யுனிவர்சல் மொத்த RNA பிரித்தெடுத்தல் கிட் (சிறிய தொகுதி) (காந்த மணி முறை)

【தயாரிப்பு அறிமுகம்】

இந்த உலகளாவிய மொத்த ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுக்கும் கருவி சிறிய தொகுதிகளுக்கான பரந்த அளவிலான திசு மாதிரிகளிலிருந்து மொத்த ஆர்என்ஏவை விரைவாக பிரித்தெடுப்பதற்காக வடிவமைக்கப்பட்டுள்ளது., புதிய ஆலை உட்பட, விலங்கு, பூஞ்சை மற்றும் செல்லுலார் பொருட்கள். முழு செயல்முறையும் செய்ய நேரடியானது மற்றும் குறிப்பாக தானியங்கி நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுக்கும் தளங்களுக்கு மிகவும் பொருத்தமானது.. பிரித்தெடுக்கும் போது, நியூக்ளிக் அமிலங்கள் லிசிஸ் பஃப்பரின் செயல்பாட்டின் கீழ் மாதிரியிலிருந்து வெளியிடப்படுகின்றன; நானோ-காந்த மணிகள் பின்னர் பிணைப்பு தாங்கலில் உள்ள நியூக்ளிக் அமிலங்களை தேர்ந்தெடுத்து உறிஞ்சும், மாதிரியில் உள்ள மற்ற அசுத்தங்களிலிருந்து அவற்றைப் பிரிக்கிறது; பின்னர் புரதங்களை அகற்ற மாதிரிகள் ஒரு சலவை இடையகத்துடன் கழுவப்படுகின்றன, பாலிசாக்கரைடுகள், கனிம உப்புகள் மற்றும் பிற அசுத்தங்கள்; உயர்தர RNA பின்னர் நீக்கப்பட்டது. இந்த கருவிக்கு ஃபீனால் அல்லது குளோரோஃபார்ம் போன்ற நச்சு வினைப்பொருட்கள் தேவையில்லை. பிரித்தெடுக்கப்பட்ட ஆர்என்ஏ அதிக மகசூலை அளிக்கிறது, உயர் தூய்மை மற்றும் சீரான, நம்பகமான தரம், பரவலான கீழ்நிலை மூலக்கூறு உயிரியல் சோதனைகளுக்கு ஏற்றதாக அமைகிறது.

【தயாரிப்பு நன்மைகள்】

• மிகவும் பல்துறை, பரந்த அளவிலான திசு மாதிரிகளிலிருந்து மொத்த ஆர்என்ஏவைப் பிரித்தெடுக்க ஏற்றது, விலங்கு உட்பட, ஆலை, பூஞ்சை மற்றும் செல்லுலார் ஆதாரங்கள்.
• பயன்படுத்த எளிதானது; காந்த மணி முறையானது முழு தானியங்கு நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுக்கும் அமைப்புகளுடன் இணைந்து தானியங்கி பிரித்தெடுத்தலை செயல்படுத்த முடியும்., மிகவும் திறமையான பிரித்தெடுப்பதற்காக ஒரே படியில் சிதைவு மற்றும் பிணைப்பு மேற்கொள்ளப்படுகிறது.
• மீண்டும் மீண்டும் மையவிலக்கு தேவையில்லை, பிரித்தெடுக்கப்பட்ட ஆர்என்ஏவின் ஒருமைப்பாட்டை உறுதி செய்கிறது.
• பிரித்தெடுத்தல் தயாரிப்பு அதிக தூய்மை மற்றும் மகசூல் கொண்டது, அப்படியே எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் பட்டைகளுடன்.
• பயன்படுத்த பாதுகாப்பானது, திரவ நைட்ரஜனை அரைக்க வேண்டிய அவசியமில்லை; தயாரிப்பில் பீனால் அல்லது குளோரோஃபார்ம் போன்ற தீங்கு விளைவிக்கும் பொருட்கள் இல்லை.

【பரிசோதனை வழக்கு】

வழக்கு 1: பல்வேறு புதிய திசு மாதிரிகளிலிருந்து ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுக்கப்பட்டது, பின்வரும் முடிவுகளுடன்:

இல்லை.	மாதிரி	மாதிரி உட்கொள்ளல்	A260/A280	A260/A230	ஒப்பந்தம்(ng/μL)	மகசூல் (μg)
1	குழந்தை போக் சோய் இலைகள்	10மி.கி	2.073	2.112	109.35	10.9
2	கீரை இலைகள்		2.01	1.974	114.8	11.5
3	போக் சோய் இலைகள்		2.109	2.045	79.45	8
4	பட்டாணி முளை		2.053	1.972	108.75	10.9

எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் ஜெல் கீழே காட்டப்பட்டுள்ளது：

முடிவுகளின் பகுப்பாய்வு:

அல்ட்ரா-மைக்ரோ நியூக்ளிக் அமில பகுப்பாய்வியின் சோதனை முடிவுகள் அதைக் குறிப்பிடுகின்றன:

① A260/A280 விகிதம் வரம்பில் இருந்து 1.8 செய்ய 2.0, மற்றும் A260/A230 விகிதம் மேலே உள்ளது 1.6, பிரித்தெடுக்கப்பட்ட பொருளின் உயர் தூய்மையை நிரூபிக்கிறது.

② வெவ்வேறு மாதிரிகளில் இருந்து பிரித்தெடுக்கப்படும் நியூக்ளிக் அமிலத்தின் விளைச்சல் 6 µg அல்லது அதற்கு மேல்.

அகரோஸ் ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் முடிவுகள் குறிப்பிடுகின்றன:

① அனைத்து மாதிரிகளும் பிரகாசமாக காட்சிப்படுத்தப்பட்டன, நல்ல ஒருமைப்பாட்டுடன் நன்கு வரையறுக்கப்பட்ட RNA பட்டைகள்.

சுருக்கமாக: இந்தக் கருவியைப் பயன்படுத்தி பல்வேறு மாதிரிகளில் இருந்து பிரித்தெடுக்கப்பட்ட ஆர்என்ஏ அதிக தூய்மையைக் காட்டியது, அதிக மகசூல் மற்றும் அப்படியே எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் பட்டைகள்.

வழக்கு 2: பல்வேறு புதிய இலைகள் மற்றும் திசு மாதிரிகளிலிருந்து மொத்த RNA பிரித்தெடுக்கப்பட்டது, பின்வரும் முடிவுகளுடன்:

இல்லை	மாதிரி	உட்கொள்ளல்	A260/A280	A260/A230	ஒப்பந்தம்(ng/μL)	மகசூல் (μg)
1	கீரை இலைகள்	10மி.கி	1.996	2.112	113.35	11.3
2	கொத்தமல்லி இலைகள்		1.955	1.936	58.95	6
3	முட்டைக்கோஸ் இலைகள்		2.001	2.102	130.35	13
4	செலரி இலைகள்		1.999	2.142	77.55	7.8
5	பன்றி இறைச்சி கல்லீரல்	5மி.கி	1.884	1.713	88.75	8.9
6	பன்றி இறைச்சி கல்லீரல்	10மி.கி	1.872	1.688	112.05	11.2

எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் ஜெல் கீழே காட்டப்பட்டுள்ளது：

முடிவுகளின் பகுப்பாய்வு:

அல்ட்ரா-மைக்ரோ நியூக்ளிக் அமில பகுப்பாய்வியின் சோதனை முடிவுகள் அதைக் குறிப்பிடுகின்றன:

① A260/A280 விகிதம் வரம்பில் இருந்து 1.8 செய்ய 2.0, மற்றும் A260/A230 விகிதம் மேலே உள்ளது 1.6, பிரித்தெடுக்கப்பட்ட பொருளின் உயர் தூய்மையை நிரூபிக்கிறது.

② வெவ்வேறு மாதிரிகளில் இருந்து பிரித்தெடுக்கப்படும் நியூக்ளிக் அமிலத்தின் விளைச்சல் 6 µg அல்லது அதற்கு மேல்.

அகரோஸ் ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் முடிவுகள் குறிப்பிடுகின்றன:

① அனைத்து மாதிரிகளும் பிரகாசமாக காட்சிப்படுத்தப்பட்டன, நல்ல ஒருமைப்பாட்டுடன் நன்கு வரையறுக்கப்பட்ட RNA பட்டைகள்.

சுருக்கமாக: இந்தக் கருவியைப் பயன்படுத்தி பல்வேறு மாதிரிகளில் இருந்து பிரித்தெடுக்கப்பட்ட ஆர்என்ஏ அதிக தூய்மையைக் காட்டியது, அதிக மகசூல் மற்றும் அப்படியே எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் பட்டைகள்.

வழக்கு 3: பல்வேறு புதிய திசு மாதிரிகளிலிருந்து மொத்த RNA பிரித்தெடுக்கப்பட்டது, பின்வரும் முடிவுகளுடன்:

இல்லை.	மாதிரி	உட்கொள்ளல்	A260/A280	A260/A230	ஒப்பந்தம்(ng/μL)	மகசூல் (μg)
1	கீரை இலைகள்	10மி.கி	1.996	2.112	113.35	11.3
2	முட்டைக்கோஸ் இலைகள்	10மி.கி	2.001	2.102	130.35	13
3	செலரி இலைகள்	10மி.கி	1.999	2.142	77.55	7.8
4	ஸ்காலியன் இலைகள்	20மி.கி	2.113	2.423	77.8	7.8
5	கொத்தமல்லி இலைகள்	20மி.கி	2.03	2.116	203.75	20.4
6	காளான்	10மி.கி	2.171	2.68	65.8	6.6
7	எனோகிடேக்	10மி.கி	2.073	1.969	44.45	4.5
8	வெள்ளை பீச் காளான்	20மி.கி	2.157	2.517	56.8	5.7
9	வெள்ளை காளான்	20மி.கி	2.111	2.42	118.7	11.9
10	பன்றி இறைச்சி	10மி.கி	2.041	2.011	32.2	3.2
11	பன்றி இறைச்சி கல்லீரல்	5மி.கி	1.884	1.713	88.75	8.9
12	பன்றி இறைச்சி கல்லீரல்	10மி.கி	1.872	1.708	112.05	11.2

எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் ஜெல் கீழே காட்டப்பட்டுள்ளது：

முடிவுகளின் பகுப்பாய்வு:

அல்ட்ரா-மைக்ரோ நியூக்ளிக் அமில பகுப்பாய்வியின் சோதனை முடிவுகள் அதைக் குறிப்பிடுகின்றன:

① A260/A280 விகிதம் வரம்பில் இருந்து 1.8 செய்ய 2.0, மற்றும் A260/A230 விகிதம் மேலே உள்ளது 1.7, பிரித்தெடுக்கப்பட்ட பொருளின் உயர் தூய்மையை நிரூபிக்கிறது.

② வெவ்வேறு மாதிரிகளில் இருந்து பிரித்தெடுக்கப்படும் நியூக்ளிக் அமிலத்தின் விளைச்சல் 3 µg அல்லது அதற்கு மேல்.

அகரோஸ் ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் முடிவுகள் குறிப்பிடுகின்றன:

① அனைத்து மாதிரிகளும் பிரகாசமாக காட்சிப்படுத்தப்பட்டன, நல்ல ஒருமைப்பாட்டுடன் நன்கு வரையறுக்கப்பட்ட RNA பட்டைகள்.

சுருக்கமாக: இந்தக் கருவியைப் பயன்படுத்தி பல்வேறு மாதிரிகளில் இருந்து பிரித்தெடுக்கப்பட்ட ஆர்என்ஏ அதிக தூய்மையைக் காட்டியது, அதிக மகசூல் மற்றும் அப்படியே எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் பட்டைகள்.

【விண்ணப்பிக்கும் பகுதிகள்】

1.மரபணு வெளிப்பாடு பகுப்பாய்வு

qRT-PCR: குறிப்பிட்ட மரபணுக்களின் வெளிப்பாடு நிலைகளின் அளவு கண்டறிதல்.

RNA-Seq: டிரான்ஸ்கிரிப்டோமின் விரிவான பகுப்பாய்வுக்கான உயர்-செயல்திறன் வரிசைமுறை.

2.செயல்பாட்டு மரபியல் ஆராய்ச்சி

மரபணு செயல்பாடு ஆய்வுகள்: சிறிய குறுக்கீடு RNA ஐப் பயன்படுத்தி மரபணு செயல்பாட்டை ஆய்வு செய்தல் (எ.கா. siRNA, shRNA).

மரபணு திருத்தம்: மரபணு ஒழுங்குமுறை வழிமுறைகளை விசாரிக்க CRISPR தொழில்நுட்பத்தைப் பயன்படுத்துதல்.

3.நோய் கண்டறிதல் மற்றும் பயோமார்க்ஸ்

நோய் கண்டறிதல்: நோய் கண்டறிதலுக்கான குறிப்பிட்ட RNA மூலக்கூறுகளைக் கண்டறிதல்.

பயோமார்க்ஸ்: நோய்களுடன் தொடர்புடைய RNA குறிப்பான்களை அடையாளம் காணுதல்.

4.மருந்து வளர்ச்சி

இலக்கு திரையிடல்: மருந்து இலக்குகளை அடையாளம் காணுதல்.

மருந்து பதில்: மரபணு வெளிப்பாட்டில் மருந்துகளின் தாக்கத்தை மதிப்பிடுதல்.

5.பரிணாம மற்றும் ஒப்பீட்டு மரபியல்

பரிணாம ஆய்வுகள்: பரிணாம உறவுகளை ஆராய பல்வேறு இனங்கள் முழுவதும் ஆர்என்ஏ வரிசைகளை ஒப்பிடுதல்.

ஒப்பீட்டு மரபியல்: மாறுபட்ட நிலைமைகளின் கீழ் மரபணு வெளிப்பாட்டின் வேறுபாடுகளை பகுப்பாய்வு செய்தல்.

6.எபிஜெனெடிக் ஆய்வுகள்

ஆர்என்ஏ மாற்றங்கள்: ஆர்என்ஏ மாற்றங்கள் மற்றும் அவற்றின் செயல்பாடுகளை ஆய்வு செய்தல்.

குறியிடாத ஆர்.என்.ஏ: மரபணு ஒழுங்குமுறையில் குறியீட்டு அல்லாத ஆர்என்ஏவின் பங்கை பகுப்பாய்வு செய்தல்.