Почему необходима корректировка pH при экстракции ДНК?

pH очень важен при экстракции ДНК, и причины заключаются в следующем.:

1. Поддержание стабильности ДНК

ДНК остается относительно стабильной в растворах с pH выше 5 и меньше чем 9. Когда pH слишком высокий (например, выше 12) или низкий (например, ниже 3), водородные связи между двойными цепями ДНК диссоциируют, приводит к денатурации ДНК. Например, Буфер II содержит 0.2 M NaOH при экстракции плазмидной ДНК, в результате чего pH системы 12. 6, который индуцирует денатурацию как хромосомной, так и плазмидной ДНК.. Следовательно, на последующих этапах необходимо довести pH до нейтрального значения.. Это служит двум целям: первый, это позволяет денатурированной плазмидной ДНК ренатурировать и оставаться стабильной; второй, он использует разницу в размере фрагментов между геномной ДНК и плазмидной ДНК. (при этом плазмиды меньше по размеру и с большей вероятностью повторно отжигаются в дцДНК, в то время как гДНК, быть слишком длинным, не может полностью отжечься и вместо этого запутывается, осаждающиеся комплексами ДСН-белок под действием высоких концентраций солей в буфере III).

2. Предотвращение деградации ДНК

 ЭДТА может связываться с ионами металлов, таких как Mg²⁺ и Ca²⁺, присутствующими в растворе.. Эти ионы металлов являются кофакторами ДНКазы.. ЭДТА ингибирует активность ДНКазы, тем самым предотвращая деградацию ДНК путем хелатирования этих ионов металлов..

3. Оптимизация эффективности добычи

Исследования показали, что оптимальный pH для экстракции ДНК составляет 7,4. Выход экстракции ДНК максимизируется при использовании буфера с pH 7.. 4. Чем дальше pH отклоняется от этого значения, тем ниже выход экстракции ДНК. Например, выход экстракции ДНК при pH 7.4 является 1.09, 1.03, 1.06, и 1.11 раз больше, чем при pH 7,2, 7.6, 7.8, и 8.0, соответственно.

Облегчение связывания нуклеиновой кислоты с магнитными шариками: Соответствующий pH может способствовать связыванию нуклеиновых кислот с магнитными шариками в методах экстракции ДНК на основе магнитных шариков.. Связывающий буфер с высоким содержанием соли может нейтрализовать отрицательные заряды нуклеиновых кислот., уменьшение электростатического отталкивания между нуклеиновыми кислотами и магнитными шариками, тем самым облегчая адсорбцию нуклеиновых кислот на поверхности гранул..

4. Защита активности лизоцима

Лизоцим используется при экстракции плазмидной ДНК из грамположительных бактерий.. Лизоцим представляет собой гликозидгидролазу, которая гидролизует β-1., 4 гликозидные связи в пептидогликанах, основной химический компонент клеточной стенки G⁺ бактерии, тем самым оказывая литический эффект. Активность лизоцима ингибируется, когда pH буфера меньше 8. Поэтому, важно поддерживать соответствующий уровень pH для обеспечения активности лизоцима..

5. Повышение эффективности элюирования

pH элюирующего буфера существенно влияет на эффективность элюирования ДНК.. рН элюирующего буфера следует поддерживать в пределах 7.0 и 8.5 чтобы гарантировать, что ДНК полностью элюируется. Слишком низкий pH снизит эффективность элюирования..

В итоге, регулировка pH имеет решающее значение в процессе экстракции ДНК. Это не только помогает поддерживать стабильность ДНК и предотвращать деградацию, но также оптимизирует эффективность экстракции., защищает активность соответствующих ферментов, и оптимизирует условия элюирования.

Поставщик

Шанхайская биотехнологическая компания Линцзюнь., ОООбыл создан в 2016 который является профессиональным производителем биомагнитных материалов и реагентов для экстракции нуклеиновых кислот..

Мы имеем богатый опыт в экстракции и очистке нуклеиновых кислот., очистка белка, разделение клеток, хемилюминесценция, и другие технические области.

Наша продукция широко используется во многих областях., например, медицинское тестирование, генетическое тестирование, университетские исследования, генетическое разведение, и так далее. Мы не только поставляем продукцию, но и можем взять на себя OEM, ОДМ, и другие потребности. Если у вас есть соответствующая потребность, пожалуйста, не стесняйтесь обращаться к нам по адресуsales01@lingjunbio.com.