बायोमैग्नेटिक मोतियों के पेशेवर निर्माता
के परिणाम कैसे सुधारें 260/230 अभिकर्मकों को निकालने के लिए चुंबकीय मनका विधि का उपयोग करके गणना？
चुंबकीय मनका विधि का उपयोग करके न्यूक्लिक एसिड निकालते समय, एक नीचा 260/230 अनुपात (आम तौर पर < 1.8) कार्बनिक यौगिकों की उपस्थिति को इंगित करता है(जैसे गुआनिडीन लवण, फिनोल, इथेनॉल, EDTA) या नमूने में अवशिष्ट लवण, जो डाउनस्ट्रीम प्रयोगों को प्रभावित कर सकता है (जैसे पीसीआर, अनुक्रमण).
यहां एक व्यवस्थित अनुकूलन योजना है:
- निष्कर्षण चरणों का अनुकूलन
ए. पूर्ण नमूना विश्लेषण
संकट: अपूर्ण लसीका के कारण अशुद्धियाँ अपूर्ण रूप से मुक्त हो जाती हैं.
सुधार: लाइसिस समय बढ़ाएँ (जैसे, तक विस्तार 30 मिनट) या तापमान (56℃).
जटिल नमूनों के लिए ग्राइंडिंग चरण या अतिरिक्त प्रोटीनएज़ K पाचन जोड़ें (जैसे पौधे, मल).
बी. चुंबकीय मोतियों को अच्छी तरह धो लें
मुख्य कदम: अधूरी धुलाई इसका मुख्य कारण है 260/230 कम.
सुधार: धोने की संख्या बढ़ाएँ: 2 बार → 3 टाइम्स (विशेष रूप से उच्च अशुद्धियों वाले नमूनों के लिए).
धुलाई समाधान सूत्र: ताजा तैयार उपयोग सुनिश्चित करें 80% इथेनॉल (अत्यधिक जल सामग्री या संदूषण से बचें).
धुलाई का कार्य: हर बार चुंबकीय मोतियों को मिलाने के लिए भंवर या हिलाएँ, मोतियों के गुच्छों के निर्माण से बचना.
सतह पर तैरनेवाला को अच्छी तरह से एस्पिरेट करें (अवशिष्ट तरल को हटाने के लिए संक्षेप में अपकेंद्रित्र कर सकते हैं).
सी. चुंबकीय मोतियों का पूर्ण रूप से सूखना
संकट: अवशिष्ट इथेनॉल काफी कम हो सकता है 260/230.
सुधार: ढक्कन खोलें और इसे सूखने दें 5-10 मिनट (कमरे के तापमान पर या 37°C पर), जब तक इथेनॉल की गंध न हो. अत्यधिक सुखाने से बचें (अन्यथा, यह न्यूक्लिक एसिड निक्षालन की दक्षता को कम कर देगा).
डी. निक्षालन स्थितियों का अनुकूलन करें
पहले से गरम किए गए एल्युशन बफर का उपयोग करें (जैसे 65°C TE बफर या स्टेराइल पानी), और इसे खड़ा रहने दें 5 संग्रह से कुछ मिनट पहले.
बहुत कम मात्रा में एल्युशन का उपयोग करने से बचें (अनुशंसा ≥ 50 नमक की सघनता को कम करने के लिए μL).
Ⅱ.गुणवत्ता नियंत्रण अभिकर्मकों और उपभोग्य सामग्रियों की
ए. ताजा अभिकर्मकों से बदलें:
जाँच करें कि क्या इथेनॉल और वाशिंग घोल दूषित हो गया है (यदि बिना सीलिंग के लंबे समय तक संग्रहीत किया जाता है).
समाप्त हो चुके चुंबकीय मनका अभिकर्मकों का उपयोग करने से बचें (चुंबकीय मनका क्षरण अशुद्धियों को सोख सकता है).
बी. उपभोग्य सामग्रियों का चयन:
न्यूक्लीज या पाइरोजेन के बिना सेंट्रीफ्यूज ट्यूब और पिपेट का उपयोग करें (प्लास्टिक एडिटिव्स के हस्तक्षेप से बचने के लिए).
Ⅲ.नमूना पूर्वप्रसंस्करण
- जटिल नमूने (जैसे मिट्टी और पौधे):
पॉलीसेकेराइड और पॉलीफेनोल्स को हटाने के लिए सीटीएबी या एसडीएस प्रीट्रीटमेंट बढ़ाएं.
- रक्त के नमूने के लिए:
सबसे पहले एरिथ्रोसाइट लाइसिस समाधान का उपयोग करके हीमोग्लोबिन निकालें.
- अवरोधक-समृद्ध नमूने (जैसे कि मल और शरीर के तरल पदार्थ):
नमूनों को पतला करें या समर्पित लाइसिस बफ़र्स का उपयोग करें (जैसे कि कैरियर आरएनए युक्त).
Ⅳ.सत्यापन और उपचारात्मक उपाय
ए. वैद्युतकणसंचलन या क्यूबिट सत्यापन:
गिरावट की जाँच करें (पूंछ घटना) एगरोज़ जेल वैद्युतकणसंचलन का उपयोग करना.
प्रतिदीप्ति मीटर का उपयोग करके नैनोड्रॉप के परिणामों से तुलना करें (क्यूबिट) अशुद्धता अवशोषण से हस्तक्षेप को खत्म करने के लिए.
बी. शुद्धि उपाय:
यदि का अनुपात 260/230 कम रहता है, सिलिका कॉलम का उपयोग करके या इथेनॉल अवक्षेपण द्वारा न्यूक्लिक एसिड को फिर से शुद्ध करें.
वी. नियंत्रण प्रयोग
प्रत्येक निष्कर्षण के लिए, एक ज्ञात मानक नमूना (जैसे कि λDNA या संवर्धित कोशिकाएँ) अभिकर्मकों की स्थिरता की पुष्टि करने के लिए स्थापित किया गया है.
यदि 260/230 नियंत्रण नमूने का अनुपात सामान्य है, समस्या परीक्षण किए जा रहे नमूने में ही हो सकती है.
सामान्य समस्या समस्या निवारण चेकलिस्ट
| घटना | संभावित कारण | समाधान |
| 260/230 कम है लेकिन 260/280 सामान्य है | प्रोटीन या फिनोल संदूषण | धोने और सुखाने के चरणों को मजबूत करें |
| दोनों 260/230 और 260/280 कम हैं | प्रोटीन या फिनोल संदूषण | लसीका को अनुकूलित करें, लाइसिस समाधान बदलें |
| केवल 230 शिखर ऊँचा है | कार्बनिक विलायक संदूषण | इथेनॉल या बफर की शुद्धता की जाँच करें |
इन चरणों का पालन करके, का अनुपात 260/230 में उल्लेखनीय वृद्धि की जा सकती है (लक्ष्य > 1.8). यदि समस्या बनी रहती है तो, कृपया बेझिझक शंघाई लिंगजुन बायोटेक्नोलॉजी से संपर्क करें 18103799069.
देने वाला
शंघाई लिंगजुन बायोटेक्नोलॉजी कंपनी, लिमिटेडमें स्थापित किया गया था 2016 जो बायोमैग्नेटिक सामग्रियों और न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण अभिकर्मकों का एक पेशेवर निर्माता है.
हमारे पास न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण और शुद्धिकरण में समृद्ध अनुभव है, प्रोटीन शुद्धि, कोशिका पृथक्करण, chemiluminescence, और अन्य तकनीकी क्षेत्र.
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