விந்தணு செல்களை ஆர்என்ஏவை திறமையாக பிரித்தெடுப்பது எப்படி?

பயன்படுத்தி யுனிவர்சல் மொத்த ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுத்தல் கிட் விந்தணுக்களில் இருந்து உயர்தர ஆர்என்ஏவைப் பிரித்தெடுப்பதில் சிக்கல் உள்ளது, ஏனெனில் இந்த சோதனைக்கு விந்தணுக்களின் தனித்துவமான அமைப்பு காரணமாக செயல்பாட்டு விவரங்களுக்கு அதிக கவனம் தேவை. (கடினமான செல் சவ்வு, நியூக்ளியோபுரோட்டீன்கள் நிறைந்தது, குறைந்த RNA உள்ளடக்கம், மற்றும் சீரழிவுக்கு அதிக உணர்திறன்), சிறப்பு கையாளுதல் தேவை.

1.மையக் கொள்கை:

காந்த மணி முறையானது சிலிக்கான் ஹைட்ராக்சில் குழுவுடன் பூசப்பட்ட காந்த நுண்ணுயிரிகளை நம்பியுள்ளது.. அதிக உப்பு மற்றும் குறைந்த pH நிலைகளின் கீழ், இந்த மணிகள் குறிப்பாக ஆர்என்ஏவை பிணைக்கின்றன. காந்தப் பிரிப்பு மூலம் அசுத்தங்கள் அகற்றப்படுகின்றன, மற்றும் தூய RNA குறைந்த உப்பில் நீக்கப்படுகிறது, உயர் pH சூழல்.

2. பரிசோதனைக்கு முன் சிறப்பு ஏற்பாடுகள்

2.1 மாதிரி சேகரிப்பு மற்றும் பாதுகாத்தல் (வெற்றிகரமான விந்தணு ஆர்.என்.ஏ பிரித்தெடுத்தலுக்கு முக்கியமானது)

• புதிய விந்து மாதிரிகள் சிறந்தவை. சேமிப்பு அவசியம் என்றால், உடனடியாக மாதிரியை RNA பாதுகாப்பு கரைசலில் வைக்கவும் (எ.கா., ஆர்.என்.ஏ.லேட்ஸ்), ஒரே இரவில் 4°C வெப்பநிலையில் அடைகாக்கும், பின்னர் நீண்ட கால சேமிப்பிற்காக -80°Cக்கு மாற்றவும். நேரடி உறைபனியைத் தவிர்க்கவும், பனி படிகங்கள் செல் கட்டமைப்பை சீர்குலைத்து ஆர்என்ஏவை சீரழிக்கும்.
• மீண்டும் மீண்டும் உறைதல்-கரை சுழற்சிகளைத் தவிர்க்கவும்.

2.2 முக்கிய ரீஜென்ட் தயாரிப்பு

• விந்தணுக்கள் அல்லது சவாலான மாதிரிகளுக்கு வணிக ரீதியாக உகந்ததாக பிரத்யேக விந்தணு ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுக்கும் கருவியைப் பயன்படுத்தவும்.
• RNase கிருமி நீக்கம்: RNase Zap உடன் பணி மேற்பரப்புகள் மற்றும் குழாய்களை தெளிக்கவும், மற்றும் கையுறைகள் மற்றும் முகமூடியை அணியுங்கள். RNase-இலவச குறிப்புகள் மற்றும் மையவிலக்கு குழாய்களைப் பயன்படுத்தவும்.
• குறைக்கும் முகவர் (டிடிடி): விந்தணு சவ்வுகளில் டிசல்பைட் பிணைப்புகள் நிறைந்துள்ளன. டிடிடி (டிதியோத்ரீடோல்) சிதைவுக்கு முக்கியமானது. கிட்டில் DTT உள்ளதா என்பதை உறுதிப்படுத்தவும் அல்லது அதை நீங்களே தயார் செய்யவும் (பொதுவான வேலை செறிவு: 100 mM).
• டிநேஸ் ஐ: விந்தணு செல்களில் டிஎன்ஏ அதிகம் உள்ளது. மரபணு DNA மாசுபாட்டை அகற்றுவதற்கு DNase செரிமானப் படி அவசியம்.

2.3 முன் குளிர்ச்சி:

• முன் குளிர்விக்கும் மையவிலக்குகள் மற்றும் சுழலிகள் 4 ℃

3. நிலையான இயக்க நடைமுறை (ஷாங்காய் லிங்ஜுன் பயோடெக்னாலஜியின் யுனிவர்சல் டோட்டல் ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுத்தல் கருவியை உதாரணமாகப் பயன்படுத்துதல்)

கையேடு பிரித்தெடுத்தல் அல்லது தானியங்கி நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுக்கும் கருவிகளுக்கு கையேட்டின் விரிவான வழிமுறைகளை கவனமாக பின்பற்றவும்.

4. தர மதிப்பீடு

பிரித்தெடுத்த பிறகு, ஆர்என்ஏவின் தரத்தை மதிப்பிடுவது அவசியம்:

4.1 செறிவு மற்றும் தூய்மை:

உயர்தர RNA க்கு இடையில் A260/A280 விகிதம் இருக்க வேண்டும் 1.8 மற்றும் 2.1, மற்றும் A260/A230 விகிதம் அதிகமாக உள்ளது 2.0.

4.2 நேர்மை (மிக முக்கியமானவை):

அஜிலன்ட் பயோஅனாலைசர் அல்லது டேப்ஸ்டேஷன்: இதுதான் தங்கத் தரநிலை. 18S மற்றும் 28S ரைபோசோமால் ஆர்என்ஏ சிகரங்கள் இல்லாததால், மொத்த விந்தணு ஆர்என்ஏவின் எலக்ட்ரோஃபோரெடிக் சுயவிவரம் வழக்கமான செல்லுலார் ஆர்என்ஏவில் இருந்து வேறுபடுகிறது.

உயர்தர விந்தணு ஆர்.என்.ஏ சுமார் ~2000 nt மற்றும் ~100 nt தனித்த உச்சநிலைகளைக் காட்ட வேண்டும். (mRNA மற்றும் சிறிய RNA ஐக் குறிக்கும், முறையே), ஒரு நிலையான அடிப்படையுடன். சீரழிவு குறியீடு (DV200) மேலே இருக்க வேண்டும் 60% (உயர்ந்தது, சிறந்தது).

வழக்கமான அகரோஸ் ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ்: ஒரு ஸ்மியர் கவனிக்கப்படலாம், ஆனால் அது ஒருமைப்பாட்டை துல்லியமாக மதிப்பிடவோ அல்லது சிறிய RNAகளை கண்டறியவோ முடியாது.

5. முக்கிய பரிசீலனைகள் மற்றும் சரிசெய்தல்

5.1 குறைந்த மகசூல்:

காரணங்கள்: முழுமையற்ற சிதைவு, போதுமான டிடிடி செறிவு / அடைகாக்கும் நேரம், குறைந்த தொடக்க செல் எண்ணிக்கை, போதுமான காந்த மணி பிணைப்பு அல்லது நீக்குதல்.

தீர்வுகள்: சிதைவின் போது முழுமையான சுழல்நிலையை உறுதி செய்யவும்; டிடிடி செறிவு அல்லது சிதைவு நேரத்தை அதிகரிக்கவும்; தொடக்க மாதிரி அளவை அதிகரிக்கவும்; எலுஷன் பஃபர் தொகுதி மற்றும் வெப்பநிலையை மேம்படுத்தவும்.

5.2 gDNA மாசுபாடு:

காரணங்கள்: செயலற்ற அல்லது முழுமையற்ற DNase I செரிமானம்.

தீர்வுகள்: DNase I புதியதாகவும் பயனுள்ளதாகவும் இருப்பதை உறுதிசெய்யவும்; DNase ஐ அகற்ற கூடுதல் படி அடங்கும் (எ.கா., EDTA ஐச் சேர்த்து சூடாக்குவதன் மூலம் செயலிழக்கச் செய்கிறது).

5.3 ஆர்என்ஏ சிதைவு:

காரணங்கள்: RNase மாசுபாடு, அதிக இயக்க வெப்பநிலை, மாதிரிகளின் மீண்டும் மீண்டும் உறைதல்-கரை சுழற்சிகள்.

தீர்வுகள்: RNase கிருமி நீக்கம் நெறிமுறைகளை கண்டிப்பாக கடைபிடிக்கவும்; பனியில் அனைத்து நடவடிக்கைகளையும் செய்யவும்; புதிய அல்லது சரியாகப் பாதுகாக்கப்பட்ட மாதிரிகளைப் பயன்படுத்தவும்.

5.4 குறைந்த A260/A230 விகிதம்:

காரணங்கள்: எஞ்சிய உப்பு அயனிகள் அல்லது கரிம கரைப்பான்கள் (எ.கா., எத்தனால்).

தீர்வுகள்: உலர்த்தும் நேரத்தை நீட்டிக்கவும் 1-2 கழுவிய பின் குழாயைத் திறந்து நிமிடங்கள்; இறுதி கழுவும் கரைசலை முழுமையாக அகற்றுவதை உறுதிசெய்க.

சுருக்கம்

உயர்தர விந்தணு ஆர்என்ஏவை வெற்றிகரமாக பிரித்தெடுப்பதற்கான திறவுகோல் பயனுள்ள டிடிடி சிதைவில் உள்ளது, முழுமையான gDNA நீக்கம், மற்றும் கடுமையான RNase கட்டுப்பாடு. கிட் வழிமுறைகளைப் பின்பற்றி, மேலே உள்ள விவரங்களுக்கு கவனம் செலுத்துவதன் மூலம், நீங்கள் வெற்றிக்கான அதிக வாய்ப்புகளைப் பெறுவீர்கள்.

சப்ளையர்

ஷாங்காய் லிங்ஜுன் பயோடெக்னாலஜி கோ., லிமிடெட்இல் நிறுவப்பட்டது 2016 உயிர் காந்த பொருட்கள் மற்றும் நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுக்கும் உலைகளின் தொழில்முறை உற்பத்தியாளர்.

நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுத்தல் மற்றும் சுத்திகரிப்பு ஆகியவற்றில் எங்களுக்கு சிறந்த அனுபவம் உள்ளது, புரத சுத்திகரிப்பு, செல் பிரிப்பு, இரசாயன ஒளிர்வு, மற்றும் பிற தொழில்நுட்ப துறைகள்.

எங்கள் தயாரிப்புகள் பல துறைகளில் பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன, மருத்துவ பரிசோதனை போன்றவை, மரபணு சோதனை, பல்கலைக்கழக ஆராய்ச்சி, மரபணு இனப்பெருக்கம், மற்றும் பல. நாங்கள் தயாரிப்புகளை வழங்குவது மட்டுமல்லாமல் OEM ஐயும் மேற்கொள்ள முடியும், ODM, மற்றும் பிற தேவைகள். உங்களுக்கு தொடர்புடைய தேவை இருந்தால், தயவு செய்து எங்களை தொடர்பு கொள்ளவும் .