DNA抽出にpH調整が必要な理由?

DNA 抽出において pH は非常に重要であり、その理由は次のとおりです。:

1. DNAの安定性の維持

DNA は、pH が 5 未満 9. pHが高すぎる場合 (例えば, その上 12) または低い (例えば, 下に 3), DNA二本鎖間の水素結合が解離します。, DNA変性を引き起こす. 例えば, バッファー II には次のものが含まれます。 0.2 プラスミド DNA 抽出における M NaOH, その結果、システムの pH は次のようになります。 12. 6, 染色体 DNA とプラスミド DNA の両方の変性を誘発します。. その結果, 後続のステップで pH を中性に戻す必要があります。. これには 2 つの目的があります: 初め, 変性したプラスミド DNA が復元され、安定した状態を維持できるようになります。; 2番, ゲノム DNA とプラスミド DNA の断片サイズの違いを利用します。 (プラスミドが小さくなり、dsDNAに再アニーリングしやすくなります, 一方、gDNA, 長すぎる, 完全に再焼きなましできず、絡み合ってしまう, 緩衝液III中の高塩濃度の影響下でSDS-タンパク質複合体を沈殿させる).

2. DNA分解の防止

 EDTA は、溶液中に存在する Mg2+ や Ca2+ などの金属イオンに結合します。. これらの金属イオンは DNase の補因子です. EDTAはDNaseの活性を阻害します, これらの金属イオンをキレート化することで DNA の分解を防ぎます。.

3. 抽出効率の最適化

研究によると、DNA 抽出に最適な pH は 7.4 です。 DNA 抽出収量は、pH 7 の緩衝液で最大化されます。. 4. pHがこの値から離れるほど、, DNA抽出収量が低くなるほど. 例えば, pHでのDNA抽出収量 7.4 は 1.09, 1.03, 1.06, そして 1.11 pH 7.2の場合の2倍, 7.6, 7.8, そして 8.0, それぞれ.

磁性ビーズへの核酸結合の促進: 適切な pH は、磁気ビーズベースの DNA 抽出法における磁気ビーズへの核酸の結合を促進します。. 高塩結合バッファーは核酸の負電荷を中和することができます, 核酸と磁性ビーズ間の静電反発を軽減します。, それにより、ビーズの表面への核酸の吸着が促進されます。.

4. リゾチーム活性の保護

リゾチームはグラム陽性菌からプラスミド DNA を抽出する際に利用されます。. リゾチームは、β-1 を加水分解できるグリコシド加水分解酵素です。, 4 ペプチドグリカンのグリコシド結合, G の細胞壁の主な化学成分⁺ 細菌, それによって溶解効果を発揮します. リゾチームの活性は、緩衝液のpHが以下の場合に阻害されます。 8. したがって, リゾチームの活性を確保するには適切なpHを維持することが不可欠です.

5. 溶出効率の向上

溶出バッファーの pH は DNA 溶出効率に大きく影響します。. 溶出バッファーの pH は、 7.0 そして 8.5 DNAが完全に溶出されるようにするため. pHが低すぎると溶出効率が低下します.

要約すれば, DNA抽出プロセスではpHの調整が重要です. DNAの安定性を維持し、分解を防ぐだけでなく、抽出効率を最適化します。, 関連する酵素の活性を保護します, 溶出条件を最適化します.

サプライヤー

上海霊軍生物技術有限公司, 株式会社に設立されました 2016 生体磁性材料と核酸抽出試薬の専門メーカーです.

核酸抽出・精製の経験が豊富です。, タンパク質の精製, 細胞分離, 化学発光, その他の技術分野.

当社の製品はさまざまな分野で広く使用されています, 医療検査など, 遺伝子検査, 大学の研究, 遺伝子育種, 等々. 製品のご提供だけでなくOEMも承ります, ODM, その他のニーズ. 関連するニーズがある場合, お気軽にお問い合わせください。sales01@lingjunbio.com.