Hoe u de resultaten van de 260/230 berekening met behulp van de magnetische kraalmethode voor het extraheren van reagentia？

Bij het extraheren van nucleïnezuren met behulp van de magnetische parelmethode, een laag 260/230 verhouding (gebruikelijk < 1.8) duidt op de aanwezigheid van organische verbindingen(zoals guanidinezouten, fenol, ethanol, EDTA) of resterende zouten in het monster, die van invloed kunnen zijn op stroomafwaartse experimenten (zoals PCR, sequentiebepaling).

 Hier is een systematisch optimalisatieplan:

1. Optimalisatie van extractiestappen

A. Volledige monsterlyse

Probleem: Onvolledige lyse leidt tot onvolledige vrijgave van onzuiverheden.

Verbetering: Verhoog de lysetijd (bijv., uitbreiden naar 30 notulen) of temperatuur (56℃).

Voeg een maalstap of extra proteïnase K-digestie toe voor complexe monsters (zoals planten, ontlasting).

B. Was de magnetische kralen grondig

Belangrijke stap: Onvolledig wassen is de belangrijkste oorzaak van 260/230 laag.

Verbetering: Verhoog het aantal wasbeurten: 2 tijden → 3 keer (vooral voor monsters met hoge onzuiverheden).

Formule voor wasoplossing: Zorg ervoor dat u vers bereid gebruikt 80% ethanol (vermijd een overmatig watergehalte of verontreiniging).

Wasoperatie: Vortex of schud om de magnetische kralen elke keer te mengen, het vermijden van de vorming van kralenklonten.

Zuig het supernatant grondig op (kan kort centrifugeren om resterende vloeistof te verwijderen).

C. Volledige droging van magnetische kralen

Probleem: Resterende ethanol kan aanzienlijk verminderen 260/230.

Verbetering: Open de dop en laat hem drogen 5-10 notulen (bij kamertemperatuur of 37°C), totdat er geen ethanolgeur meer is. Vermijd overmatig drogen (anders, het zal de efficiëntie van de nucleïnezuurelutie verminderen).

 D. Optimaliseer de elutieomstandigheden

Gebruik voorverwarmde elutiebuffer (zoals TE-buffer van 65°C of steriel water), en laat het staan 5 minuten vóór het ophalen.

Vermijd het gebruik van een te klein elutievolume (aanbevelen ≥ 50 μL om de zoutconcentratie te verminderen).

Ⅱ.Kwaliteitscontrole van reagentia en verbruiksartikelen

A. Vervang door nieuwe reagentia:

Controleer of ethanol en wasoplossing verontreinigd zijn (indien lange tijd zonder afdichting bewaard).

Vermijd het gebruik van verlopen magnetische parelreagentia (afbraak van magnetische kralen kan onzuiverheden adsorberen).

B. Keuze van verbruiksartikelen:

Gebruik centrifugebuisjes en pipetten zonder nuclease of pyrogeen (om interferentie door plastic additieven te voorkomen).

Ⅲ.Voorverwerking van monsters

1. Complexe monsters (zoals grond en planten):

Verhoog de CTAB- of SDS-voorbehandeling om polysachariden en polyfenolen te verwijderen.

• Voor bloedmonsters:

 Verwijder eerst hemoglobine met behulp van erytrocytenlyse-oplossing.

• Met remmers verrijkte monsters (zoals ontlasting en lichaamsvloeistoffen):

Verdun de monsters of gebruik speciale lysisbuffers (zoals die welke drager-RNA bevatten).

Ⅳ.Verificatie- en herstelmaatregelen

A. Elektroforese of Qubit-verificatie:

Controleer op degradatie (staart fenomeen) met behulp van agarosegelelektroforese.

Vergelijk de resultaten met die van Nanodrop met behulp van een fluorescentiemeter (Qubit) om interferentie door absorptie van onzuiverheden te elimineren.

B. Zuivering sanering:

Als de verhouding van 260/230 blijft laag, zuiver het nucleïnezuur met behulp van een silicakolom of opnieuw door middel van ethanolprecipitatie.

V. Controle-experiment

Voor elke extractie, een bekend standaardmonster (zoals λDNA of gekweekte cellen) is opgezet om de stabiliteit van de reagentia te bevestigen.

Als de 260/230 verhouding van het controlemonster is normaal, het probleem kan liggen in het monster dat wordt getest zelf.

Veelvoorkomende problemen Controlelijst voor het oplossen van problemen

Fenomeen	Mogelijke oorzaak	Oplossing
260/230 is laag maar 260/280 is normaal	Eiwit- of fenolverontreiniging	Versterk de was- en droogstappen
Beide 260/230 En 260/280 zijn laag	Eiwit- of fenolverontreiniging	Optimaliseer de lyse, vervang de lyse-oplossing
Alleen de 230 piek is hoog	Verontreiniging met organische oplosmiddelen	Controleer de zuiverheid van ethanol of buffer

Door deze stappen te volgen, de verhouding van 260/230 kan aanzienlijk worden vergroot (doel > 1.8). Als het probleem zich blijft voordoen, Neem gerust contact op met Shanghai Lingjun Biotechnology op 18103799069.

Leverancier

Shanghai Lingjun Biotechnologie Co., Ltd.werd opgericht in 2016 dat een professionele fabrikant is van biomagnetische materialen en reagentia voor nucleïnezuurextractie.

We hebben een rijke ervaring in de extractie en zuivering van nucleïnezuren, eiwit zuivering, cel scheiding, chemiluminescentie, en andere technische gebieden.

Onze producten worden op veel gebieden veel gebruikt, zoals medische testen, genetische testen, universitair onderzoek, genetische veredeling, enzovoort. Wij leveren niet alleen producten, maar kunnen ook OEM ondernemen, ODM, en andere behoeften. Als u een gerelateerde behoefte heeft, Neem gerust contact met ons op .