Masalah Umum dalam Metode Manik Magnetik Ekstraksi Asam Nukleat

Dalam proses deteksi asam nukleat, ekstraksi manik magnetik banyak digunakan karena sensitivitas deteksinya yang tinggi, operasi yang dapat diotomatisasi, throughput yang tinggi, keamanan, dan kecepatan. Namun, dalam proses ekstraksi asam nukleat, ada lebih banyak detail yang perlu diperhatikan; kesalahan akan menyebabkan kegagalan hasil; berikut ini untuk membantu Anda mengatur beberapa masalah umum dan jawabannya. Saya harap Anda akan membantu.

Dapatkah efisiensi ekstraksi asam nukleat ditingkatkan dengan meningkatkan jumlah manik magnetik?

Bila hasil ekstraksinya kurang bagus, beberapa orang mungkin berpikir bahwa meningkatkan dosis manik magnetik dapat menyerap lebih banyak asam nukleat dan meningkatkan jumlah ekstraksi asam nukleat, tapi kenyataannya, tidak mudah untuk mencapai tujuan metode ini.

Dosis manik-manik magnetik yang berlebihan akan mengakibatkan ketidakmampuannya untuk terdispersi secara merata ke dalam sistem larutan pada setiap langkah, mengurangi dispersibilitasnya dan menyebabkan adsorpsi tidak sempurna, pencucian, dan proses elusi. Manik-manik magnetik dalam jumlah berlebihan juga akan menyerap lebih banyak kotoran, dan tidak adanya tempat pengikatan asam nukleat pada permukaan manik-manik magnet akan memberikan lebih banyak peluang untuk pengikatan pengotor. Umumnya, jumlah manik magnetik yang diberikan dalam kit ekstraksi asam nukleat metode manik magnetik cukup untuk memenuhi skenario aplikasi umum; jika Anda menghadapi masalah hasil ekstraksi asam nukleat yang rendah, Anda perlu memberikan pertimbangan penuh pada belahan dada dan pengikatan, proses pembersihan dan elusi.

Bagaimana menghindari degradasi asam nukleat selama ekstraksi asam nukleat?

Setiap langkah harus memperhatikan keseragaman pencampuran yang memadai untuk menghindari residu aglomerat mempengaruhi hasil percobaan; dalam elusi, suhu yang terlalu lama atau terlalu tinggi, asam nukleat dapat terdegradasi; sampel ingat untuk tidak mengulangi pembekuan dan pencairan, sampel yang diekstraksi harus hati-hati disimpan pada suhu yang tepat, pelestarian jangka panjang sejauh mungkin -80 ℃.

Efek lisis sampel tidak baik, dapatkah kita meningkatkan jumlah lisat yang digunakan untuk meningkatkan efek lisis dan meningkatkan efek ekstraksi?

Untuk metode manik magnet, setiap peningkatan volume cairan mengurangi kemungkinan tumbukan manik-manik magnet, sekaligus mengurangi kemungkinan tumbukan manik-manik magnet akan menyebabkan penurunan laju adsorpsi secara signifikan. Sangat sering, meskipun peningkatan larutan lisis dan larutan pencuci memang dapat berperan dalam meningkatkan lisis dan pencucian, Inti dari ekstraksi manik magnetik adalah efisiensi adsorpsi manik magnetik asam nukleat, tidak dapat menjamin efisiensi tumbukan manik magnet tidak dapat menjamin efisiensi ekstraksi asam nukleat, jadi sekadar menambah jumlah reagen untuk meningkatkan efek ekstraksi belum tentu sepenuhnya efektif.

Kemurnian ekstraksi asam nukleat tidak tinggi, ada sisa protein atau garam, apakah lebih baik membersihkan lebih sering?

Kemurnian ekstraksi asam nukleat tidak tinggi, mungkin tepat untuk menambah jumlah pembersihan satu atau dua kali. Jika jumlah pembersihan terlalu tinggi, itu akan meningkatkan jumlah asam nukleat yang hilang dalam proses pembersihan. Umumnya, berapa kali pembersihan masuk 2-4 waktu sudah tepat.

Apakah mungkin untuk meningkatkan efek ekstraksi dengan meningkatkan jumlah sampel yang diekstraksi?

Dalam kisaran tersebut sampel memiliki kandungan asam nukleat yang tinggi dan dapat dibelah sepenuhnya oleh lisat, meningkatkan volume sampel dapat meningkatkan efek ekstraksi, sebaliknya, jika lisat tidak mencukupi dan volume sampel terlalu banyak, itu dapat mempengaruhi efek belahan dada, yang dapat menyebabkan penurunan kualitas ekstraksi. Namun, untuk sampel dengan kandungan asam nukleat rendah, meningkatkan volume sampel malah akan menimbulkan lebih banyak pengotor dan mengurangi kualitas ekstraksi asam nukleat akhir. Untuk sampel seperti itu, disarankan untuk melalui langkah pengayaan atau konsentrasi dalam pra-perawatan sebelum memulai ekstraksi.

Mengapa efek manik-manik magnetik, yang awalnya sangat bagus, berkurang setelah mengganti kit?

Ada banyak jenis manik-manik magnet, ukuran partikel yang berbeda, dispersi yang berbeda, waktu respons magnetik yang berbeda, matriks dasar enkapsulasi yang berbeda, kelompok fungsional modifikasi lapisan luar yang berbeda, kepadatan enkapsulasi yang berbeda, panjang lengan gugus fungsi yang berbeda, yang akan menyebabkan perbedaan besar dalam karakteristik manik-manik magnetik.

Jadi eksperimen dan sistem yang disesuaikan dengan manik-manik magnet yang berbeda juga berbeda. Manik-manik magnetik yang berkinerja baik dalam sistem asli adalah kombinasi terbaik setelah serangkaian penyaringan dan pemetaan metode. Jika manik-manik magnet diubah menjadi sistem baru, wajar jika melihat penurunan efek ekstraksi. Dalam kebanyakan kasus, manik-manik magnetik dan sistem reagen harus melakukan penyesuaian dalam jangka waktu tertentu.

Efek ekstraksinya tidak sebaik kit tertentu; apakah manik-manik magnetnya buruk?

Banyak pengguna dalam proses penyaringan manik-manik magnetik dalam sistem reagen yang sudah matang, jumlah penggantian manik-manik magnetik yang sama, digunakan untuk membandingkan efek manik-manik magnetik. Mudah untuk menyimpulkan bahwa efek dari manik tertentu tidak baik, tapi kenyataannya, karena manik-manik yang berbeda cocok untuk sistem dan dosis yang berbeda, seringkali perlu disesuaikan untuk mendapatkan hasil ekstraksi yang lebih baik.

Pengenalan Pemasok

Shanghai Lingjun Bioteknologi Co., Ltd. didirikan pada 2016 yang merupakan produsen profesional bahan biomagnetik dan reagen ekstraksi asam nukleat.

Kami memiliki pengalaman yang kaya dalam ekstraksi dan pemurnian asam nukleat, pemurnian protein, pemisahan sel, chemiluminescence dan bidang teknis lainnya.

Produk kami banyak digunakan di berbagai bidang, misalnya tes kesehatan, pengujian genetik, penelitian universitas, pemuliaan genetik, dan sebagainya. Kami tidak hanya menyediakan produk tetapi juga dapat melakukan OEM, ODM, dan kebutuhan lainnya. Jika Anda memiliki kebutuhan terkait, jangan ragu untuk menghubungi kami di penjualan01@lingjunbio.com.