Firwat ass pH Upassung noutwendeg an der DNA Extraktioun?

pH ass ganz wichteg an der DNA Extraktioun an d'Grënn sinn wéi follegt:

1. Erhalen DNA Stabilitéit

DNA bleift relativ stabil a Léisungen mat engem pH méi héich wéi 5 a manner wéi 9. Wann de pH exzessiv héich ass (z.B., uewen 12) oder niddereg (z.B., ënnendrënner 3), d'Waasserstoffverbindungen tëscht den DNA Duebelstrengen trennen sech, féiert zu DNA Denaturatioun. Zum Beispill, Buffer II enthält 0.2 M NaOH an der Plasmid DNA Extraktioun, doraus zu engem System pH vun 12. 6, déi Denaturatioun vu béid chromosomaler a Plasmid DNA induzéiert. Konsequent, et ass néideg fir de pH an de folgende Schrëtt zréck op Neutralitéit unzepassen. Dëst déngt zwee Zwecker: éischten, et erlaabt d'denaturéiert Plasmid DNA ze renaturéieren a stabil ze bleiwen; zweeten, et profitéiert den Ënnerscheed an der Fragmentgréisst tëscht genomesch DNA a Plasmid DNA (mat Plasmiden déi méi kleng sinn a méi wahrscheinlech an dsDNA reanneal, iwwerdeems gDNA, ze laang sinn, kann net komplett reanneal an amplaz gëtt entangled, Ausfällung mat SDS-Protein-Komplexen ënner dem Afloss vun héije Salzkonzentratioune am Puffer III).

2. Präventioun vun DNA Degradatioun

 EDTA kann u Metallionen binden wéi Mg²⁺a Ca²⁺ present an der Léisung. Dës Metallione si Kofaktoren fir DNase. EDTA hemmt d'Aktivitéit vun DNase, doduerch verhënnert d'Degradatioun vun DNA andeems dës Metallionen chelatéieren.

3. Optimiséierung vun der Extraktiounseffizienz

Fuerschung huet gewisen datt den optimale pH fir DNA Extraktioun 7,4 ass. DNA Extraktioun Ausbezuele gëtt maximéiert wann Puffer mam pH 7. 4. Wat méi de pH vun dësem Wäert ofwäit, wat méi niddereg ass d'DNA-Extraktiounsausbezuelung. Zum Beispill, d'DNA Extraktioun Ausbezuele bei pH 7.4 ass 1.09, 1.03, 1.06, an 1.11 Mol dat bei pH 7,2, 7.6, 7.8, an 8.0, respektiv.

Erliichtert d'Nukleinsäurebindung mat magnetesche Perlen: E passende pH kann d'Bindung vun Nukleinsäuren u magnetesche Perlen a magnetesche Perle-baséiert DNA Extraktiounsmethoden förderen. En héije Salzbindende Puffer kann déi negativ Ladungen vun Nukleinsäuren neutraliséieren, Reduktioun vun der elektrostatescher Repulsioun tëscht Nukleinsäuren a magnetesche Perlen, doduerch d'Adsorptioun vun Nukleinsäuren op d'Uewerfläch vun de Perlen erliichtert.

4. Schützen Lysozym Aktivitéit

Lysozym gëtt während der Extraktioun vu Plasmid DNA aus Gram-positive Bakterien benotzt. Lysozym ass eng Glycosidhydrolase déi den β-1 hydrolyséiere kann, 4 glycosidic Bindungen am peptidoglycan, den Haaptchemesche Bestanddeel vun der Zellmauer vum G⁺ Bakterien, doduerch e lyteschen Effekt ausüben. D'Aktivitéit vum Lysozym gëtt hemmt wann de pH vum Puffer manner ass wéi 8. Dofir, et ass essentiell fir e passende pH z'erhalen fir d'Aktivitéit vum Lysozym ze garantéieren.

5. Verbesserung vun der Elutiounseffizienz

Den pH vum Elutiounsbuffer beaflosst wesentlech d'Effizienz vun der DNA Elutioun. De pH vum Elutiounsbuffer soll tëscht erhale bleiwen 7.0 an 8.5 fir sécherzestellen datt d'DNA komplett eluéiert gëtt. E pH deen ze niddreg ass reduzéiert d'Elutiounseffizienz.

Am Resumé, d'Upassung vum pH ass entscheedend am DNA Extraktiounsprozess. Et hëlleft net nëmmen d'Stabilitéit vun der DNA z'erhalen an d'Degradatioun ze verhënneren, awer och d'Extraktiounseffizienz optiméiert, schützt d'Aktivitéit vun relevante Enzymen, an optimiséiert elution Konditiounen.

Fournisseur

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd., Ltd.gouf etabléiert an 2016 deen e professionnelle Hiersteller vu biomagnetesche Materialien an Nukleinsäure Extraktiounsreagenz ass.

Mir hu räich Erfahrung an Nukleinsäure Extraktioun an Offäll, Protein Reinigung, Zell Trennung, Chemilumineszenz, an aner technesch Beräicher.

Eis Produkter gi wäit a ville Beräicher benotzt, wéi medizinesch Tester, genetesch Tester, Universitéit Fuerschung, genetesch Zucht, an esou weider. Mir bidden net nëmmen Produkter, awer och kënnen OEM ënnerhuelen, ODM, an aner Besoinen. Wann Dir e verbonne Besoin hutt, weg fillen gratis eis ze kontaktéieren umsales01@lingjunbio.com.