Conas RNA Cealla Sperm a bhaint go héifeachtach?

Ag baint úsáide as an Kit Uilíoch Iomlán Uilíoch Eastóscadh RNA tá fadhb ann RNA ardcháilíochta a bhaint as cealla speirme toisc go dteastaíonn aird mhór ar shonraí oibríochtúla sa turgnamh seo mar gheall ar struchtúr uathúil na gcealla speirme (membrane cille diana, saibhir i nucleoproteiní, ábhar RNA íseal, agus so-ghabhálacht ard i leith díghrádaithe), láimhseáil speisialta de dhíth.

1.Croíphrionsabal:

Braitheann an modh coirníní maighnéadacha ar mhicreaspheres maighnéadacha atá brataithe le grúpa hiodrocsaile sileacain. Faoi choinníollacha ard-salann agus íseal-pH, nascann na coirníní seo go sonrach le RNA. Baintear neamhíonachtaí trí scaradh maighnéadach, agus tá RNA íon eluted i íseal-salann, timpeallacht ard-pH.

2. Ullmhóidí Speisialta Roimh an Turgnamh

2.1 Bailiú agus Caomhnú Samplaí (Ríthábhachtach le haghaidh Eastóscadh RNA Sperm Rathúil)

• Tá samplaí úra seamhan iontach. Más gá stóráil, láithreach cuir an sampla i dtuaslagán caomhnaithe RNA (e.g., RNAlates), gor ag 4°C thar oíche, agus ansin aistrigh go -80 ° C le haghaidh stórála fadtéarmach. Seachain reo díreach, toisc gur féidir le criostail oighir cur isteach ar struchtúr cille agus díghrádú RNA.
• Seachain timthriallta reo-leá arís agus arís eile.

2.2 Ullmhúchán Imoibrí Eochair

• Bain úsáid as fearas tiomnaithe eastósctha RNA speirme atá optamaithe go tráchtálach le haghaidh speirm nó samplaí dúshlánacha.
• Dí-éilliúchán RNase: Spraeáil dromchlaí oibre agus pípéid le RNase Zap, agus lámhainní agus masc a chaitheamh. Úsáid leideanna saor ó RNase agus feadáin lártheifneora.
• Gníomhaire Laghdú (DTT): Tá seicní cealla sperm saibhir i naisc disulfide. DTT (Dithiotreitol) ríthábhachtach le haghaidh lysis. Cinntigh go bhfuil DTT san fhoireann nó ullmhaigh tú féin é (comhchruinniú oibre: 100 mM).
• DNA I: Tá cealla sperm saibhir i DNA. Tá céim díleá DNA riachtanach chun éilliú DNA géanómach a bhaint.

2.3 Réamh-fhuaraithe:

• Lártheifneoirí agus rotors réamhfhionnuar go 4 ℃

3. Nós Imeachta Caighdeánach Oibriúcháin (Ag baint úsáide as Kit Uilíoch Eastóscadh RNA Iomlán Biteicneolaíocht Shanghai Lingjun mar Shamplach)

Lean treoracha mionsonraithe an lámhleabhair go cúramach maidir le heastóscadh láimhe nó le haghaidh ionstraimí eastósctha aigéid núicléacha uathoibrithe.

4. Measúnú Cáilíochta

Tar éis eastóscadh, tá sé riachtanach cáilíocht an RNA a mheas:

4.1 Tiúchan agus Íonacht:

Ba cheart go mbeadh cóimheas A260/A280 idir RNA ardcháilíochta 1.8 agus 2.1, agus cóimheas A260/A230 ar mó é ná 2.0.

4.2 Ionracas (An chuid is mó ríthábhachtach):

Bithanailíseoir nó Téipstáisiún Agilent: Is é seo an caighdeán óir. Mar gheall ar easpa beanna ribosomal RNA 18S agus 28S, tá difríocht idir próifíl leictreafóiriteach an RNA sperm iomlán agus próifíl RNA tipiciúil cheallacha.

Ba chóir go mbeadh buaiceanna ar leith ag RNA sperm ardchaighdeáin timpeall ~2000 nt agus ~100 nt (ag léiriú mRNA agus RNA beag, faoi ​​seach), le bonnlíne cobhsaí. An tInnéacs Díghrádaithe (DV200) chóir a bheith thuas 60% (an níos airde, is amhlaidh is fearr).

Leictreafóiréis Ghlóthach Agarose traidisiúnta: Is féidir smearaidh a thabhairt faoi deara, ach ní féidir leis sláine a mheas go cruinn ná RNAanna beaga a bhrath.

5. Príomhghnéithe agus Fabhtcheartú

5.1 Toradh Íseal:

Cúiseanna: lysis neamhiomlán, neamhleor ama tiúchan/goir DTT, comhaireamh cille tosaigh íseal, ceangal nó elution coirníní maighnéadach neamhleor.

Réitigh: Cinntigh vortexing críochnúil le linn lysis; tiúchan DTT nó am lysis a mhéadú; toirt an sampla tosaigh a mhéadú; toirt maolán elution agus teocht a bharrfheabhsú.

5.2 gDNA Éilliú:

Cúiseanna: Díleá DNase I neamhghníomhach nó neamhiomlán.

Réitigh: Cinntigh go bhfuil DNA I úr agus éifeachtach; cuir céim bhreise san áireamh chun DNA a bhaint (e.g., EDTA a chur leis agus díghníomhú trí théamh).

5.3 Díghrádú RNA:

Cúiseanna: Éilliú RNase, teochtaí oibriúcháin ró-ard, timthriallta reoite-leá na samplaí arís agus arís eile.

Réitigh: Cloí go docht le prótacail dí-éillithe RNase; gach céim ar oighear a dhéanamh; samplaí úra nó leasaithe i gceart a úsáid.

5.4 Cóimheas íseal A260/A230:

Cúiseanna: Iain salainn iarmharacha nó tuaslagóirí orgánacha (e.g., eatánól).

Réitigh: Leathnaigh an t-am triomú faoi 1-2 nóiméad leis an bhfeadán oscailte tar éis níocháin; a chinntiú go mbaintear an réiteach níocháin deiridh go hiomlán.

Achoimre

Is é lysis éifeachtach DTT an eochair chun RNA sperm ardchaighdeáin a bhaint go rathúil, bhaint gDNA críochnúil, agus rialú RNase dian. Trí na treoracha feiste a leanúint agus aird a thabhairt ar na sonraí thuas, beidh seans ard agat go n-éireoidh leat.

Soláthraí

Shanghai Lingjun Biteicneolaíocht Co., Teo.bunaíodh i 2016 atá ina mhonaróir gairmiúil d'ábhair bithmhaighnéadacha agus imoibrithe eastóscadh aigéid núicléacha.

Tá taithí shaibhir againn in eastóscadh agus íonú aigéad núicléasach, íonú próitéine, scaradh cille, ceimileacanacht, agus réimsí teicniúla eile.

Úsáidtear ár gcuid táirgí go forleathan i go leor réimsí, mar thástáil leighis, tástáil ghéiniteach, taighde ollscoile, pórú géiniteach, agus mar sin de. Ní chuirimid ar fáil ach táirgí ach freisin is féidir tabhairt faoi OEM, ODM, agus riachtanais eile. Má tá riachtanas gaolmhar agat, bíodh leisce ort teagmháil a dhéanamh linn .