Masalah Biasa dalam Kaedah Manik Magnet Pengekstrakan Asid Nukleik

Dalam proses pengesanan asid nukleik, pengekstrakan manik magnet digunakan secara meluas kerana sensitiviti pengesanannya yang tinggi, operasi boleh automatik, daya pengeluaran yang tinggi, keselamatan, dan kepantasan. Namun begitu, dalam proses pengekstrakan asid nukleik, terdapat butiran lanjut yang perlu diberi perhatian; kesilapan akan membawa kepada kegagalan keputusan; berikut untuk membantu anda menyusun beberapa masalah dan jawapan biasa. Saya harap anda akan membantu.

Bolehkah kecekapan pengekstrakan asid nukleik dipertingkatkan dengan meningkatkan jumlah manik magnetik?

Apabila hasil perahan tidak baik, sesetengah orang mungkin berfikir bahawa meningkatkan dos manik magnet boleh menyerap lebih banyak asid nukleik dan meningkatkan jumlah pengekstrakan asid nukleik, tetapi sebenarnya, bukan mudah untuk mencapai tujuan kaedah ini.

Dos manik magnet yang berlebihan akan mengakibatkan ketidakupayaannya untuk disebarkan secara sama rata ke dalam sistem larutan pada setiap langkah., mengurangkan keterserakannya dan membawa kepada penjerapan yang tidak lengkap, membasuh, dan proses elusi. Jumlah manik magnet yang berlebihan juga akan menyerap lebih banyak kekotoran, dan ketiadaan tapak pengikat asid nukleik pada permukaan manik magnet akan memberikan lebih banyak peluang untuk pengikatan kekotoran. Secara amnya, jumlah manik magnet yang diberikan dalam kaedah manik magnet kit pengekstrakan asid nukleik sudah cukup untuk memenuhi senario penggunaan biasa; jika anda menghadapi masalah hasil pengekstrakan asid nukleik yang rendah, anda perlu memberi pertimbangan sepenuhnya kepada belahan dan pengikatan, proses pembersihan dan elusi.

Bagaimana untuk mengelakkan degradasi asid nukleik semasa pengekstrakan asid nukleik?

Setiap langkah perlu memberi perhatian kepada keseragaman campuran yang mencukupi untuk mengelakkan sisa aglomerat menjejaskan keputusan eksperimen.; dalam elusi, suhu terlalu lama atau terlalu tinggi, asid nukleik mungkin terdegradasi; sampel ingat untuk tidak membeku dan mencairkan berulang, sampel yang diekstrak hendaklah berhati-hati untuk menyimpan pada suhu yang betul, pemeliharaan jangka panjang sejauh mungkin -80 ℃.

Kesan lisis sampel tidak baik, bolehkah kita meningkatkan jumlah lysate yang digunakan untuk meningkatkan kesan lisis dan meningkatkan kesan pengekstrakan?

Untuk kaedah manik magnetik, setiap peningkatan dalam isipadu cecair mengurangkan kemungkinan perlanggaran manik magnetik, sambil mengurangkan kemungkinan perlanggaran manik magnet akan menyebabkan penurunan ketara dalam kadar penjerapan. Jadi sangat kerap, walaupun meningkatkan larutan lisis dan larutan pencuci memang boleh memainkan peranan dalam meningkatkan lisis dan pencucian, teras pengekstrakan manik magnet adalah kecekapan penjerapan manik magnet asid nukleik, tidak dapat menjamin kecekapan perlanggaran manik magnet tidak dapat menjamin kecekapan pengekstrakan asid nukleik, jadi hanya meningkatkan jumlah reagen untuk meningkatkan kesan pengekstrakan tidak semestinya berkesan sepenuhnya.

Ketulenan pengekstrakan asid nukleik tidak tinggi, terdapat sisa protein atau garam, adakah lebih baik untuk membersihkan lebih banyak kali?

Ketulenan pengekstrakan asid nukleik tidak tinggi, boleh sesuai untuk meningkatkan bilangan kali satu atau dua kali pembersihan. Jika bilangan pembersihan terlalu tinggi, ia akan meningkatkan jumlah kehilangan asid nukleik dalam proses pembersihan. Secara amnya, bilangan masa pembersihan dalam 2-4 masa adalah sesuai.

Adakah mungkin untuk meningkatkan kesan pengekstrakan dengan meningkatkan jumlah sampel yang diekstrak?

Dalam julat sampel mempunyai kandungan asid nukleik yang tinggi dan boleh dibelah sepenuhnya oleh lysate, meningkatkan isipadu sampel boleh meningkatkan kesan pengekstrakan, sebaliknya, jika lisat tidak mencukupi dan isipadu sampel terlalu banyak, ia boleh menjejaskan kesan belahan, yang boleh menyebabkan penurunan kualiti pengekstrakan. Namun begitu, untuk sampel dengan kandungan asid nukleik yang rendah, meningkatkan jumlah sampel sebaliknya akan memperkenalkan lebih banyak kekotoran dan mengurangkan kualiti pengekstrakan asid nukleik akhir. Untuk sampel sedemikian, adalah disyorkan untuk melalui langkah pengayaan atau penumpuan dalam pra-rawatan sebelum memulakan pengekstrakan.

Mengapa kesan manik magnet, yang pada asalnya sangat baik, dikurangkan selepas menukar kit?

Terdapat pelbagai jenis manik magnet, saiz zarah yang berbeza, penyebaran yang berbeza, masa tindak balas magnet yang berbeza, matriks asas enkapsulasi yang berbeza, kumpulan fungsi pengubahsuaian lapisan luar yang berbeza, ketumpatan enkapsulasi yang berbeza, panjang lengan kumpulan berfungsi yang berbeza, yang akan membawa kepada perbezaan yang besar dalam ciri-ciri manik magnetik.

Jadi eksperimen dan sistem yang disesuaikan dengan manik magnet yang berbeza juga berbeza. Manik magnet yang berfungsi dengan baik dalam sistem asal adalah gabungan terbaik selepas beberapa siri penyaringan dan pemetaan kaedah. Jika manik magnet ditukar kepada sistem baru, adalah perkara biasa untuk melihat penurunan dalam kesan pengekstrakan. Dalam kebanyakan kes, manik magnet dan sistem reagen perlu melakukan sejumlah masa tertentu dengan pelarasan.

Kesan pengekstrakan tidak sebaik kit tertentu; adakah manik magnet tidak baik?

Ramai pengguna dalam proses menyaring manik magnet dalam sistem reagen yang sudah matang, hanya jumlah penggantian manik magnet yang sama, digunakan untuk membandingkan kesan manik magnet. Adalah mudah untuk membuat kesimpulan bahawa kesan manik tertentu adalah tidak baik, tetapi sebenarnya, kerana manik yang berbeza sesuai untuk sistem dan dos yang berbeza, selalunya perlu diselaraskan untuk mendapatkan hasil pengekstrakan yang lebih baik.

Pengenalan Pembekal

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd. ditubuhkan pada 2016 yang merupakan pengilang profesional bahan biomagnet dan reagen pengekstrakan asid nukleik.

Kami mempunyai pengalaman yang kaya dalam pengekstrakan dan penulenan asid nukleik, penulenan protein, pemisahan sel, chemiluminescence dan bidang teknikal lain.

Produk kami digunakan secara meluas dalam pelbagai bidang, seperti ujian perubatan, ujian genetik, penyelidikan universiti, pembiakan genetik, dan seterusnya. Kami bukan sahaja menyediakan produk tetapi juga boleh menjalankan OEM, ODM, dan keperluan lain. Jika anda mempunyai keperluan yang berkaitan, sila hubungi kami di sales01@lingjunbio.com.