Häufige Probleme bei der Nukleinsäureextraktion mit der Magnetkügelchen-Methode

Im Prozess des Nukleinsäurenachweises, Die magnetische Bead-Extraktion wird aufgrund ihrer hohen Nachweisempfindlichkeit häufig eingesetzt, automatisierbarer Betrieb, hoher Durchsatz, Sicherheit, und Schnelligkeit. Jedoch, im Prozess der Nukleinsäureextraktion, Es gibt weitere Details, auf die Sie achten sollten; Ein Fehler führt zum Scheitern der Ergebnisse; Im Folgenden finden Sie Hilfe bei der Organisation einiger häufiger Probleme und Antworten. Ich hoffe, Sie werden hilfreich sein.

Kann die Effizienz der Nukleinsäureextraktion durch eine Erhöhung der Menge an Magnetkügelchen verbessert werden??

Wenn das Extraktionsergebnis nicht gut ist, Einige Leute denken möglicherweise, dass eine Erhöhung der Dosierung magnetischer Kügelchen mehr Nukleinsäuren absorbieren und die Menge der Nukleinsäureextraktion verbessern kann, aber tatsächlich, Es ist nicht einfach, den Zweck dieser Methode zu erreichen.

Eine zu hohe Dosierung magnetischer Kügelchen führt dazu, dass diese bei jedem Schritt nicht gleichmäßig im Lösungssystem verteilt werden können, Ihre Dispergierbarkeit wird verringert, was zu einer unvollständigen Adsorption führt, Waschen, und Elutionsprozesse. Zu große Mengen an Magnetkügelchen absorbieren auch mehr Verunreinigungen, und das Fehlen von Nukleinsäure-Bindungsstellen auf der Oberfläche von Magnetkügelchen bietet mehr Möglichkeiten für die Bindung von Verunreinigungen. Im Allgemeinen, Die im Nukleinsäure-Extraktionskit mit der Magnet-Bead-Methode enthaltene Menge an Magnetkügelchen reicht aus, um die gängigen Anwendungsszenarien abzudecken; wenn Sie auf das Problem einer geringen Nukleinsäureextraktionsausbeute stoßen, Sie müssen die Spaltung und Bindung vollständig berücksichtigen, Reinigungs- und Elutionsprozess.

So vermeiden Sie den Abbau von Nukleinsäuren während der Nukleinsäureextraktion?

Bei jedem Schritt sollte auf eine ausreichende Mischgleichmäßigkeit geachtet werden, um zu vermeiden, dass Rückstände von Agglomeraten die Versuchsergebnisse beeinträchtigen; in der Elution, zu lange oder zu hohe Temperatur, Die Nukleinsäure kann abgebaut werden; Proben sollten nicht wiederholt eingefroren und aufgetaut werden, Extrahierte Proben sollten sorgfältig bei der richtigen Temperatur aufbewahrt werden, Langzeitkonservierung soweit wie möglich -80 ℃.

Der Effekt der Probenlyse ist nicht gut, Können wir die Menge des verwendeten Lysats erhöhen, um den Lyseeffekt zu verbessern und den Extraktionseffekt zu verstärken??

Für die Magnetperlenmethode, Jede Vergrößerung des Flüssigkeitsvolumens verringert die Wahrscheinlichkeit einer Kollision der Magnetkügelchen, Während die Wahrscheinlichkeit einer Kollision der Magnetkügelchen verringert wird, führt dies zu einer erheblichen Verringerung der Adsorptionsrate. Also sehr oft, obwohl eine Erhöhung der Lyselösung und der Waschlösung tatsächlich eine Rolle bei der Verbesserung der Lyse und des Waschens spielen kann, Der Kern der magnetischen Bead-Extraktion ist die Effizienz der magnetischen Bead-Adsorption von Nukleinsäure, Die Effizienz der Kollision mit Magnetkügelchen kann nicht garantiert werden. Die Effizienz der Nukleinsäureextraktion kann nicht garantiert werden, Eine einfache Erhöhung der Reagenzienmenge zur Verbesserung des Extraktionseffekts ist also nicht unbedingt vollständig wirksam.

Die Reinheit der Nukleinsäureextraktion ist nicht hoch, es sind Eiweiß- oder Salzrückstände vorhanden, Ist es besser, öfter zu reinigen??

Die Reinheit der Nukleinsäureextraktion ist nicht hoch, Es kann sinnvoll sein, die Anzahl der Reinigungen um ein oder zwei Mal zu erhöhen. Wenn die Anzahl der Reinigungen zu hoch ist, Dadurch erhöht sich der Nukleinsäureverlust im Reinigungsprozess. Im Allgemeinen, die Anzahl der Reinigungsvorgänge 2-4 Zeiten ist angemessen.

Ist es möglich, den Extraktionseffekt durch eine Erhöhung der entnommenen Probenmenge zu verstärken??

Innerhalb des Bereichs, in dem die Probe einen hohen Nukleinsäuregehalt aufweist und vom Lysat vollständig gespalten werden kann, Durch Erhöhen des Probenvolumens kann der Extraktionseffekt erhöht werden, im Gegenteil, wenn das Lysat nicht ausreicht und das Probenvolumen zu groß ist, es kann den Spaltungseffekt beeinträchtigen, Dies kann zu einer Verschlechterung der Extraktionsqualität führen. Jedoch, für Proben mit geringem Nukleinsäuregehalt, Eine Erhöhung des Probenvolumens führt stattdessen zu mehr Verunreinigungen und verringert die Qualität der endgültigen Nukleinsäureextraktion. Für solche Proben, Es wird empfohlen, den Anreicherungs- oder Konzentrationsschritt in der Vorbehandlung durchzuführen, bevor mit der Extraktion begonnen wird.

Warum ist die Wirkung von Magnetperlen?, was ursprünglich sehr gut war, verringert sich nach einem Kit-Wechsel?

Es gibt viele Arten von Magnetperlen, unterschiedliche Partikelgröße, unterschiedliche Streuung, unterschiedliche magnetische Reaktionszeit, unterschiedliche Verkapselungsgrundmatrix, verschiedene funktionelle Gruppen zur Modifikation der Außenschicht, unterschiedliche Verkapselungsdichte, unterschiedliche Funktionsgruppen-Armlängen, Dies führt zu einem großen Unterschied in den Eigenschaften der Magnetperlen.

Daher sind auch die Experimente und Systeme, die an verschiedene Magnetperlen angepasst sind, unterschiedlich. Die Magnetkügelchen, die im ursprünglichen System eine gute Leistung erbringen, sind nach einer Reihe von Screening- und Methodenkartierungen die beste Kombination. Wenn die Magnetperlen in ein neues System umgewandelt werden, Es ist normal, dass die Extraktionswirkung nachlässt. In den meisten Fällen, Die magnetischen Beads und Reagenzsysteme müssen eine gewisse Zeit mit der Anpassung verbringen.

Der Extraktionseffekt ist nicht so gut wie bei einem bestimmten Kit; Sind die Magnetperlen schlecht??

Viele Benutzer sind dabei, Magnetkügelchen im bereits ausgereiften Reagenzsystem zu screenen, einfach die gleiche Menge an Ersatzmagnetperlen, Wird verwendet, um die Wirkung von Magnetperlen zu vergleichen. Daraus lässt sich leicht schließen, dass die Wirkung einer bestimmten Perle nicht gut ist, aber tatsächlich, denn unterschiedliche Perlen eignen sich für unterschiedliche Systeme und Dosierungen, Oft müssen sie angepasst werden, um bessere Extraktionsergebnisse zu erzielen.

Lieferantenvorstellung

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd. wurde gegründet in 2016 Das ist ein professioneller Hersteller von biomagnetischen Materialien und Nukleinsäure-Extraktionsreagenzien.

Wir verfügen über umfangreiche Erfahrung in der Extraktion und Reinigung von Nukleinsäuren, Proteinreinigung, Zelltrennung, Chemilumineszenz und andere technische Bereiche.

Unsere Produkte werden in vielen Bereichen weit verbreitet eingesetzt, wie zum Beispiel medizinische Tests, Gentests, universitäre Forschung, genetische Zucht, und so weiter. Wir liefern nicht nur Produkte, sondern können auch OEM übernehmen, ODM, und andere Bedürfnisse. Wenn Sie entsprechende Bedürfnisse haben, Bitte kontaktieren Sie uns unter sales01@lingjunbio.com.