কিভাবে দক্ষতার সাথে শুক্রাণু কোষ RNA নিষ্কাশন করা যায়?

ব্যবহার করে ইউনিভার্সাল মোট RNA নিষ্কাশন কিট শুক্রাণু কোষ থেকে উচ্চ-মানের আরএনএ বের করা একটি সমস্যা কারণ এই পরীক্ষাটি শুক্রাণু কোষের অনন্য গঠনের কারণে অপারেশনাল বিশদগুলিতে খুব মনোযোগের প্রয়োজন। (শক্ত কোষের ঝিল্লি, নিউক্লিওপ্রোটিন সমৃদ্ধ, কম আরএনএ সামগ্রী, এবং অধঃপতনের উচ্চ সংবেদনশীলতা), বিশেষ পরিচালনার প্রয়োজন.

1.মূল নীতি:

চৌম্বক গুটিকা পদ্ধতি একটি সিলিকন হাইড্রক্সিল গ্রুপের সাথে প্রলিপ্ত চৌম্বকীয় মাইক্রোস্ফিয়ারের উপর নির্ভর করে. উচ্চ-লবণ এবং কম-পিএইচ অবস্থার অধীনে, এই পুঁতিগুলি বিশেষভাবে আরএনএকে আবদ্ধ করে. চৌম্বক বিচ্ছেদ মাধ্যমে অমেধ্য অপসারণ করা হয়, এবং বিশুদ্ধ আরএনএ কম লবণের মধ্যে নির্গত হয়, উচ্চ-পিএইচ পরিবেশ.

2. পরীক্ষার আগে বিশেষ প্রস্তুতি

2.1 নমুনা সংগ্রহ এবং সংরক্ষণ (সফল শুক্রাণু আরএনএ নিষ্কাশনের জন্য গুরুত্বপূর্ণ)

• তাজা বীর্যের নমুনা আদর্শ. স্টোরেজ প্রয়োজন হলে, সঙ্গে সঙ্গে RNA সংরক্ষণ দ্রবণে নমুনা রাখুন (যেমন, আরএনএলেটস), রাতারাতি 4°C তাপমাত্রায় সেঁকুন, এবং তারপর দীর্ঘমেয়াদী স্টোরেজের জন্য -80 ডিগ্রি সেলসিয়াসে স্থানান্তর করুন. সরাসরি জমে যাওয়া এড়িয়ে চলুন, যেহেতু বরফের স্ফটিক কোষের গঠনকে ব্যাহত করতে পারে এবং আরএনএকে ক্ষয় করতে পারে.
• বারবার ফ্রিজ-থাও চক্র এড়িয়ে চলুন.

2.2 কী বিকারক প্রস্তুতি

• শুক্রাণু বা চ্যালেঞ্জিং নমুনার জন্য বাণিজ্যিকভাবে অপ্টিমাইজ করা একটি ডেডিকেটেড শুক্রাণু আরএনএ নিষ্কাশন কিট ব্যবহার করুন.
• RNase ডিকনটামিনেশন: RNase Zap দিয়ে কাজের পৃষ্ঠ এবং পাইপেট স্প্রে করুন, এবং গ্লাভস এবং একটি মাস্ক পরুন. RNase-মুক্ত টিপস এবং সেন্ট্রিফিউজ টিউব ব্যবহার করুন.
• হ্রাসকারী এজেন্ট (ডিটিটি): শুক্রাণু কোষের ঝিল্লি ডিসালফাইড বন্ডে সমৃদ্ধ. ডিটিটি (ডিথিওথ্রিটল) lysis জন্য গুরুত্বপূর্ণ. কিটে ডিটিটি অন্তর্ভুক্ত রয়েছে তা নিশ্চিত করুন বা এটি নিজে প্রস্তুত করুন (সাধারণ কাজের ঘনত্ব: 100 mM).
• DNase I: শুক্রাণু কোষ DNA সমৃদ্ধ. জিনোমিক ডিএনএ দূষণ অপসারণের জন্য একটি DNase হজম পদক্ষেপ অপরিহার্য.

2.3 প্রি-কুলিং:

• প্রি-কুল সেন্ট্রিফিউজ এবং রোটর থেকে 4 ℃

3. স্ট্যান্ডার্ড অপারেটিং পদ্ধতি (উদাহরণ হিসেবে সাংহাই লিংজুন বায়োটেকনোলজির ইউনিভার্সাল টোটাল আরএনএ এক্সট্রাকশন কিট ব্যবহার করা)

ম্যানুয়াল নিষ্কাশন বা স্বয়ংক্রিয় নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশন যন্ত্রের জন্য ম্যানুয়ালটির বিশদ নির্দেশাবলী সাবধানে অনুসরণ করুন.

4. গুণমান মূল্যায়ন

নিষ্কাশন পরে, RNA এর গুণমান মূল্যায়ন করা অপরিহার্য:

4.1 একাগ্রতা এবং বিশুদ্ধতা:

উচ্চ-মানের RNA-এর মধ্যে A260/A280 অনুপাত থাকা উচিত 1.8 এবং 2.1, এবং একটি A260/A230 অনুপাত এর চেয়ে বেশি 2.0.

4.2 সততা (মোস্ট ক্রিটিক্যাল):

Agilent Bioanalyzer বা TapeStation: এটি সোনার মান. 18S এবং 28S রাইবোসোমাল RNA পিক অনুপস্থিতির কারণে, মোট শুক্রাণুর আরএনএর ইলেক্ট্রোফোরেটিক প্রোফাইল সাধারণ সেলুলার আরএনএর থেকে আলাদা.

উচ্চ-মানের শুক্রাণু RNA-এর চারপাশে ~2000 nt এবং ~ 100 nt স্বতন্ত্র শিখর দেখাতে হবে (mRNA এবং ছোট RNA প্রতিনিধিত্ব করে, যথাক্রমে), একটি স্থিতিশীল বেসলাইন সহ. অবক্ষয় সূচক (DV200) উপরে হতে হবে 60% (উচ্চতর, ভাল).

প্রচলিত অ্যাগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস: একটি স্মিয়ার পরিলক্ষিত হতে পারে, কিন্তু এটি সঠিকভাবে অখণ্ডতার মূল্যায়ন করতে পারে না বা ছোট আরএনএ সনাক্ত করতে পারে না.

5. মূল বিবেচনা এবং সমস্যা সমাধান

5.1 কম ফলন:

কারণ: অসম্পূর্ণ lysis, অপর্যাপ্ত DTT ঘনত্ব/ইনকিউবেশন সময়, কম প্রারম্ভিক সেল সংখ্যা, অপর্যাপ্ত ম্যাগনেটিক বিড বাঁধাই বা ইলুশন.

সমাধান: লিসিসের সময় পুঙ্খানুপুঙ্খ ঘূর্ণি নিশ্চিত করুন; ডিটিটি ঘনত্ব বা লাইসিস সময় বাড়ান; প্রারম্ভিক নমুনার ভলিউম বাড়ান; ইলুশন বাফার ভলিউম এবং তাপমাত্রা অপ্টিমাইজ করুন.

5.2 জিডিএনএ দূষণ:

কারণ: নিষ্ক্রিয় বা অসম্পূর্ণ DNase I হজম.

সমাধান: DNase I তাজা এবং কার্যকর তা নিশ্চিত করুন; DNase অপসারণের জন্য একটি অতিরিক্ত পদক্ষেপ অন্তর্ভুক্ত করুন (যেমন, EDTA যোগ করা এবং গরম করে নিষ্ক্রিয় করা).

5.3 আরএনএ অবক্ষয়:

কারণ: RNase দূষণ, অত্যধিক উচ্চ অপারেটিং তাপমাত্রা, নমুনাগুলির বারবার জমাট-গলে যাওয়া চক্র.

সমাধান: কঠোরভাবে RNase ডিকনটামিনেশন প্রোটোকল মেনে চলুন; বরফের উপর সমস্ত পদক্ষেপ সঞ্চালন; তাজা বা সঠিকভাবে সংরক্ষিত নমুনা ব্যবহার করুন.

5.4 নিম্ন A260/A230 অনুপাত:

কারণ: অবশিষ্ট লবণ আয়ন বা জৈব দ্রাবক (যেমন, ইথানল).

সমাধান: দ্বারা শুকানোর সময় প্রসারিত করুন 1-2 ধোয়ার পরে টিউবটি খোলার সাথে কয়েক মিনিট; চূড়ান্ত ধোয়া সমাধান সম্পূর্ণ অপসারণ নিশ্চিত করুন.

সারাংশ

উচ্চ-মানের শুক্রাণু আরএনএ সফলভাবে নিষ্কাশনের চাবিকাঠি কার্যকর ডিটিটি লাইসিসের মধ্যে রয়েছে, পুঙ্খানুপুঙ্খ জিডিএনএ অপসারণ, এবং কঠোর RNase নিয়ন্ত্রণ. কিট নির্দেশাবলী অনুসরণ করে এবং উপরোক্ত বিবরণ মনোযোগ প্রদান করে, আপনার সাফল্যের উচ্চ সম্ভাবনা থাকবে.

সরবরাহকারী

সাংহাই লিংজুন বায়োটেকনোলজি কো., লিমিটেডসালে প্রতিষ্ঠিত হয় 2016 যা বায়োম্যাগনেটিক উপকরণ এবং নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশন বিকারকগুলির একটি পেশাদার প্রস্তুতকারক.

আমাদের নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশন এবং পরিশোধন সমৃদ্ধ অভিজ্ঞতা আছে, প্রোটিন পরিশোধন, কোষ বিচ্ছেদ, কেমিলুমিনেসেন্স, এবং অন্যান্য প্রযুক্তিগত ক্ষেত্র.

আমাদের পণ্য ব্যাপকভাবে অনেক ক্ষেত্রে ব্যবহৃত হয়, যেমন মেডিকেল টেস্টিং, জেনেটিক পরীক্ষা, বিশ্ববিদ্যালয় গবেষণা, জেনেটিক প্রজনন, এবং তাই. আমরা কেবল পণ্য সরবরাহ করি না তবে OEM গ্রহণ করতে পারি, ওডিএম, এবং অন্যান্য প্রয়োজন. আপনি যদি একটি সম্পর্কিত প্রয়োজন আছে, আমাদের সাথে যোগাযোগ বিনা দ্বিধায় দয়া করে .