Produsen Profesional Manik Biomagnetik
Bagaimana meningkatkan hasil 260/230 perhitungan menggunakan metode manik magnetik untuk mengekstraksi reagen？
Saat mengekstraksi asam nukleat menggunakan metode manik magnetik, rendah 260/230 perbandingan (biasanya < 1.8) menunjukkan adanya senyawa organik(seperti garam guanidin, fenol, etanol, EDTA) atau sisa garam dalam sampel, yang dapat memengaruhi eksperimen hilir (seperti PCR, pengurutan).
Berikut adalah rencana optimasi sistematis:
- Optimalisasi Langkah Ekstraksi
A. Lisis sampel lengkap
Masalah: Lisis yang tidak sempurna menyebabkan pelepasan pengotor yang tidak lengkap.
Peningkatan: Tingkatkan waktu lisis (misalnya, meluas ke 30 menit) atau suhu (56℃).
Tambahkan langkah penggilingan atau pencernaan proteinase K tambahan untuk sampel kompleks (seperti tanaman, kotoran).
B. Cuci manik-manik magnet secara menyeluruh
Langkah kunci: Pencucian yang tidak tuntas menjadi penyebab utama 260/230 rendah.
Peningkatan: Tingkatkan jumlah pencucian: 2 kali → 3 kali (terutama untuk sampel dengan pengotor tinggi).
Formula larutan pencuci: Pastikan untuk menggunakan yang baru disiapkan 80% etanol (menghindari kandungan air yang berlebihan atau kontaminasi).
Operasi pencucian: Vortex atau kocok untuk mencampur manik-manik magnetik setiap kali, menghindari pembentukan gumpalan manik-manik.
Aspirasi supernatan secara menyeluruh (dapat melakukan sentrifugasi sebentar untuk menghilangkan sisa cairan).
C. Pengeringan sempurna manik-manik magnetik
Masalah: Residu etanol dapat berkurang secara signifikan 260/230.
Peningkatan: Buka tutupnya dan biarkan mengering 5-10 menit (pada suhu kamar atau 37°C), sampai tidak ada bau etanol. Hindari pengeringan berlebihan (jika tidak, itu akan mengurangi efisiensi elusi asam nukleat).
D. Optimalkan kondisi elusi
Gunakan buffer elusi yang telah dipanaskan sebelumnya (seperti buffer TE 65°C atau air steril), dan biarkan saja 5 menit sebelum pengumpulan.
Hindari menggunakan volume elusi yang terlalu kecil (merekomendasikan ≥ 50 μL untuk mengurangi konsentrasi garam).
Ⅱ.Kontrol Kualitas Reagen dan Bahan Habis Pakai
A. Ganti dengan reagen baru:
Periksa apakah etanol dan larutan pencuci telah terkontaminasi (jika disimpan dalam waktu lama tanpa disegel).
Hindari penggunaan reagen manik magnetik yang kadaluwarsa (degradasi manik magnetik dapat menyerap kotoran).
B. Pemilihan bahan habis pakai:
Gunakan tabung sentrifugasi dan pipet tanpa nuklease atau pirogen (untuk menghindari gangguan dari bahan tambahan plastik).
Ⅲ.Contoh pra-pemrosesan
- Sampel yang kompleks (seperti tanah dan tanaman):
Tingkatkan pretreatment CTAB atau SDS untuk menghilangkan polisakarida dan polifenol.
- Untuk sampel darah:
Pertama-tama hilangkan hemoglobin menggunakan larutan lisis eritrosit.
- Sampel yang diperkaya inhibitor (seperti feses dan cairan tubuh):
Encerkan sampel atau gunakan buffer lisis khusus (seperti yang mengandung Carrier RNA).
Ⅳ.Verifikasi dan tindakan perbaikan
A. Elektroforesis atau verifikasi Qubit:
Periksa degradasi (fenomena tailing) menggunakan elektroforesis gel agarosa.
Bandingkan hasilnya dengan hasil dari Nanodrop menggunakan pengukur fluoresensi (Qubit) untuk menghilangkan gangguan dari penyerapan pengotor.
B. Remediasi pemurnian:
Jika rasio 260/230 tetap rendah, memurnikan asam nukleat menggunakan kolom silika atau dengan pengendapan etanol lagi.
V. Eksperimen Kontrol
Untuk setiap ekstraksi, sampel standar yang diketahui (seperti λDNA atau sel yang dikultur) diatur untuk mengkonfirmasi stabilitas reagen.
Jika 260/230 rasio sampel kontrol normal, masalahnya mungkin terletak pada sampel yang diuji itu sendiri.
Daftar Periksa Pemecahan Masalah Umum
| Gejala | Kemungkinan Penyebabnya | Larutan |
| 260/230 rendah tapi 260/280 adalah hal biasa | Kontaminasi protein atau fenol | Perkuat langkah pencucian dan pengeringan |
| Keduanya 260/230 Dan 260/280 rendah | Kontaminasi protein atau fenol | Optimalkan lisis, mengganti larutan lisis |
| Hanya itu 230 puncaknya tinggi | Kontaminasi pelarut organik | Periksa kemurnian etanol atau buffer |
Dengan mengikuti langkah-langkah ini, rasio 260/230 dapat meningkat secara signifikan (target > 1.8). Jika masalah terus berlanjut, jangan ragu untuk menghubungi Shanghai Lingjun Bioteknologi di 18103799069.
Pemasok
Shanghai Lingjun Bioteknologi Co., Ltd.didirikan pada 2016 yang merupakan produsen profesional bahan biomagnetik dan reagen ekstraksi asam nukleat.
Kami memiliki pengalaman yang kaya dalam ekstraksi dan pemurnian asam nukleat, pemurnian protein, pemisahan sel, kimialuminesensi, dan bidang teknis lainnya.
Produk kami banyak digunakan di berbagai bidang, misalnya tes kesehatan, pengujian genetik, penelitian universitas, pemuliaan genetik, dan sebagainya. Kami tidak hanya menyediakan produk tetapi juga dapat melakukan OEM, ODM, dan kebutuhan lainnya. Jika Anda memiliki kebutuhan terkait, jangan ragu untuk menghubungi kami .
