Waarom is pH-aanpassing nodig bij DNA-extractie??

pH is erg belangrijk bij DNA-extractie en de redenen zijn als volgt:

1. Behoud van DNA-stabiliteit

DNA blijft relatief stabiel in oplossingen met een pH groter dan 5 en minder dan 9. Wanneer de pH te hoog is (bijv., boven 12) of laag (bijv., onderstaand 3), de waterstofbruggen tussen de dubbele DNA-strengen zullen dissociëren, wat leidt tot DNA-denaturatie. Bijvoorbeeld, Buffer II bevat 0.2 M NaOH bij plasmide-DNA-extractie, resulterend in een systeem-pH van 12. 6, wat denaturatie van zowel chromosomaal als plasmide-DNA induceert. Vervolgens, het is noodzakelijk om de pH in volgende stappen weer neutraal te maken. Dit dient twee doelen: Eerst, het zorgt ervoor dat het gedenatureerde plasmide-DNA kan renatureren en stabiel blijft; seconde, het maakt gebruik van het verschil in fragmentgrootte tussen genomisch DNA en plasmide-DNA (waarbij plasmiden kleiner zijn en het waarschijnlijker is dat ze opnieuw in dsDNA versmelten, terwijl gDNA, te lang zijn, kan niet volledig opnieuw uitharden en raakt in plaats daarvan verstrikt, het neerslaan met SDS-eiwitcomplexen onder invloed van hoge zoutconcentraties in buffer III).

2. Voorkomen van DNA-degradatie

 EDTA kan zich binden aan metaalionen zoals Mg²⁺ en Ca²⁺ die in de oplossing aanwezig zijn. Deze metaalionen zijn cofactoren voor DNase. EDTA remt de activiteit van DNase, waardoor de afbraak van DNA wordt voorkomen door deze metaalionen te cheleren.

3. Optimalisatie van de extractie-efficiëntie

Onderzoek heeft aangetoond dat de optimale pH voor DNA-extractie 7,4 is. De opbrengst aan DNA-extractie wordt gemaximaliseerd bij buffer met pH 7. 4. Hoe verder de pH afwijkt van deze waarde, hoe lager de opbrengst van de DNA-extractie. Bijvoorbeeld, de DNA-extractieopbrengst bij pH 7.4 is 1.09, 1.03, 1.06, En 1.11 maal zo hoog als bij pH 7,2, 7.6, 7.8, En 8.0, respectievelijk.

Vergemakkelijking van de binding van nucleïnezuren aan magnetische kralen: Een geschikte pH kan de binding van nucleïnezuren aan magnetische kralen bevorderen bij op magnetische kralen gebaseerde DNA-extractiemethoden. Een buffer met een hoog zoutgehalte kan de negatieve ladingen van nucleïnezuren neutraliseren, het verminderen van de elektrostatische afstoting tussen nucleïnezuren en magnetische kralen, waardoor de adsorptie van nucleïnezuren op het oppervlak van de kralen wordt vergemakkelijkt.

4. Lysozymactiviteit beschermen

Lysozym wordt gebruikt tijdens de extractie van plasmide-DNA uit Gram-positieve bacteriën. Lysozym is een glycosidehydrolase dat de β-1 kan hydrolyseren, 4 glycosidische bindingen in peptidoglycaan, de belangrijkste chemische component van de celwand van G⁺ bacteriën, waardoor een lytisch effect wordt uitgeoefend. De activiteit van lysozym wordt geremd wanneer de pH van de buffer lager is dan 8. Daarom, het is essentieel om een ​​geschikte pH te handhaven om de activiteit van lysozym te garanderen.

5. Verbetering van de elutie-efficiëntie

De pH van de elutiebuffer heeft een significante invloed op de efficiëntie van DNA-elutie. De pH van de elutiebuffer moet tussen 7.0 En 8.5 om ervoor te zorgen dat DNA volledig wordt geëlueerd. Een te lage pH zal de elutie-efficiëntie verminderen.

Samengevat, de aanpassing van de pH is cruciaal in het DNA-extractieproces. Het helpt niet alleen de stabiliteit van DNA te behouden en afbraak te voorkomen, maar optimaliseert ook de extractie-efficiëntie, beschermt de activiteit van relevante enzymen, en optimaliseert de elutieomstandigheden.

Leverancier

Shanghai Lingjun Biotechnologie Co., Ltd.werd opgericht in 2016 dat een professionele fabrikant is van biomagnetische materialen en reagentia voor nucleïnezuurextractie.

We hebben een rijke ervaring in de extractie en zuivering van nucleïnezuren, eiwit zuivering, cel scheiding, chemiluminescentie, en andere technische gebieden.

Onze producten worden op veel gebieden veel gebruikt, zoals medische testen, genetische testen, universitair onderzoek, genetische veredeling, enzovoort. Wij leveren niet alleen producten, maar kunnen ook OEM ondernemen, ODM, en andere behoeften. Als u een gerelateerde behoefte heeft, neem dan gerust contact met ons op viasales01@lingjunbio.com.