்புள்ளது. ஒரு நீண்ட துண்டு >10 kb பல சீரற்றதாக வெட்டப்படலாம் 1-3 kb துண்டுகள், மற்றும் கூட ஒரு 300 bp இலக்கு துண்டானது பயனற்ற குறுகிய துண்டுகளாக வெட்டப்படலாம்.

2. துண்டுத் தேர்வு முடிவுகளில் வெட்டுவதன் பேரழிவுத் தாக்கம்

டிஎன்ஏவை நீளத்தின் அடிப்படையில் தேர்ந்தெடுக்க வடிவமைக்கப்பட்ட ஒரு பரிசோதனையில் குறிப்பிட்ட அல்லாத வெட்டுதலை அறிமுகப்படுத்துவது மாதிரியை அதன் மூலத்தில் மாசுபடுத்துவதற்கு சமம்.. விளைவுகள் முறையானவை மற்றும் அழிவுகரமானவை:

2.1 இலக்கு துண்டு “மறைவு” மற்றும் வீழ்ச்சியடைந்த மீட்பு

நீங்கள் தேர்ந்தெடுக்க விரும்பும் குறிப்பிட்ட நீள துண்டு (எ.கா., 450 பிபி) கையாளும் போது தோராயமாக பிளவுபடலாம், அந்த அளவு வரம்பில் உள்ள மூலக்கூறுகளின் எண்ணிக்கையைக் குறைக்கிறது. இது எதிர்பார்ப்புகளை விட மிகக் குறைவான மீட்பு விகிதமாக நேரடியாக வெளிப்படுகிறது.

2.2 தயாரிப்பு தூய்மை மற்றும் தீர்மானத்தின் சிதைவு

வெட்டுவதன் மூலம் உருவாக்கப்பட்ட சீரற்ற குறுகிய துண்டுகள் புதிய அசுத்தங்களாக மாறும். அவர்கள் இருக்கலாம்: ஏ) தேர்ந்தெடுக்கும் போது தளங்களை பிணைப்பதற்கான இலக்கு துண்டுகளுடன் போட்டியிடவும், சாதாரண தேர்வு இயக்கவியலில் குறுக்கிடுகிறது; பி) அவற்றின் நீளம் தேர்வு சாளரத்திற்குள் வரக்கூடும் என்பதால் தவறாக மீட்டெடுக்கப்படும், இறுதி தயாரிப்பின் பரந்த நீள விநியோகத்திற்கு வழிவகுக்கிறது, போலியான சிகரங்களின் தோற்றம், எலக்ட்ரோபெரோகிராமில் ஒரு உயர்ந்த அடிப்படை, மற்றும் கடுமையாக சீரழிந்த தீர்மானம்.

2.3 கண்டுபிடிக்க முடியாத மாறியின் அறிமுகம், மறுஉருவாக்கம் அழித்தல்

வெட்டுதல் அளவு குறிப்பிட்ட கையாளுதலின் வீரியத்தைப் பொறுத்தது, அளவிட கடினமாக இருக்கும் மற்றும் நபருக்கு நபர் மற்றும் நேரத்திற்கு மாறுபடும் ஒரு மாறி. இது வெவ்வேறு ஆபரேட்டர்களிடையே முடிவுகளில் விவரிக்க முடியாத வேறுபாடுகளுக்கு வழிவகுக்கிறது, அல்லது ஒரே ஆபரேட்டரின் வெவ்வேறு தொகுதிகளுக்கு இடையில் கூட, சோதனை மறுஉற்பத்தியை முற்றிலுமாக அழித்து, அடுத்தடுத்த தேர்வுமுறை மற்றும் தரவு பகுப்பாய்வு அர்த்தமற்றதாக ஆக்குகிறது.

3. தவிர்க்க மற்றும் நிலையான மென்மையான கையாளுதல் நெறிமுறைகள் உயர்-ஆபத்து செயல்பாடுகள்

மேலே உள்ள கொள்கைகளின் அடிப்படையில், பின்வரும் கட்டாய சோதனை செயல்பாட்டு வழிகாட்டுதல்களை நாங்கள் நிறுவுகிறோம்:

3.1 தடை செய்யப்பட்ட பொருட்கள் (அதிக ஆபத்துள்ள செயல்பாடுகள்):

வீரியமான சுழல்: டிஎன்ஏ அல்லது டிஎன்ஏ-மணி வளாகங்களைக் கொண்ட குழாய்களின் சுழல் கலவையை முற்றிலும் தடைசெய்க.

அதிவேக/விறுவிறுப்பான குலுக்கல்: அதிக சுழற்சி வேகத்தைப் பயன்படுத்துதல் (>1000 ஆர்பிஎம்) ஷேக்கர்/மிக்சரில்.

வலுக்கட்டாயமாக மீண்டும் மீண்டும் குழாய்: விரைவு, வலுக்கட்டாயமாக திரும்பத் திரும்ப ஆசைப்படுதல் மற்றும் குழாய் அடிப்பகுதிக்கு எதிராக அல்லது திரவக் குமிழ்களுக்கு எதிராக ஒரு பைப்பெட் முனையுடன் கலந்து அல்லது மீண்டும் இணைக்கும் முயற்சியில் விநியோகித்தல்.

பெரிய துண்டு மாதிரிகளைக் கையாளுவதற்கு நிலையான நுணுக்கமான உதவிக்குறிப்புகளைப் பயன்படுத்துதல்: வெட்டப்படாததைப் பயன்படுத்துதல், நீண்ட துண்டு டிஎன்ஏ அல்லது மணி வளாகங்களை பைப்பெட்டிங் செய்வதற்கான சிறந்த பைப்பட் குறிப்புகள்.

3.2 நிலையான இயக்க நெறிமுறை (மென்மையான கையாளுதல் SOP):

கலவை/மீண்டும் இடைநிறுத்தம் செயல்பாடுகள்:

விருப்பமான முறை: மென்மையான தலைகீழ் கலவை. குழாயை பாதுகாப்பாக மூடி, மெதுவாகச் செய்யவும், கையால் அல்லது ஒரு சாதனத்தைப் பயன்படுத்தி மீண்டும் மீண்டும் 180-டிகிரி தலைகீழ்.

மாற்று முறை: பரந்த துளை பயன்படுத்தவும் (வெட்டு) மெதுவான குறிப்புகள், மென்மையான குழாய் கலவை. ஒரு பெரிய துளை உருவாக்க பைப்பட் முனையின் குறுகிய முனையை மலட்டு கத்தரிக்கோலால் துண்டிக்கவும், பின்னர் மெதுவாக உறிஞ்சி திரவத்தை விநியோகிக்கவும், முழுவதும் குமிழி உருவாவதைத் தவிர்க்கிறது.

குழாய் செயல்பாடுகள்:

பரந்த துளை பயன்படுத்தவும் (வெட்டு) அல்லது அனைத்து படிகளுக்கும் குறைந்த தக்கவைப்பு பரந்த துளை குறிப்புகள்.

பைபெட்டர் வேகத்தை சரிசெய்யவும்: நவீன எலக்ட்ரானிக் பைப்ட்டர்களை ஆஸ்பிரேஷன் மற்றும் விநியோகம் ஆகிய இரண்டிற்கும் மெதுவான வேக அமைப்பிற்கு அமைக்கவும்.

சுவரில் மெதுவாக சேர்த்தல்: எதிர்வினைகளைச் சேர்க்கும் போது, திரவ ஓட்டத்தை குழாய் சுவரில் மெதுவாக பாய அனுமதிக்கவும், திரவ மேற்பரப்பு அல்லது துகள்கள் நிறைந்த மணிகள் மீது நேரடி தாக்கத்தை தவிர்க்கிறது.

3.3 மணிகள்-குறிப்பிட்ட கையாளுதல் குறிப்புகள்:

பீட் பெல்லட்களை மீண்டும் இணைக்கிறது: காந்த ரேக்கில் இருந்து குழாயை அகற்றிய பிறகு, கழுவுவதற்கு மணிகளை மீண்டும் நிறுத்துதல் தேவைப்பட்டால், இடையகத்தைச் சேர்த்து, மென்மையான தலைகீழ் அல்லது மேலே விவரிக்கப்பட்ட மென்மையான பைபெட் கலவை மூலம் மீண்டும் இணைக்கவும். சுழல்தல் கண்டிப்பாக தடைசெய்யப்பட்டுள்ளது.

சூப்பர்நேட்டண்ட் பரிமாற்றம்: காந்த ரேக்கில் பிரிந்த பிறகு, சூப்பர்நேட்டன்ட்டை விரும்பும்போது, மணிகளைத் தொடுவதையோ அல்லது தொந்தரவு செய்வதையோ தவிர்க்க, சேகரிக்கப்பட்ட மணித் துகள்களிலிருந்து பைப்பெட்டின் நுனியை விலக்கி வைக்கவும்.

4. மேம்பட்ட சரிபார்ப்பு: உங்கள் கையாளுதல் மென்மையாக இருந்தால் எப்படி உறுதிப்படுத்துவது?

கத்தரிப்பால் கடந்த கால முடிவுகள் பாதிக்கப்பட்டதாக நீங்கள் சந்தேகித்தால், பின்வரும் சரிபார்ப்பு சோதனைகளை நீங்கள் செய்யலாம்:

4.1 கட்டுப்பாட்டு சோதனை:

அதே நீண்ட துண்டு டிஎன்ஏ மாதிரியை எடுக்கவும் (எ.கா., துண்டாடப்படாத மரபணு டிஎன்ஏ ) மற்றும் அதை இரண்டு அலிகோட்களாக பிரிக்கவும். ஒரு அலிகோட் தரநிலைக்கு உட்பட்டது “மென்மையான கையாளுதல்” நடைமுறைகள். மற்றொன்றை உருவகப்படுத்தப்பட்ட முறையற்ற கையாளுதலுக்கு உட்படுத்துங்கள் (எ.கா., பல முறை சுழல்). பின்னர் பல்ஸ்டு ஃபீல்ட் ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் அல்லது உயர் தெளிவுத்திறன் கொண்ட நீண்ட-துண்டு பகுப்பாய்வி மூலம் இரண்டையும் ஒரே நேரத்தில் பகுப்பாய்வு செய்யுங்கள். . காணக்கூடிய ஸ்மியர் அல்லது மெயின் பேண்ட் செறிவு குறைவது வெட்டப்பட்டதற்கான சான்றாகும்.

4.2 தேர்வு தயாரிப்பு சுயவிவரங்களை கண்காணித்தல்

வழக்கமான தேர்வு சோதனைகளில், இறுதி தயாரிப்பின் எலக்ட்ரோபெரோகிராம் தொடர்ந்து விளக்கப்படாமல் இருந்தால் “கூம்புகள்” அல்லது குறுகிய-துண்டு பகுதியில் அடிப்படை உயரம் (எ.கா., <100 பிபி), என்சைம் மற்றும் ரியாஜென்ட் மாசுபாட்டை நிராகரித்த பிறகு செயல்பாட்டு வெட்டுதல் முதன்மை சந்தேகத்திற்குரியது.

4.3 முடிவுரை: உயர்த்துதல் “மென்மை” ஒரு பரிந்துரையிலிருந்து கட்டாய செயல்முறை தரநிலை வரை

டிஎன்ஏ துண்டு தேர்வு மற்றும் உண்மையில் அனைத்து செயல்பாடுகளிலும் அப்படியே நியூக்ளிக் அமில மூலக்கூறுகள், “மென்மை” ஒரு விருப்பமான முன்னெச்சரிக்கை அல்ல, ஆனால் ஒரு முக்கிய செயல்முறை அளவுரு வடிவமைக்கப்பட வேண்டும், தரப்படுத்தப்பட்டது, மற்றும் கண்டிப்பாக கடைபிடிக்கப்படுகிறது. இது ஒரு சோதனையின் வெற்றியை மட்டுமல்ல, முழு ஆராய்ச்சி திட்டத்திற்கும் தரவு நம்பகத்தன்மை மற்றும் மறுஉருவாக்கம் ஆகியவற்றின் அடித்தளத்தையும் பாதுகாக்கிறது..

தி லிங்ஜுன் பயோ 220012 தொடர் உயர் செயல்திறன் சிலிக்கா அடிப்படையிலான காந்த மணிகள், அவற்றின் சிறந்த இடைநீக்க பண்புகள் மற்றும் சீரான மோனோடிஸ்பெர்சிட்டி, மென்மையான தலைகீழின் கீழ் விரைவான மற்றும் ஒரே மாதிரியான சிதறலை அடைகிறது, போதுமான கலவையை அடைவதற்கு தீவிரமான கிளர்ச்சியை நாட வேண்டிய அபாயத்தை கணிசமாகக் குறைக்கிறது. எங்கள் தயாரிப்பைத் தேர்ந்தெடுத்து, அதை இங்கே விவரிக்கப்பட்டுள்ள கடுமையான செயல்பாட்டு நெறிமுறைகளுடன் இணைப்பதன் மூலம், you will be able to maximize the protection of your precious sample integrity, ensuring that fragment selection technology delivers true, clear, and reproducible molecular information for your research.

சப்ளையர்

ஷாங்காய் லிங்ஜுன் பயோடெக்னாலஜி கோ., லிமிடெட்இல் நிறுவப்பட்டது 2016 உயிர் காந்த பொருட்கள் மற்றும் நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுக்கும் உலைகளின் தொழில்முறை உற்பத்தியாளர்.

நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுத்தல் மற்றும் சுத்திகரிப்பு ஆகியவற்றில் எங்களுக்கு சிறந்த அனுபவம் உள்ளது, புரத சுத்திகரிப்பு, செல் பிரிப்பு, இரசாயன ஒளிர்வு, மற்றும் பிற தொழில்நுட்ப துறைகள்.

எங்கள் தயாரிப்புகள் பல துறைகளில் பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன, மருத்துவ பரிசோதனை போன்றவை, மரபணு சோதனை, பல்கலைக்கழக ஆராய்ச்சி, மரபணு இனப்பெருக்கம், மற்றும் பல. நாங்கள் தயாரிப்புகளை வழங்குவது மட்டுமல்லாமல் OEM ஐயும் மேற்கொள்ள முடியும், ODM, மற்றும் பிற தேவைகள். உங்களுக்கு தொடர்புடைய தேவை இருந்தால், தயவு செய்து எங்களை தொடர்பு கொள்ளவும் .