டிஎன்ஏ பிரித்தெடுத்தலில் pH சரிசெய்தல் ஏன் அவசியம்??

டிஎன்ஏ பிரித்தெடுப்பதில் pH மிகவும் முக்கியமானது மற்றும் காரணங்கள் பின்வருமாறு:

1. டிஎன்ஏ நிலைத்தன்மையை பராமரித்தல்

டிஎன்ஏ, pH ஐ விட அதிகமான கரைசல்களில் ஒப்பீட்டளவில் நிலையானதாக இருக்கும் 5 மற்றும் குறைவாக 9. pH அதிகமாக இருக்கும்போது (எ.கா., மேலே 12) அல்லது குறைந்த (எ.கா., கீழே 3), டிஎன்ஏ இரட்டை இழைகளுக்கு இடையே உள்ள ஹைட்ரஜன் பிணைப்புகள் பிரிக்கப்படும், டிஎன்ஏ டினாட்டரேஷனுக்கு வழிவகுக்கிறது. உதாரணமாக, பஃபர் II கொண்டுள்ளது 0.2 பிளாஸ்மிட் டிஎன்ஏ பிரித்தெடுத்தலில் M NaOH, இதன் விளைவாக ஒரு அமைப்பு pH 12. 6, இது குரோமோசோமால் மற்றும் பிளாஸ்மிட் டிஎன்ஏ இரண்டின் சிதைவைத் தூண்டுகிறது. இதன் விளைவாக, அடுத்த படிகளில் pH ஐ நடுநிலைக்கு மாற்றுவது அவசியம். இது இரண்டு நோக்கங்களுக்காக உதவுகிறது: முதலில், இது சிதைக்கப்பட்ட பிளாஸ்மிட் டிஎன்ஏவை மீண்டும் உருவாக்கி நிலையானதாக இருக்க அனுமதிக்கிறது; இரண்டாவது, இது ஜீனோமிக் டிஎன்ஏ மற்றும் பிளாஸ்மிட் டிஎன்ஏ ஆகியவற்றுக்கு இடையே உள்ள துண்டு அளவு வித்தியாசத்தை மேம்படுத்துகிறது (பிளாஸ்மிட்கள் சிறியதாகவும், dsDNA யில் மீண்டும் இணைவதற்கான வாய்ப்புகள் அதிகம், ஜி.டி.என்.ஏ, மிக நீளமாக இருப்பது, முழுமையாக மறுசீரமைக்க முடியாது, மாறாக சிக்கலாகிவிடும், இடையக III இல் அதிக உப்பு செறிவுகளின் செல்வாக்கின் கீழ் SDS-புரத வளாகங்களுடன் வீழ்படிதல்).

2. டிஎன்ஏ சிதைவைத் தடுக்கும்

 EDTA கரைசலில் இருக்கும் Mg²⁺ மற்றும் Ca²⁺ போன்ற உலோக அயனிகளுடன் பிணைக்க முடியும்.. இந்த உலோக அயனிகள் DNaseக்கான இணை காரணிகள். EDTA DNase இன் செயல்பாட்டைத் தடுக்கிறது, அதன் மூலம் இந்த உலோக அயனிகளை செலேட் செய்வதன் மூலம் டிஎன்ஏவின் சிதைவைத் தடுக்கிறது.

3. பிரித்தெடுத்தல் திறனை மேம்படுத்துதல்

டிஎன்ஏ பிரித்தெடுப்பதற்கான உகந்த pH 7.4 என்று ஆராய்ச்சி காட்டுகிறது. டிஎன்ஏ பிரித்தெடுத்தல் விளைச்சல் pH 7 உடன் தாங்கும் போது அதிகபட்சமாக இருக்கும். 4. மேலும் pH இந்த மதிப்பிலிருந்து விலகுகிறது, குறைந்த DNA பிரித்தெடுத்தல் விளைச்சல். உதாரணமாக, pH இல் DNA பிரித்தெடுத்தல் விளைச்சல் 7.4 உள்ளது 1.09, 1.03, 1.06, மற்றும் 1.11 pH 7.2 ஐ விட மடங்கு, 7.6, 7.8, மற்றும் 8.0, முறையே.

காந்த மணிகளுடன் நியூக்ளிக் அமிலம் பிணைப்பை எளிதாக்குகிறது: காந்த மணிகள் அடிப்படையிலான டிஎன்ஏ பிரித்தெடுக்கும் முறைகளில் நியூக்ளிக் அமிலங்களை காந்த மணிகளுடன் பிணைப்பதை பொருத்தமான pH ஊக்குவிக்கும்.. அதிக உப்பு பிணைப்பு தாங்கல் நியூக்ளிக் அமிலங்களின் எதிர்மறை கட்டணங்களை நடுநிலையாக்குகிறது, நியூக்ளிக் அமிலங்கள் மற்றும் காந்த மணிகள் இடையே மின்னியல் விலக்கத்தை குறைக்கிறது, இதன் மூலம் மணிகளின் மேற்பரப்பில் நியூக்ளிக் அமிலங்களின் உறிஞ்சுதலை எளிதாக்குகிறது.

4. லைசோசைம் செயல்பாட்டைப் பாதுகாத்தல்

கிராம்-பாசிட்டிவ் பாக்டீரியாவிலிருந்து பிளாஸ்மிட் டிஎன்ஏவை பிரித்தெடுக்கும் போது லைசோசைம் பயன்படுத்தப்படுகிறது. லைசோசைம் என்பது கிளைகோசைட் ஹைட்ரோலேஸ் ஆகும், இது β-1 ஐ ஹைட்ரோலைஸ் செய்ய முடியும், 4 பெப்டிடோக்ளிகானில் உள்ள கிளைகோசிடிக் பிணைப்புகள், ஜி செல் சுவரின் முக்கிய வேதியியல் கூறு⁺ பாக்டீரியா, அதன் மூலம் லைடிக் விளைவை ஏற்படுத்துகிறது. இடையகத்தின் pH ஐ விட குறைவாக இருக்கும்போது லைசோசைமின் செயல்பாடு தடுக்கப்படுகிறது 8. எனவே, லைசோசைமின் செயல்பாட்டை உறுதி செய்ய பொருத்தமான pH ஐ பராமரிப்பது அவசியம்.

5. எலுஷன் திறனை மேம்படுத்துதல்

எலுஷன் பஃப்பரின் pH டிஎன்ஏ எலுஷனின் செயல்திறனை கணிசமாக பாதிக்கிறது. எலுஷன் பஃப்பரின் பிஎச் இடையே பராமரிக்கப்பட வேண்டும் 7.0 மற்றும் 8.5 டிஎன்ஏ முழுமையாக நீக்கப்படுவதை உறுதி செய்ய. மிகக் குறைவான pH, நீக்கும் திறனைக் குறைக்கும்.

சுருக்கமாக, டிஎன்ஏ பிரித்தெடுத்தல் செயல்பாட்டில் pH இன் சரிசெய்தல் முக்கியமானது. இது டிஎன்ஏவின் நிலைத்தன்மையை பராமரிக்கவும், சிதைவைத் தடுக்கவும் உதவுவது மட்டுமல்லாமல் பிரித்தெடுக்கும் திறனை மேம்படுத்துகிறது., தொடர்புடைய நொதிகளின் செயல்பாட்டைப் பாதுகாக்கிறது, மற்றும் நீக்குதல் நிலைமைகளை மேம்படுத்துகிறது.

சப்ளையர்

ஷாங்காய் லிங்ஜுன் பயோடெக்னாலஜி கோ., லிமிடெட்இல் நிறுவப்பட்டது 2016 உயிர் காந்த பொருட்கள் மற்றும் நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுக்கும் உலைகளின் தொழில்முறை உற்பத்தியாளர்.

நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுத்தல் மற்றும் சுத்திகரிப்பு ஆகியவற்றில் எங்களுக்கு சிறந்த அனுபவம் உள்ளது, புரத சுத்திகரிப்பு, செல் பிரிப்பு, இரசாயன ஒளிர்வு, மற்றும் பிற தொழில்நுட்ப துறைகள்.

எங்கள் தயாரிப்புகள் பல துறைகளில் பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன, மருத்துவ பரிசோதனை போன்றவை, மரபணு சோதனை, பல்கலைக்கழக ஆராய்ச்சி, மரபணு இனப்பெருக்கம், மற்றும் பல. நாங்கள் தயாரிப்புகளை வழங்குவது மட்டுமல்லாமல் OEM ஐயும் மேற்கொள்ள முடியும், ODM, மற்றும் பிற தேவைகள். உங்களுக்கு தொடர்புடைய தேவை இருந்தால், தயவு செய்து எங்களை தொடர்பு கொள்ளவும்sales01@lingjunbio.com.