Láimhseáil Mhilis: Bunlíne Neamh-idirbheartaithe maidir le Roghnú Fragment DNA

Brollach

I sreabhadh oibre roghnú blúire DNA coirníní maighnéadacha shilice, tá ceanglas contrártha de réir dealraimh ag oibreoirí: ní mór dóibh a chinntiú go ndéantar coirníní agus DNA a mheascadh go críochnúil chun iad a cheangal go héifeachtach agus iad á gcothabháil “uaisleacht mhór” ar fud chun aon chorraíl fhisiciúil bhríomhar a sheachaint. Is beag an tábhacht a bhaineann leis an dara ceann ag go leor turgnamh, ag smaoineamh air nach bhfuil ann ach gnáthchomhairle chun doirteadh a chosc. Mar sin féin, Léiríonn sonraí eolaíocha go soiléir gur ‘marfach ciúin é lomadh fisiciúil’ rud a fhágann go bhfuil cáilíocht an táirge roghnaithe díghrádaithe, torthaí do-atáirgthe, agus fiú teip turgnamhach. Scrúdóidh an t-alt seo na meicníochtaí móilíneacha bunúsacha agus soláthróidh sé sraith dhian de chaighdeáin oibriúcháin frith-fiaradh..

1. Croíphrionsabal Eolaíoch: Is Polaiméirí Líneacha Leochaileacha iad Móilíní DNA

Ní slat docht é DNA ach tá sé ann i dtuaslagán mar sholúbthacht, polaiméir slabhra fada i gcomhfhoirmiú corna randamach. A fhriotaíocht in aghaidh fórsaí lomadh sreabhán, cur síos orthu i dtéarmaí fisiceacha, ag brath ar a fhad marthanachta (thart 50 nm) agus a fhad comhrianta (fad iomlán).

Foinsí Fiarfhórsa: Oibríochtaí cosúil le vortexing bríomhar, píobaireacht thapa le asú láidir agus dáileadh, agus píbeáil arís agus arís eile trí leideanna míne pípéad (go háirithe le píobairí atá socraithe ar luas ard) gineann fórsaí cumhachtacha lannaithe nó lomadh suaite laistigh den leacht.

Meicníocht lomadh: Nuair a chuirtear grádán lomadh sreabhach i bhfeidhm ar réchúiseach, slabhra fada DNA, tarraingíonn codanna éagsúla den taithí slabhra i dtreonna difriúla agus ag luasanna éagsúla. Nuair a sháraíonn an fórsa teanntachta seo neart meicniúil an tslabhra DNA (go háirithe teorainn lamháltais na mbannaí fosfadiester), déantar briseadh neamhshonrach ar an slabhra ag na pointí is laige go meicniúil.

Fad-Cleithiúnaí leochaileacht: Dá fhaide an slabhra DNA, is ea is mó a gha hidridinimiciúil agus is mó an difreálach teannais a bhíonn aige i réimse sreafa lomadh, rud a fhágann go bhfuil sé níos so-ghabhálaí do lomadh. Blúire fada >10 Is féidir kb a lomadh i roinnt randamach 1-3 blúirí kb, agus fiú a 300 Is féidir spriocbhlúire bp a ghearradh ina phíosaí gearra gan úsáid.

2. Tionchar tubaisteach an lomadh ar Thorthaí Roghnú Fragóige

Is ionann lomadh neamhshonrach a thabhairt isteach i dturgnamh atá deartha chun DNA a roghnú de réir faid agus éilliú an tsampla ag a fhoinse. Tá na héifeachtaí sistéamach agus millteach:

2.1 Mír Sprioc “Imtharraingt” agus Aisghabháil Pluiméireachta

An blúire fad sonrach is mian leat a roghnú (e.g., 450 bp) féadfar é a scoilteadh go randamach le linn láimhseála, laghdú ar líon na móilíní sa raon méide sin. Léirítear é seo go díreach mar ráta téarnaimh i bhfad faoi bhun ionchais.

2.2 Díghrádú Íonachta Táirge agus Réiteach

Déantar neamhíonachtaí nua de na blúirí gearra randamacha a ghintear trí lomadh. Féadfaidh siad: A) Dul san iomaíocht le blúirí sprice do shuímh cheangailteach le linn roghnúcháin, cur isteach ar chinéitic gnáth-roghnaithe; b) A ghnóthú trí dhearmad toisc go bhféadfadh a gcuid fad a bheith laistigh den fhuinneog roghnaithe, as a dtiocfaidh dáileadh fad leathnaithe an táirge deiridh, cuma na beanna sprúis, bonnlíne ardaithe ar an leictreafeirgram, agus taifeach atá díghrádaithe go mór.

2.3 Athróg Neamh-Inrianaithe a thabhairt isteach, In-atáirgtheacht a scrios

Braitheann méid an lomadh go mór ar fhuinneamh an láimhseála sonrach, athróg atá deacair a chainníochtú agus a athraíonn ó dhuine go duine agus ó am go chéile. Bíonn difríochtaí dothuigthe i dtorthaí idir oibreoirí éagsúla mar thoradh air, nó fiú idir baisceanna éagsúla ag an oibreoir céanna, in-atáirgtheacht thurgnamhach a scrios go hiomlán agus gan ciall a bhaint as an leas iomlán a bhaint as anailís sonraí agus ina dhiaidh sin.

3. Oibríochtaí Ardriosca chun Prótacail Chaighdeánacha Láimhsithe a Sheachaint

Bunaithe ar na prionsabail thuas, bunaímid na treoirlínte éigeantacha oibríochta turgnamhacha seo a leanas:

3.1 Míreanna Toirmiscthe (Oibríochtaí Ardriosca):

Vortexing bríomhar: Toirmeasc go hiomlán ar mheascadh vortex feadáin ina bhfuil DNA nó coimpléisc DNA-bead.

Croitheadh ​​Ardluais/Fuinniúil: Ag baint úsáide as luasanna ró-ard rothlaithe (>1000 rpm) ar chroiteoir/meascthóir.

Píobaireacht Athdhéanta Éigeantach: Mear, asú láidir arís agus arís eile agus tip pípéad a dháileadh i gcoinne bhun an fheadáin nó isteach i mboilgeog leachta in iarracht é a mheascadh nó a athbhunú.

Ag Úsáid Leideanna Fíneála Caighdeánacha chun Samplaí Móra a Láimhseáil: Ag baint úsáide as uncut, leideanna míne pípéad chun coimpléisc DNA nó coirníní fada a phíobáil.

3.2 Prótacal Oibriúcháin Caighdeánach (Láimhseáil Mín SOP):

Oibríochtaí Measctha/Athghairme:

Modh Roghnaithe: Meascadh inbhéartaithe milis. Cuir caipín ar an bhfeadán go daingean agus déan go mall, aisiompuithe 180 céim arís agus arís eile de láimh nó ag baint úsáide as gléas.

Modh Malartach: Úsáid leathan-leamh (gearrtha) leideanna le haghaidh mall, meascán milis pípéad. Gearr amach deireadh caol an rinn pípéad le siosúr steiriúla chun Cró mór a chruthú, ansin asú go mall agus scaoil an leacht, ag seachaint foirmiú mboilgeog ar fud.

Oibríochtaí Píobaireachta:

Úsáid leathan-leamh (gearrtha) nó leideanna leathan-leamh-choinneála do gach céim.

Coigeartaigh Luas Pipettor: Socraigh píobairí leictreonacha nua-aimseartha chuig an socrú luais is moille le haghaidh mianaidhm agus dáileacháin araon.

Suimiú Mall ar feadh an Bhalla: Agus imoibrithe á gcur leis, ligean don sruth leachtach sreabhadh go mall síos balla an fheadáin, tionchar díreach ar an dromchla leachtach nó ar an mais coirníní millíní a sheachaint.

3.3 Nótaí Láimhseála Sonracha Coirníní:

Millíní Coirníní a Fhionraí: Tar éis an feadán a bhaint as an raca maighnéadach, má tá gá le coirníní a athchur le haghaidh níocháin, cuir maolán leis agus cuir ar fionraí trí inbhéartú mín nó trí mheascadh milis pípéad a bhfuil cur síos air thuas. Tá cosc ​​dian ar vortexing.

Supernatant a Aistriú: Tar éis scaradh ar an raca maighnéadach, nuair a aspirating an supernatant, coinnigh barr an phípéad ar shiúl ón millíní coirníní bailithe ionas nach dteagmháil leat ná cur isteach ar na coirníní.

4. Bailíochtú Casta: Conas a Dheimhnigh Má tá Do Láimhseáil Mhíle Go Leor?

Má tá amhras ort go raibh tionchar ag lomadh ar thorthaí san am atá caite, is féidir leat na turgnaimh bhailíochtaithe seo a leanas a dhéanamh:

4.1 Turgnamh Rialaithe:

Tóg an sampla DNA fadbhroinn céanna (e.g., DNA géanóm neamhroinnte ) agus scoilt ina dhá slánchuid é. Cuir méid amháin faoi réir an chaighdeáin “láimhseáil mhín” nósanna imeachta. Déan láimhseáil mhíchuí insamhlaithe ar an gceann eile (e.g., vortex arís agus arís eile). Ansin déan anailís ar an dá cheann ag an am céanna le Leictreafóiréis Glóthach Réimse Pulsed nó le hanailíseoir fadbhroinne ardtaifigh . Fianaise ar lomadh is ea smearadh infheicthe nó laghdú ar dhéine an phríomhbhanda.

4.2 Monatóireacht ar Phróifílí Táirge Roghnú

I dturgnaimh roghnúcháin ghnáthaimh, má léirítear go comhsheasmhach leictrifheargram an táirge deiridh gan mhíniú “cnapáin” nó ingearchló bunlíne sa réigiún gearr-bhroinn (e.g., <100 bp), Is é lomadh oibríoch an príomh-amhrastach tar éis deireadh a chur le héilliú einsímí agus imoibrí.

4.3 Conclúid: Ardaithe “Uaisle” ó Mholadh go Caighdeán Próiseas Éigeantach

I roghnú blúirí DNA agus go deimhin gach oibríocht a bhaineann le móilíní aigéid núicléacha slán, “uaisleacht” ní réamhchúram roghnach é ach paraiméadar croíphróisis nach mór a dhearadh, caighdeánaithe, agus cloítear go docht leis. Cosnaíonn sé ní hamháin rath aon turgnaimh amháin ach freisin bunsraith iontaofachta agus in-atáirgtheacht sonraí don tionscadal taighde ar fad..

Tá an Beathaisnéis Lingjun 220012 Sraith coirníní maighnéadacha shilice ardfheidhmíochta, lena n-airíonna fionraí den scoth agus monodispersity aonfhoirmeach, scaipeadh tapa agus aonchineálach a bhaint amach faoi inbhéartú mín, laghdú suntasach a dhéanamh ar an mbaol go gcaithfí dul i ngleic le corradh bríomhar chun meascadh leordhóthanach a bhaint amach. Trí ár dtáirge a roghnú agus é a chomhcheangal leis na prótacail oibríochta déine a thuairiscítear anseo, beidh tú in ann cosaint do shláine sampla luachmhar a uasmhéadú, ag cinntiú go mbíonn an teicneolaíocht roghnúcháin blúirí fíor, soiléir, agus faisnéis mhóilíneach in-atáirgthe le haghaidh do chuid taighde.

Soláthraí

Shanghai Lingjun Biteicneolaíocht Co., Teo.bunaíodh i 2016 atá ina mhonaróir gairmiúil d'ábhair bithmhaighnéadacha agus imoibrithe eastóscadh aigéid núicléacha.

Tá taithí shaibhir againn in eastóscadh agus íonú aigéad núicléasach, íonú próitéine, scaradh cille, ceimileacanacht, agus réimsí teicniúla eile.

Úsáidtear ár gcuid táirgí go forleathan i go leor réimsí, mar thástáil leighis, tástáil ghéiniteach, taighde ollscoile, pórú géiniteach, agus mar sin de. Ní chuirimid ar fáil ach táirgí ach freisin is féidir tabhairt faoi OEM, ODM, agus riachtanais eile. Má tá riachtanas gaolmhar agat, bíodh leisce ort teagmháil a dhéanamh linn .