Almindelige problemer i magnetisk perlemetoden nukleinsyreekstraktion

I processen med nukleinsyredetektion, magnetisk perleekstraktion er meget udbredt på grund af dens høje detektionsfølsomhed, automatiserbar drift, høj gennemstrømning, sikkerhed, og hurtighed. Imidlertid, i processen med nukleinsyreekstraktion, der er flere detaljer at være opmærksom på; en fejl vil føre til fejl i resultaterne; følgende for at hjælpe dig med at organisere nogle almindelige problemer og svar. Jeg håber, du vil være behjælpelig.

Kan effektiviteten af ​​nukleinsyreekstraktion forbedres ved at øge mængden af ​​magnetiske perler?

Når ekstraktionsresultatet ikke er godt, nogle mennesker tror måske, at en øget dosis af magnetiske perler kan absorbere flere nukleinsyrer og forbedre mængden af ​​nukleinsyreekstraktion, men faktisk, det er ikke let at opnå formålet med denne metode.

Overdreven dosering af magnetiske perler vil resultere i deres manglende evne til at blive jævnt fordelt i opløsningssystemet ved hvert trin, reducerer deres dispergerbarhed og fører til ufuldstændig adsorption, vask, og elueringsprocesser. For store mængder af magnetiske perler vil også adsorbere flere urenheder, og fraværet af nukleinsyrebindingssteder på overfladen af ​​magnetiske perler vil give flere muligheder for binding af urenheder. Generelt, mængden af ​​magnetiske perler givet i nukleinsyreekstraktionssættet med magnetisk perlemetode er nok til at opfylde de almindelige anvendelsesscenarier; hvis du støder på problemet med lavt nukleinsyreekstraktionsudbytte, du skal tage fuldt hensyn til spaltningen og bindingen, rense- og elueringsproces.

Hvordan man undgår nukleinsyrenedbrydning under nukleinsyreekstraktion?

Hvert trin skal være opmærksom på passende blandingsensartethed for at undgå, at rester af agglomerater påvirker forsøgsresultaterne; i elueringen, for lang eller for høj temperatur, nukleinsyren kan blive nedbrudt; prøver husk ikke gentagen frysning og optøning, ekstraherede prøver bør være omhyggelige med at gemme ved den rigtige temperatur, langtidsbevaring af så vidt muligt -80 ℃.

Prøvelyseeffekten er ikke god, kan vi øge mængden af ​​lysat, der bruges til at forbedre lyseringseffekten og øge ekstraktionseffekten?

Til den magnetiske perlemetode, hver stigning i væskens volumen reducerer risikoen for kollision af de magnetiske perler, samtidig med at risikoen for kollision af de magnetiske perler reduceres, vil det føre til et betydeligt fald i adsorptionshastigheden. Så meget ofte, selvom en forøgelse af lyseringsopløsningen og vaskeopløsningen faktisk kan spille en rolle i at forbedre lysis og vask, kernen i magnetisk perleekstraktion er effektiviteten af ​​magnetisk perleadsorption af nukleinsyre, kan ikke garantere effektiviteten af ​​magnetisk perlekollision er ikke i stand til at garantere effektiviteten af ​​nukleinsyreekstraktion, så blot at øge mængden af ​​reagenser for at forbedre ekstraktionseffekten er ikke nødvendigvis helt effektiv.

Nukleinsyreekstraktionsrenheden er ikke høj, der er protein- eller saltrester, er det bedre at gøre rent flere gange?

Nukleinsyreekstraktionsrenheden er ikke høj, kan være hensigtsmæssigt at øge antallet af gange en eller to rengøring. Hvis antallet af rengøringer er for højt, det vil øge mængden af ​​nukleinsyretab i renseprocessen. Generelt, antallet af rengøringstider i 2-4 tider er passende.

Er det muligt at øge ekstraktionseffekten ved at øge mængden af ​​ekstraheret prøve?

Inden for det område, at prøven har et højt nukleinsyreindhold og kan spaltes fuldstændigt af lysatet, forøgelse af prøvevolumenet kan øge ekstraktionseffekten, tværtimod, hvis lysatet er utilstrækkeligt, og prøvevolumenet er for stort, det kan påvirke spaltningseffekten, hvilket kan føre til forringelse af kvaliteten af ​​udvindingen. Imidlertid, for prøver med lavt nukleinsyreindhold, forøgelse af prøvevolumenet vil i stedet indføre flere urenheder og reducere kvaliteten af ​​den endelige nukleinsyreekstraktion. For sådanne prøver, det anbefales at gennemgå berigelses- eller koncentreringstrinnet i forbehandlingen, før ekstraktionen påbegyndes.

Hvorfor er effekten af ​​magnetiske perler, hvilket oprindeligt var meget godt, reduceret efter udskiftning af et sæt?

Der findes mange slags magnetiske perler, forskellig partikelstørrelse, forskellig spredning, forskellig magnetisk responstid, forskellig indkapslingsgrundmatrix, forskellige ydre lag modifikation funktionelle grupper, forskellig indkapslingstæthed, forskellige funktionelle gruppe armlængder, hvilket vil føre til en stor forskel i magnetiske perlers egenskaber.

Så eksperimenterne og systemerne tilpasset forskellige magnetiske perler er også forskellige. De magnetiske perler, der fungerer godt i det originale system, er den bedste kombination efter en række screening og metodekortlægning. Hvis de magnetiske perler ændres til et nyt system, det er normalt at se et fald i ekstraktionseffekten. I de fleste tilfælde, the magnetic beads and reagent systems have to do a certain amount of time with the adjustment.

The extraction effect is not as good as a certain kit; are the magnetic beads bad?

Many users in the process of screening magnetic beads in the already mature reagent system, simply equal amount of replacement of magnetic beads, used to compare the effect of magnetic beads. It is easy to conclude that the effect of a certain bead is not good, men faktisk, because different beads are suitable for different systems and dosages, often need to be adjusted to get better extraction results.

Leverandørintroduktion

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd. blev etableret i 2016 som er en professionel producent af biomagnetiske materialer og nukleinsyreekstraktionsreagenser.

Vi har stor erfaring med udvinding og oprensning af nukleinsyre, proteinoprensning, celleadskillelse, kemiluminescens og andre tekniske områder.

Vores produkter er meget udbredt inden for mange områder, såsom medicinsk test, genetisk testning, universitetsforskning, genetisk avl, og så videre. Vi leverer ikke kun produkter, men kan også påtage os OEM, ODM, og andre behov. Hvis du har relaterede behov, er du velkommen til at kontakte os på sales01@lingjunbio.com.