Come fornire soluzioni efficienti per lo smistamento dei frammenti di DNA?

Attualmente, molti problemi nella ricerca sulla biologia molecolare richiedono la classificazione del DNA in base alle dimensioni, che è noto come ordinamento dei frammenti. L'elettroforesi su gel di agarosio consente la separazione del DNA nell'intervallo di 10 ⁵~centinaia di paia di basi. Al contrario, l'elettroforesi su gel di acrilammide consente la separazione del DNA nell'ordine di migliaia di paia di basi. Per ottenere un'elevata risoluzione in questi processi di separazione, la differenza di dimensione per separare due frammenti dovrebbe essere 10% e un contenuto di acido nucleico fino a 5 A 10 milligrammi.

Il metodo della precipitazione selettiva, una combinazione di glicole polietilenico e sfere magnetiche biologiche, si distingue come un approccio più efficiente e conveniente all'ordinamento dei frammenti. In alte concentrazioni di soluzioni di PEG e NaCl, Il PEG distrugge lo strato di idratazione esterno alle molecole di DNA, facendoli aggregare e precipitare. Ciò espone i gruppi fosfato caricati negativamente, che poi formano un “ponte salino”.’ con i gruppi carbossilici sulle sfere magnetiche’ superficie, consentendo al DNA di essere adsorbito sulle perline.

Più lungo è il DNA, i gruppi fosfato con carica negativa sono esposti sulla superficie, rendendo l'intera molecola caricata più negativamente e più facile da adsorbire sulle sfere magnetiche, e può essere recuperato con concentrazioni inferiori di PEG e NaCl. Più corto è il DNA, maggiore è la concentrazione di PEG e NaCl necessaria per abbattere completamente lo strato di idratazione sulla sua superficie, esponendo abbastanza gruppi fosfato caricati negativamente da essere adsorbiti da sfere magnetiche e quindi recuperati. Se vuoi recuperare frammenti di DNA più corti, è necessario aggiungere un volume maggiore di perline magnetiche. Il rapporto tra la sospensione di sferette magnetiche e il campione influisce anche sulla dimensione dello screening dei frammenti. Come l'aumento della concentrazione della sospensione di sfere magnetiche, le sfere magnetiche aumenteranno la loro capacità di assorbimento di piccoli frammenti oltre a quelli di grandi dimensioni.

Quando una lunghezza specifica del frammento di DNA deve essere separata mediante sfere magnetiche, in genere vengono eseguiti due cicli di ordinamento. Al primo turno, le sfere magnetiche si legano al DNA con peso molecolare più elevato, che viene poi rimosso scartando le perle. Il secondo round coinvolge il prodotto rimanente, dove le sfere magnetiche si legano al DNA con peso molecolare più elevato e rimuovono il DNA con peso molecolare inferiore scartando il surnatante.

Entrambi i DNA a doppio filamento, DNA a filamento singolo, e l'RNA può dissociare i gruppi fosfato caricati negativamente in soluzione in modo che possano essere purificati e recuperati con sfere magnetiche. Tuttavia, Il DNA e l'RNA a filamento singolo non possono essere sottoposti a screening per la dimensione dei frammenti. La struttura secondaria del DNA a doppio filamento è generalmente una molecola lineare a doppia elica relativamente stabile. In presenza di PEG, il numero di gruppi fosfato caricati negativamente dissociati è correlato positivamente con la sua lunghezza. Tuttavia, L'RNA e il DNA a filamento singolo hanno strutture secondarie complesse, che impediscono che i gruppi negativi esposti siano correlati positivamente con la lunghezza, rendendo impossibile lo screening di frammenti come il DNA. Inoltre, a causa della diversa stabilità del DNA e dell'RNA a diversi valori di pH, il pH dei tamponi utilizzati per purificare DNA e RNA è diverso perché DNA e RNA hanno stabilità diversa in condizioni di pH diverse.

Le perle magnetiche per lo smistamento dei frammenti di Shanghai Lingjun Biotechnology sono sviluppate e prodotte in modo indipendente dalle materie prime alle perle magnetiche finite, con un rigoroso controllo di qualità per garantire che le prestazioni e la coerenza del prodotto finale soddisfino standard elevati e garantiscano una fornitura stabile del prodotto. L’azienda investe continuamente in ricerca e sviluppo, mantenendo sempre un'enfasi assoluta sulla qualità del prodotto, soddisfazione del cliente, e competitività sul mercato.

Introduzione del fornitore

Shanghai Lingjun Biotecnologia Co., Ltd.è stato fondato nel 2016 che è un produttore professionale di materiali biomagnetici e reagenti per l'estrazione degli acidi nucleici.

Abbiamo una ricca esperienza nell'estrazione e purificazione degli acidi nucleici, purificazione delle proteine, separazione cellulare, chemiluminescenza e altri campi tecnici.

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