DNA 추출에 pH 조정이 필요한 이유?

DNA 추출에 있어 pH는 매우 중요하며 그 이유는 다음과 같습니다.:

1. DNA 안정성 유지

DNA는 pH가 다음보다 큰 용액에서 상대적으로 안정하게 유지됩니다. 5 그리고 미만 9. pH가 지나치게 높을 때 (예를 들어, ~ 위에 12) 또는 낮음 (예를 들어, 아래에 3), DNA 이중 가닥 사이의 수소 결합이 해리됩니다, DNA 변성을 초래. 예를 들어, 버퍼 II에는 다음이 포함됩니다. 0.2 플라스미드 DNA 추출 중 M NaOH, 결과적으로 시스템 pH는 다음과 같습니다. 12. 6, 염색체와 플라스미드 DNA 모두의 변성을 유도합니다.. 따라서, 후속 단계에서 pH를 다시 ​​중성으로 조정해야 합니다.. 이는 두 가지 목적으로 사용됩니다.: 첫 번째, 변성된 플라스미드 DNA가 재생되고 안정적으로 유지되도록 합니다.; 두번째, 게놈 DNA와 플라스미드 DNA 사이의 단편 크기 차이를 활용합니다. (플라스미드는 더 작고 dsDNA로 다시 어닐링될 가능성이 더 높습니다., gDNA 동안, 너무 길다, 완전히 다시 어닐링할 수 없고 대신 얽히게 됩니다., 완충액 III의 높은 염 농도의 영향으로 SDS-단백질 복합체로 침전).

2. DNA 분해 방지

 EDTA는 용액에 존재하는 Mg²⁺ 및 Ca²⁺와 같은 금속 이온과 결합할 수 있습니다.. 이 금속 이온은 DNase의 보조 인자입니다.. EDTA는 DNase의 활성을 억제합니다., 금속 이온을 킬레이트화하여 DNA 분해를 방지합니다..

3. 추출 효율성 최적화

연구에 따르면 DNA 추출을 위한 최적의 pH는 7.4입니다. pH 7로 완충 시 DNA 추출 수율 극대화. 4. pH가 이 값에서 멀어질수록, DNA 추출 수율이 낮을수록. 예를 들어, pH에서의 DNA 추출 수율 7.4 ~이다 1.09, 1.03, 1.06, 그리고 1.11 pH 7.2에서는 그 두 배, 7.6, 7.8, 그리고 8.0, 각기.

자기 비드에 대한 핵산 결합 촉진: 적절한 pH는 자기 비드 기반 DNA 추출 방법에서 핵산과 자기 비드의 결합을 촉진할 수 있습니다.. 고염 결합 완충액은 핵산의 음전하를 중화할 수 있습니다., 핵산과 자성비드 사이의 정전기적 반발력 감소, 이를 통해 비드 표면에 핵산의 흡착을 촉진합니다..

4. 라이소자임 활동 보호

라이소자임은 그람 양성균에서 플라스미드 DNA를 추출하는 동안 활용됩니다.. 리소자임은 β-1을 가수분해할 수 있는 배당체 가수분해효소입니다., 4 펩티도글리칸의 글리코시드 결합, G 세포벽의 주요 화학 성분⁺ 박테리아, 이를 통해 용해 효과를 발휘합니다.. 완충액의 pH가 다음보다 낮으면 라이소자임의 활성이 억제됩니다. 8. 그러므로, 리소자임의 활성을 보장하려면 적절한 pH를 유지하는 것이 필수적입니다..

5. 용출 효율성 향상

용출 완충액의 pH는 DNA 용출 효율에 큰 영향을 미칩니다.. 용출 완충액의 pH는 다음과 같이 유지되어야 합니다. 7.0 그리고 8.5 DNA가 완전히 용출되었는지 확인하기 위해. pH가 너무 낮으면 용출 효율이 감소합니다..

요약하면, pH 조정은 DNA 추출 과정에서 매우 중요합니다.. DNA의 안정성을 유지하고 분해를 방지하는데 도움을 줄 뿐만 아니라 추출 효율을 최적화합니다., 관련 효소의 활성을 보호합니다., 용출 조건을 최적화합니다..

공급자

상하이 링쥔 생명공학 유한회사, 주식회사에 설립되었습니다 2016 생체자성재료 및 핵산추출시약 전문제조업체입니다..

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