डीएनए फ़्रैगमेंट सॉर्टिंग के लिए कुशल समाधान कैसे प्रदान करें?

वर्तमान में, आणविक जीव विज्ञान अनुसंधान में कई समस्याओं के लिए आकार के अनुसार डीएनए की ग्रेडिंग की आवश्यकता होती है, जिसे खंड छँटाई के रूप में जाना जाता है. एगरोज़ जेल पर वैद्युतकणसंचलन की सीमा में डीएनए को अलग करने की अनुमति मिलती है 10 ⁵~सैकड़ों आधार जोड़े. इसके विपरीत, एक्रिलामाइड जेल पर वैद्युतकणसंचलन हजारों बेस जोड़े की सीमा में डीएनए को अलग करने की अनुमति देता है. इन पृथक्करण प्रक्रियाओं में उच्च रिज़ॉल्यूशन प्राप्त करना, दो टुकड़ों को अलग करने के लिए आकार में अंतर होना चाहिए 10% और न्यूक्लिक एसिड सामग्री तक 5 को 10 मिलीग्राम.

चयनात्मक अवक्षेपण विधि, पॉलीथीन ग्लाइकोल और जैविक चुंबकीय मोतियों का संयोजन, यह खंड छँटाई के लिए एक अधिक कुशल और सुविधाजनक दृष्टिकोण के रूप में सामने आता है. PEG और NaCl समाधानों की उच्च सांद्रता में, पीईजी डीएनए अणुओं के बाहर जलयोजन परत को बाधित करता है, जिससे वे एकत्र होकर अवक्षेपित हो जाते हैं. यह नकारात्मक रूप से आवेशित फॉस्फेट समूहों को उजागर करता है, जो फिर एक 'नमक पुल' बनता है’ चुंबकीय मोतियों पर कार्बोक्सिल समूहों के साथ’ सतह, डीएनए को मोतियों पर सोखने की अनुमति देना.

डीएनए जितना लंबा होगा, अधिक नकारात्मक रूप से आवेशित फॉस्फेट समूह सतह पर उजागर होते हैं, पूरे अणु को अधिक नकारात्मक रूप से चार्ज किया जाता है और चुंबकीय मोतियों पर सोखना आसान हो जाता है, और इसे PEG और NaCl की कम सांद्रता के साथ पुनः प्राप्त किया जा सकता है. डीएनए जितना छोटा होगा, इसकी सतह पर जलयोजन परत को पूरी तरह से तोड़ने के लिए PEG और NaCl की सांद्रता जितनी अधिक होगी, पर्याप्त नकारात्मक रूप से आवेशित फॉस्फेट समूहों को चुंबकीय मोतियों द्वारा सोखने और फिर पुनर्प्राप्त करने के लिए उजागर करना. यदि आप छोटे डीएनए टुकड़े पुनर्प्राप्त करना चाहते हैं, आपको बड़ी मात्रा में चुंबकीय मोतियों को जोड़ने की आवश्यकता है. नमूने में चुंबकीय मनका निलंबन का अनुपात भी टुकड़े की स्क्रीनिंग के आकार को प्रभावित करता है. जैसे-जैसे चुंबकीय मनका निलंबन की सांद्रता बढ़ती जा रही है, चुंबकीय मोती बड़े टुकड़ों के अलावा छोटे टुकड़ों के लिए भी उनकी सोखने की क्षमता बढ़ा देंगे.

जब डीएनए के एक विशिष्ट लंबाई के टुकड़े को चुंबकीय मोतियों द्वारा अलग किया जाना है, आमतौर पर छँटाई के दो दौर किए जाते हैं. पहले दौर में, चुंबकीय मोती उच्च आणविक भार वाले डीएनए से जुड़ते हैं, जिसे बाद में मोतियों को हटाकर हटा दिया जाता है. दूसरे दौर में शेष उत्पाद शामिल है, जहां चुंबकीय मोती उच्च आणविक भार वाले डीएनए से जुड़ते हैं और सतह पर तैरनेवाला को हटाकर कम आणविक भार वाले डीएनए को हटा देते हैं.

दोनों डबल-स्ट्रैंडेड डीएनए, एकल-फंसे डीएनए, और आरएनए समाधान में नकारात्मक रूप से चार्ज किए गए फॉस्फेट समूहों को अलग कर सकता है ताकि उन्हें चुंबकीय मोतियों के साथ शुद्ध और पुनर्प्राप्त किया जा सके. तथापि, एकल-फंसे डीएनए और आरएनए को टुकड़े के आकार के लिए जांचा नहीं जा सकता है. डबल-स्ट्रैंडेड डीएनए की द्वितीयक संरचना आम तौर पर एक अपेक्षाकृत स्थिर रैखिक डबल-हेलिक्स अणु होती है. खूंटी की उपस्थिति में, पृथक्कृत ऋणात्मक रूप से आवेशित फॉस्फेट समूहों की संख्या इसकी लंबाई के साथ सकारात्मक रूप से सहसंबद्ध होती है. तथापि, आरएनए और एकल-फंसे डीएनए में जटिल माध्यमिक संरचनाएं होती हैं, जो उजागर नकारात्मक समूहों को लंबाई के साथ सकारात्मक रूप से सहसंबद्ध होने से रोकता है, जिससे डीएनए जैसे टुकड़ों की स्क्रीनिंग करना असंभव हो गया है. इसके अलावा, विभिन्न पीएच मानों पर डीएनए और आरएनए की अलग-अलग स्थिरता के कारण, डीएनए और आरएनए को शुद्ध करने के लिए उपयोग किए जाने वाले बफ़र्स का पीएच अलग-अलग होता है क्योंकि डीएनए और आरएनए की अलग-अलग पीएच स्थितियों के तहत अलग-अलग स्थिरता होती है।.

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आपूर्तिकर्ता परिचय

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हमारे पास न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण और शुद्धिकरण में समृद्ध अनुभव है, प्रोटीन शुद्धि, कोशिका पृथक्करण, केमिलुमिनसेंस और अन्य तकनीकी क्षेत्र.

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