Hoe u efficiënte oplossingen kunt bieden voor het sorteren van DNA-fragmenten?

Momenteel, Veel problemen in het onderzoek in de moleculaire biologie vereisen het indelen van DNA op basis van grootte, wat bekend staat als fragmentsortering. Elektroforese op agarosegel maakt de scheiding van DNA in het bereik van 10 ⁵~honderd basenparen. In tegenstelling, elektroforese op acrylamidegel maakt de scheiding van DNA in het bereik van duizenden basenparen mogelijk. Om een ​​hoge resolutie te bereiken in deze scheidingsprocessen, het grootteverschil om twee fragmenten te scheiden zou moeten zijn 10% en een nucleïnezuurgehalte van maximaal 5 naar 10 milligram.

De selectieve neerslagmethode, een combinatie van polyethyleenglycol en biologische magnetische kralen, onderscheidt zich als een efficiëntere en gemakkelijkere benadering van fragmentsortering. In hoge concentraties PEG- en NaCl-oplossingen, PEG verstoort de hydratatielaag buiten DNA-moleculen, waardoor ze samenklonteren en neerslaan. Hierdoor komen de negatief geladen fosfaatgroepen bloot te liggen, die dan een ‘zoutbrug’ vormen’ met de carboxylgroepen op de magnetische kralen’ oppervlak, waardoor DNA op de kralen kan worden geadsorbeerd.

Hoe langer het DNA, de meer negatief geladen fosfaatgroepen worden aan het oppervlak blootgesteld, waardoor het hele molecuul negatiever geladen is en gemakkelijker aan magnetische kralen kan worden geadsorbeerd, en het kan worden teruggewonnen met lagere concentraties PEG en NaCl. Hoe korter het DNA, hoe hoger de concentratie PEG en NaCl die nodig is om de hydratatielaag op het oppervlak grondig af te breken, waardoor voldoende negatief geladen fosfaatgroepen worden blootgesteld om door magnetische kralen te worden geadsorbeerd en vervolgens te worden teruggewonnen. Als je kortere DNA-fragmenten wilt terughalen, je moet een groter volume magnetische kralen toevoegen. De verhouding tussen de magnetische parelsuspensie en het monster heeft ook invloed op de grootte van de screening van fragmenten. Naarmate de concentratie van de magnetische parelsuspensie toeneemt, de magnetische kralen zullen hun adsorptiecapaciteit voor kleine fragmenten naast grote fragmenten vergroten.

Wanneer een bepaald stuk DNA-fragment moet worden gescheiden door magnetische kralen, Er worden doorgaans twee sorteerrondes uitgevoerd. In de eerste ronde, de magnetische kralen binden aan DNA met een hoger molecuulgewicht, die vervolgens wordt verwijderd door de kralen weg te gooien. De tweede ronde betreft het resterende product, waarbij de magnetische kralen binden aan DNA met een hoger molecuulgewicht en DNA met een lager molecuulgewicht verwijderen door het supernatant weg te gooien.

Beide dubbelstrengs DNA, enkelstrengs DNA, en RNA kan negatief geladen fosfaatgroepen in oplossing dissociëren, zodat ze kunnen worden gezuiverd en teruggewonnen met magnetische kralen. Echter, enkelstrengs DNA en RNA kunnen niet worden gescreend op fragmentgrootte. De secundaire structuur van dubbelstrengs DNA is over het algemeen een relatief stabiel lineair dubbelhelixmolecuul. In aanwezigheid van PEG, het aantal gedissocieerde negatief geladen fosfaatgroepen is positief gecorreleerd met de lengte ervan. Echter, RNA en enkelstrengs DNA hebben complexe secundaire structuren, die voorkomen dat de blootgestelde negatieve groepen positief gecorreleerd zijn met de lengte, waardoor het onmogelijk wordt om fragmenten zoals DNA te screenen. In aanvulling, vanwege de variërende stabiliteit van DNA en RNA bij verschillende pH-waarden, de pH van de buffers die worden gebruikt voor het zuiveren van DNA en RNA is verschillend omdat DNA en RNA verschillende stabiliteit hebben onder verschillende pH-omstandigheden.

Shanghai Lingjun Biotechnologie-fragmentsorterende magnetische kralen worden onafhankelijk ontwikkeld en geproduceerd van grondstoffen tot afgewerkte magnetische kralen, met strikte kwaliteitscontrole om ervoor te zorgen dat de prestaties en consistentie van het eindproduct aan hoge normen voldoen en een stabiele aanvoer van het product te garanderen. Het bedrijf investeert voortdurend in onderzoek en ontwikkeling, waarbij altijd de absolute nadruk wordt gelegd op de productkwaliteit, klanttevredenheid, en concurrentievermogen op de markt.

Introductie van leveranciers

Shanghai Lingjun Biotechnologie Co., Ltd.werd opgericht in 2016 dat een professionele fabrikant is van biomagnetische materialen en reagentia voor nucleïnezuurextractie.

We hebben een rijke ervaring in de extractie en zuivering van nucleïnezuren, eiwit zuivering, cel scheiding, chemiluminescentie en andere technische gebieden.

Onze producten worden op veel gebieden veel gebruikt, zoals medische testen, genetische testen, universitair onderzoek, genetische veredeling, enzovoort. Wij leveren niet alleen producten, maar kunnen ook OEM ondernemen, ODM, en andere behoeften. Als u gerelateerde behoeften heeft, neem dan gerust contact met ons op via sales01@lingjunbio.com.