Kepentingan penulenan produk PCR

PCR adalah singkatan dari Polymerase Chain Reaction, teknik biologi molekul yang digunakan untuk menguatkan spesifik Serpihan DNA. Produk PCR umumnya tidak boleh digunakan terus untuk eksperimen hiliran dan perlu ditulenkan terlebih dahulu untuk memastikan keberkesanan dan ketepatan langkah eksperimen seterusnya. Secara khusus, terdapat beberapa sebab untuk ini:

1.Penyingkiran primer tambahan dan dNTP

Semasa proses PCR, lebihan primer dan dNTP biasanya ditambah untuk memastikan tindak balas berjalan sepenuhnya. Namun begitu, selepas PCR selesai, komponen yang tidak bertindak balas ini, jika terdapat dalam produk akhir, boleh mengganggu permohonan seterusnya. Contohnya, primer yang berlebihan boleh menyebabkan isyarat tidak khusus semasa penjujukan, dan sisa dNTP boleh menjejaskan aktiviti enzim dalam aplikasi seperti pengklonan atau penghadaman enzim sekatan.  

2.Penghapusan kekotoran dan produk sampingan

Sebagai tambahan kepada primer dan dNTP yang disebutkan di atas, sistem tindak balas PCR mungkin juga mengandungi kekotoran lain, seperti ion magnesium dan komponen penimbal.  Lebih-lebih lagi, produk penguatan bukan khusus atau dimer primer kadangkala boleh dihasilkan.  Bahan-bahan ini bukan sahaja meningkatkan bunyi latar belakang, menjejaskan kejelasan jalur sasaran, tetapi mereka juga boleh menghalang tindakan enzim utama seperti endonuklease sekatan atau ligase dalam eksperimen hiliran.  

3.Meningkatkan kepekatan serpihan sasaran

Melalui proses penyucian, komponen yang tidak diingini boleh dikeluarkan dengan berkesan, dengan itu meningkatkan perkadaran serpihan DNA sasaran berbanding komponen lain. Ini amat penting untuk percubaan yang bergantung pada templat ketulenan tinggi, seperti penjujukan Sanger dan analisis ekspresi gen.  Ketulenan yang lebih tinggi bermakna kualiti data yang lebih baik dan hasil percubaan yang lebih dipercayai.  

4.Melindungi komponen sensitif dalam aplikasi hiliran

Banyak teknik biologi molekul, terutamanya yang melibatkan tindak balas enzim, seperti penghadaman enzim sekatan, pengikatan, atau transformasi sel bakteria, sangat sensitif terhadap bahan cemar. Produk PCR yang tidak ditulenkan mungkin mengandungi polimerase DNA aktif dan perencat berpotensi lain yang boleh mengganggu tindak balas biokimia yang sensitif ini.  

5. Mengurangkan bunyi latar belakang

Apabila menggunakan elektroforesis gel agarose untuk mengesan produk PCR, penulenan boleh membantu mengurangkan bunyi latar belakang, menjadikan jalur sasaran lebih jelas dan kelihatan.  Ini penting untuk mengesahkan kejayaan PCR dan menilai kekhususannya.  

Pemurnian produk PCR adalah langkah penting untuk memastikan kelancaran kemajuan percubaan seterusnya. Ia bukan sahaja menambah baik keadaan percubaan tetapi juga meningkatkan kualiti dan kebolehpercayaan keputusan eksperimen. Oleh itu, dalam kebanyakan kes, terutamanya sebelum merancang untuk menggunakan produk PCR untuk penyelidikan lanjut, pemurnian yang sesuai amat diperlukan.  

Manik magnet-kit penulenan produk PCR berasaskan elakkan penggunaan bahan kimia toksik seperti pengekstrakan fenol/kloroform dalam kaedah tradisional. Proses pembersihan agak mudah dan cepat, biasanya selesai dalam masa 20 minit, tanpa memerlukan emparan atau peralatan lain, dan sesuai untuk platform automatik. Tiada perencat yang menjejaskan tindak balas seterusnya seperti penghadaman enzim sekatan atau pengikatan dalam kit, dan telah digunakan secara meluas dalam penyelidikan biologi molekul moden.  

Pembekal

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd.ditubuhkan pada 2016 yang merupakan pengilang profesional bahan biomagnet dan reagen pengekstrakan asid nukleik.

Kami mempunyai pengalaman yang kaya dalam pengekstrakan dan penulenan asid nukleik, penulenan protein, pemisahan sel, chemiluminescence dan bidang teknikal lain.

Produk kami digunakan secara meluas dalam pelbagai bidang, seperti ujian perubatan, ujian genetik, penyelidikan universiti, pembiakan genetik, dan seterusnya. Kami bukan sahaja menyediakan produk tetapi juga boleh menjalankan OEM, ODM, dan keperluan lain.Jika anda mempunyai keperluan yang berkaitan, sila hubungi kami disales01@lingjunbio.com.