Cara Menyediakan Penyelesaian Cekap untuk Isih Serpihan DNA?

Pada masa ini, banyak masalah dalam penyelidikan biologi molekul memerlukan penggredan DNA mengikut saiz, yang dikenali sebagai pengisihan serpihan. Elektroforesis pada gel agarose membolehkan pemisahan DNA dalam julat 10 ⁵~beratus pasangan asas. Sebaliknya, elektroforesis pada gel akrilamida membolehkan pemisahan DNA dalam julat beribu-ribu pasangan asas. Untuk mencapai resolusi tinggi dalam proses pengasingan ini, perbezaan saiz untuk memisahkan dua serpihan sepatutnya 10% dan kandungan asid nukleik sehingga 5 kepada 10 miligram.

Kaedah pemendakan terpilih, gabungan polietilena glikol dan manik magnet biologi, menonjol sebagai pendekatan yang lebih cekap dan mudah untuk menyusun serpihan. Dalam kepekatan tinggi larutan PEG dan NaCl, PEG mengganggu lapisan penghidratan di luar molekul DNA, menyebabkan mereka terkumpul dan memendakan. Ini mendedahkan kumpulan fosfat bercas negatif, yang kemudiannya membentuk 'jambatan garam’ dengan kumpulan karboksil pada manik magnet’ permukaan, membenarkan DNA diserap pada manik.

Semakin panjang DNA, kumpulan fosfat yang lebih bercas negatif terdedah pada permukaan, menjadikan keseluruhan molekul lebih bercas negatif dan lebih mudah diserap pada manik magnet, dan ia boleh dipulihkan dengan kepekatan PEG dan NaCl yang lebih rendah. Semakin pendek DNA, semakin tinggi kepekatan PEG dan NaCl yang diperlukan untuk memecahkan lapisan penghidratan pada permukaannya secara menyeluruh, mendedahkan kumpulan fosfat bercas negatif yang cukup untuk diserap oleh manik magnet dan kemudian dipulihkan. Jika anda ingin memulihkan serpihan DNA yang lebih pendek, anda perlu menambah jumlah manik magnet yang lebih besar. Nisbah suspensi manik magnetik kepada sampel juga mempengaruhi saiz saringan serpihan. Sebagai peningkatan kepekatan penggantungan manik magnetik, manik magnet akan meningkatkan kapasiti penjerapannya untuk serpihan kecil di samping serpihan besar.

Apabila panjang tertentu serpihan DNA akan dipisahkan oleh manik magnet, dua pusingan pengisihan biasanya dilakukan. Pada pusingan pertama, manik magnet mengikat DNA dengan berat molekul yang lebih tinggi, yang kemudiannya dikeluarkan dengan membuang manik. Pusingan kedua melibatkan baki produk, di mana manik magnet mengikat DNA dengan berat molekul yang lebih tinggi dan mengeluarkan DNA dengan berat molekul yang lebih rendah dengan membuang supernatan.

Kedua-dua DNA rantai dua, DNA untai tunggal, dan RNA boleh mengasingkan kumpulan fosfat bercas negatif dalam larutan supaya ia boleh ditulenkan dan dipulihkan dengan manik magnet. Namun begitu, DNA dan RNA untai tunggal tidak boleh disaring untuk saiz serpihan. Struktur sekunder DNA beruntai dua secara amnya adalah molekul heliks berganda linear yang agak stabil. Dengan kehadiran PEG, bilangan kumpulan fosfat bercas negatif yang dipisahkan adalah berkorelasi positif dengan panjangnya. Namun begitu, RNA dan DNA untai tunggal mempunyai struktur sekunder yang kompleks, yang menghalang kumpulan negatif yang terdedah daripada berkorelasi positif dengan panjang, menjadikannya mustahil untuk menyaring serpihan seperti DNA. Selain itu, disebabkan oleh kestabilan DNA dan RNA yang berbeza-beza pada nilai pH yang berbeza, pH penampan yang digunakan untuk memurnikan DNA dan RNA adalah berbeza kerana DNA dan RNA mempunyai kestabilan yang berbeza di bawah keadaan pH yang berbeza.

Serpihan Bioteknologi Shanghai Lingjun menyusun manik magnet dibangunkan secara bebas dan dihasilkan daripada bahan mentah kepada manik magnet siap, dengan kawalan kualiti yang ketat untuk memastikan prestasi dan konsistensi produk akhir memenuhi standard yang tinggi dan memastikan bekalan produk yang stabil. Syarikat itu terus melabur dalam penyelidikan dan pembangunan, sentiasa mengekalkan penekanan mutlak terhadap kualiti produk, kepuasan pelanggan, dan daya saing pasaran.

Pengenalan Pembekal

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd.ditubuhkan pada 2016 yang merupakan pengilang profesional bahan biomagnet dan reagen pengekstrakan asid nukleik.

Kami mempunyai pengalaman yang kaya dalam pengekstrakan dan penulenan asid nukleik, penulenan protein, pemisahan sel, chemiluminescence dan bidang teknikal lain.

Produk kami digunakan secara meluas dalam pelbagai bidang, seperti ujian perubatan, ujian genetik, penyelidikan universiti, pembiakan genetik, dan seterusnya. Kami bukan sahaja menyediakan produk tetapi juga boleh menjalankan OEM, ODM, dan keperluan lain. Jika anda mempunyai keperluan yang berkaitan, sila hubungi kami di sales01@lingjunbio.com.