Problemi comuni nell'estrazione dell'acido nucleico con il metodo delle biglie magnetiche

Nel processo di rilevamento dell'acido nucleico, L'estrazione di sfere magnetiche è ampiamente utilizzata grazie alla sua elevata sensibilità di rilevamento, funzionamento automatizzabile, rendimento elevato, sicurezza, e rapidità. Tuttavia, nel processo di estrazione dell’acido nucleico, ci sono più dettagli a cui prestare attenzione; un errore porterà al fallimento dei risultati; quanto segue per aiutarti a organizzare alcuni problemi e risposte comuni. Spero che sarai utile.

È possibile migliorare l'efficienza dell'estrazione dell'acido nucleico aumentando la quantità di sfere magnetiche?

Quando il risultato dell'estrazione non è buono, alcune persone potrebbero pensare che l'aumento del dosaggio delle sfere magnetiche possa assorbire più acidi nucleici e migliorare la quantità di estrazione degli acidi nucleici, ma in effetti, non è facile raggiungere lo scopo di questo metodo.

Un dosaggio eccessivo di sfere magnetiche comporterà la loro incapacità di essere dispersi uniformemente nel sistema della soluzione ad ogni passaggio, riducendone la disperdibilità e portando ad un adsorbimento incompleto, lavaggio, e processi di eluizione. Quantità eccessive di sfere magnetiche assorbiranno anche più impurità, e l'assenza di siti di legame degli acidi nucleici sulla superficie delle sfere magnetiche fornirà maggiori opportunità per il legame delle impurità. Generalmente, la quantità di sfere magnetiche fornite nel kit di estrazione dell'acido nucleico con il metodo delle sfere magnetiche è sufficiente per soddisfare gli scenari applicativi comuni; se si riscontra il problema della bassa resa di estrazione dell'acido nucleico, è necessario tenere pienamente conto della scollatura e della rilegatura, processo di pulizia ed eluizione.

Come evitare la degradazione dell'acido nucleico durante l'estrazione dell'acido nucleico?

Ogni passaggio dovrebbe prestare attenzione ad un'adeguata uniformità di miscelazione per evitare che residui di agglomerati influenzino i risultati sperimentali; nell'eluizione, temperatura troppo lunga o troppo alta, l'acido nucleico può essere degradato; ricordarsi di non ripetere il congelamento e lo scongelamento dei campioni, i campioni estratti devono fare attenzione a conservarli alla giusta temperatura, conservazione a lungo termine, per quanto possibile -80 ℃.

L'effetto della lisi del campione non è buono, possiamo aumentare la quantità di lisato utilizzato per migliorare l'effetto di lisi e potenziare l'effetto di estrazione?

Per il metodo della perla magnetica, ogni aumento del volume del liquido riduce la possibilità di collisione delle biglie magnetiche, mentre la riduzione della possibilità di collisione delle sfere magnetiche porterà ad una significativa diminuzione del tasso di adsorbimento. Quindi molto spesso, sebbene l'aumento della soluzione di lisi e della soluzione di lavaggio possa effettivamente svolgere un ruolo nel migliorare la lisi e il lavaggio, il nucleo dell'estrazione delle sfere magnetiche è l'efficienza dell'adsorbimento dell'acido nucleico da parte delle sfere magnetiche, non può garantire l'efficienza della collisione delle sfere magnetiche non è in grado di garantire l'efficienza dell'estrazione dell'acido nucleico, quindi aumentare semplicemente la quantità di reagenti per migliorare l'effetto di estrazione non è necessariamente completamente efficace.

La purezza dell'estrazione dell'acido nucleico non è elevata, sono presenti residui proteici o salini, è meglio pulire più volte?

La purezza dell'estrazione dell'acido nucleico non è elevata, può essere opportuno aumentare il numero di volte in cui effettuare una o due pulizie. Se il numero di pulizie è troppo alto, aumenterà la quantità di perdita di acido nucleico nel processo di pulizia. Generalmente, il numero di volte di pulizia in 2-4 i tempi sono appropriati.

È possibile migliorare l'effetto di estrazione aumentando la quantità di campione estratto?

Nell'intervallo in cui il campione ha un elevato contenuto di acido nucleico e può essere completamente scisso dal lisato, l'aumento del volume del campione può aumentare l'effetto di estrazione, al contrario, se il lisato è insufficiente e il volume del campione è eccessivo, potrebbe influenzare l'effetto di scissione, che può portare ad una diminuzione della qualità dell’estrazione. Tuttavia, per campioni con basso contenuto di acidi nucleici, l'aumento del volume del campione introdurrà invece più impurità e ridurrà la qualità dell'estrazione finale dell'acido nucleico. Per tali campioni, si consiglia di eseguire la fase di arricchimento o concentrazione nel pretrattamento prima di iniziare l'estrazione.

Perché l'effetto delle perle magnetiche, che originariamente era molto buono, ridotto dopo aver cambiato un kit?

Esistono molti tipi di perline magnetiche, diversa dimensione delle particelle, diversa dispersione, diverso tempo di risposta magnetica, diversa matrice di base di incapsulamento, diversi gruppi funzionali di modifica dello strato esterno, diversa densità di incapsulamento, diverse lunghezze dei bracci dei gruppi funzionali, che porterà ad una grande differenza nelle caratteristiche delle perle magnetiche.

Quindi anche gli esperimenti e i sistemi adattati alle diverse sfere magnetiche sono diversi. Le sfere magnetiche che funzionano bene nel sistema originale rappresentano la combinazione migliore dopo una serie di screening e mappatura dei metodi. Se le sfere magnetiche vengono trasformate in un nuovo sistema, è normale vedere una diminuzione dell'effetto di estrazione. Nella maggior parte dei casi, le sfere magnetiche e i sistemi di reagenti devono impiegare un certo periodo di tempo per la regolazione.

L'effetto di estrazione non è buono come quello di un certo kit; le perline magnetiche sono pessime?

Molti utenti stanno effettuando lo screening delle sfere magnetiche nel sistema di reagenti già maturo, semplicemente la stessa quantità di sostituzione delle sfere magnetiche, utilizzato per confrontare l'effetto delle perle magnetiche. È facile concludere che l'effetto di una certa perla non è buono, ma in effetti, perché perle diverse sono adatte a sistemi e dosaggi diversi, spesso devono essere regolati per ottenere risultati di estrazione migliori.

Introduzione del fornitore

Shanghai Lingjun Biotecnologia Co., Ltd. è stato fondato nel 2016 che è un produttore professionale di materiali biomagnetici e reagenti per l'estrazione degli acidi nucleici.

Abbiamo una ricca esperienza nell'estrazione e purificazione degli acidi nucleici, purificazione delle proteine, separazione cellulare, chemiluminescenza e altri campi tecnici.

I nostri prodotti sono ampiamente utilizzati in molti campi, come i test medici, test genetici, ricerca universitaria, allevamento genetico, e così via. Non solo forniamo prodotti, ma possiamo anche intraprendere l'OEM, ODM, e altre esigenze. Se hai esigenze correlate, non esitate a contattarci a sales01@lingjunbio.com.