Cén Fáth a Bhfuil Coigeartú pH Riachtanach in Eastóscadh DNA?

Tá pH an-tábhachtach in Eastóscadh DNA agus is iad seo a leanas na cúiseanna:

1. Cobhsaíocht DNA a Chothabháil

Fanann DNA measartha cobhsaí i dtuaslagáin a bhfuil pH níos mó ná 5 agus níos lú ná 9. Nuair a bhíonn an pH ró-ard (e.g., thuas 12) nó íseal (e.g., thíos 3), dícheangail na naisc hidrigine idir na snáitheanna dúbailte DNA, as a dtagann dínádúrú DNA. Mar shampla, Tá Maolán II 0.2 M NaOH in eastóscadh DNA plasmid, mar thoradh ar chóras pH de 12. 6, rud a chothaíonn dínádúrú DNA crómasómach agus plasmideach araon. Dá bharr sin, is gá an pH a choigeartú ar ais go neodracht sna céimeanna ina dhiaidh sin. Freastalaíonn sé seo ar dhá chuspóir: ar dtús, cuireann sé ar chumas an DNA plasmid dínádúraithe athdhúrú agus fanacht seasmhach; dara, giarálann sé an difríocht i méid blúirí idir DNA genomic agus DNA plasmid (le plasmids níos lú agus is dóichí go n-athleann siad isteach i dsDNA, agus gDNA, bheith ró-fhada, ní féidir é a athleanúint go hiomlán agus ina ionad sin éiríonn sé bhfostú, deascadh le coimpléisc próitéine SDS faoi thionchar tiúchan ard salainn i maolán III).

2. Díghrádú DNA a chosc

 Is féidir le EDTA ceangal le hiain mhiotail mar Mg²⁺ agus Ca²⁺ i láthair sa tuaslagán. Is comhfhachtóirí iad na hiain mhiotail seo do DNase. Cuireann EDTA bac ar ghníomhaíocht DNA, rud a chuireann cosc ​​ar dhíghrádú DNA trí na hiain mhiotail seo a chealú.

3. Éifeachtúlacht Eastósctha a Bharrfheabhsú

Tá sé léirithe ag taighde gurb é 7.4 an pH is fearr le haghaidh eastóscadh DNA. Uasmhéadaítear toradh eastósctha DNA nuair a bhíonn maolán le pH 7 aige. 4. Dá mhéad a chlaonann an pH ón luach seo, dá ísle an toradh astarraingthe DNA. Mar shampla, an toradh astarraingthe DNA ag pH 7.4 tá 1.09, 1.03, 1.06, agus 1.11 uaireanta atá ag pH 7.2, 7.6, 7.8, agus 8.0, faoi ​​seach.

Ceangal Aigéad Núicléach le Coirníní Maighnéadacha a éascú: Is féidir le pH cuí ceangal aigéid núicléacha le coirníní maighnéadacha a chur chun cinn i modhanna eastósctha DNA coirníní maighnéadacha. Is féidir le maolán ceangailteach ard-salann na luchtanna diúltacha a bhíonn ag aigéid núicléacha a neodrú, laghdú ar an éar leictreastatach idir aigéid núicléacha agus coirníní maighnéadacha, rud a éascaíonn asaithe aigéid núicléacha ar dhromchla na gcoirníní.

4. Gníomhaíocht Lysosym a Chosaint

Úsáidtear lysosym le linn DNA plasmid a bhaint as baictéir Gram-dearfach. Is hidrealas gliocóisíde é líseasím a fhéadann an β-1 a hidrealú, 4 bannaí glycosidic i peptidoglycan, an phríomh-chomhpháirt cheimiceach den bhalla cille G⁺ baictéir, ar an mbealach sin ag feidhmiú éifeacht lytic. Cuirtear bac ar ghníomhaíocht lísisím nuair a bhíonn pH an mhaoláin níos lú ná 8. Dá bhrí sin, tá sé riachtanach pH cuí a choinneáil chun gníomhaíocht lísímíme a chinntiú.

5. Éifeachtúlacht Elution a Fheabhsú

Cuireann pH an mhaoláin elution isteach go mór ar éifeachtúlacht an elution DNA. Ba cheart pH an mhaoláin elution a choinneáil idir 7.0 agus 8.5 a chinntiú go bhfuil DNA eluted go hiomlán. Laghdóidh pH atá ró-íseal an éifeachtúlacht elution.

Go hachomair, tá coigeartú pH ríthábhachtach sa phróiseas eastósctha DNA. Ní hamháin go gcabhraíonn sé le cobhsaíocht DNA a chothabháil agus le díghrádú a chosc ach cuireann sé an éifeachtúlacht eastósctha is fearr leis freisin, cosnaíonn sé gníomhaíocht na n-einsímí ábhartha, agus déanann sé coinníollacha elution a bharrfheabhsú.

Soláthraí

Shanghai Lingjun Biteicneolaíocht Co., Teo.bunaíodh i 2016 atá ina mhonaróir gairmiúil d'ábhair bithmhaighnéadacha agus imoibrithe eastóscadh aigéid núicléacha.

Tá taithí shaibhir againn in eastóscadh agus íonú aigéad núicléasach, íonú próitéine, scaradh cille, ceimileacanacht, agus réimsí teicniúla eile.

Úsáidtear ár gcuid táirgí go forleathan i go leor réimsí, mar thástáil leighis, tástáil ghéiniteach, taighde ollscoile, pórú géiniteach, agus mar sin de. Ní chuirimid ar fáil ach táirgí ach freisin is féidir tabhairt faoi OEM, ODM, agus riachtanais eile. Má tá riachtanas gaolmhar agat, bíodh leisce ort teagmháil a dhéanamh linn agdíolacháin01@lingjunbio.com.