Strategi asas dan kaedah untuk de-endotoxinization semasa penulenan DNA plasmid

Penggunaan plasmid bebas endotoksin harus dipertimbangkan apabila DNA plasmid yang diekstrak digunakan untuk pemindahan primer, penggantungan, atau sel sensitif, kajian pembungkaman gen, mikromanipulasi suntikan sel, terapi gen atau vaksin DNA,dan eksperimen lain yang sangat mencabar.

De-endotoxinization plasmid merujuk kepada langkah penyingkiran endotoksin (lipopolisakarida, LPS) semasa pemurnian DNA plasmid. Endotoksin ialah lipopolisakarida dan kompleks protein dalam dinding sel bakteria Gram-negatif yang dibebaskan apabila bakteria melisis. Kehadiran endotoksin sangat menjejaskan kecekapan pemindahan dan boleh mengaktifkan tindak balas bukan spesifik sel imun., menghasilkan positif palsu dalam eksperimen. Oleh itu, untuk memastikan kadar pemindahan yang tinggi dan kemandirian sel yang ditransfeksi yang tinggi, endotoksin mesti disingkirkan daripada proses penyediaan plasmid.

Kepentingan penyingkiran endotoksin ialah:

1.Mempengaruhi kecekapan pemindahan: endotoksin akan mengurangkan kecekapan pemindahan sel primer dan sel kultur sensitif, dan mengganggu pemindahan in vitro sel imun.

2.Aktifkan tindak balas imun: endotoksin juga boleh menyebabkan demam, tekanan darah rendah, gangguan pernafasan, pembekuan intravaskular, dan sindrom kejutan endotoksik, endotoksin boleh merangsang sintesis faktor keradangan IL-1, IL-6, IL-10, dan TNF-α dengan mengaktifkan TLR4.

3,.Keperluan pengawalseliaan dadah: Pentadbiran Dadah Negeri menetapkan bahawa kandungan endotoksin dalam produk vaksin DNA tidak boleh lebih tinggi daripada 0.01 EU/μg, dan dos untuk kegunaan peribadi tidak boleh melebihi 20 EU.

Terdapat dua strategi untuk penyingkiran endotoksin:

1. Penyingkiran pada peringkat mengikat: endotoksin dikeluarkan pada peringkat pengikatan DNA plasmid.

2. Penyingkiran selepas elusi: membuang endotoksin selepas elusi DNA plasmid.

Kaedah penyingkiran endotoksin semasa terutamanya termasuk:

1. Penyingkiran bukan selektif: seperti penjerapan, ultrafiltrasi, dan kromatografi pengecualian.

2. Kerpasan terpilih: cth., menggunakan polimiksin B, histidin, dan kromatografi pertalian poli-L-lisin.

3. Kromatografi interaksi hidrofobik dan kromatografi pertukaran ion.

kami kit pengekstrakan DNA plasmid bebas endotoksin (kaedah manik magnetik) mengamalkan formula penyelesaian unik yang hanya memerlukan beberapa cucian mudah untuk membuang endotoksin, protein, polisakarida, dan kekotoran lain, dan kemudian memperoleh DNA plasmid berkualiti tinggi. Produk ini mengekstrak dan memurnikan DNA plasmid dengan sedikit kerosakan pada plasmid, kepekatan pengekstrakan yang tinggi, dan bahagian super-helix yang tinggi. DNA plasmid yang diekstrak boleh digunakan untuk pencernaan, PCR, penjujukan, pengikatan,n dan transformasi.

Pembekal

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd.ditubuhkan pada 2016 yang merupakan pengilang profesional bahan biomagnet dan reagen pengekstrakan asid nukleik.

Kami mempunyai pengalaman yang kaya dalam pengekstrakan dan penulenan asid nukleik, penulenan protein, pemisahan sel, chemiluminescence dan bidang teknikal lain.

Produk kami digunakan secara meluas dalam pelbagai bidang, seperti ujian perubatan, ujian genetik, penyelidikan universiti, pembiakan genetik, dan seterusnya. Kami bukan sahaja menyediakan produk tetapi juga boleh menjalankan OEM, ODM, dan keperluan lain.Jika anda mempunyai keperluan yang berkaitan, sila hubungi kami disales01@lingjunbio.com.

• Kit Pengekstrakan RNA Jumlah Sejagat: The Key to Preventing RNA Degradation in Routine Experiments
• Pengekstrakan Asid Nukleik Manik Magnet: Pemburu Halimunan Menangkap “Nipah Virus”
• Teknologi pengekstrakan asid nukleik berasaskan manik magnet: Menerajui revolusi kecekapan dalam industri biofarmaseutikal
• Penilaian Praktikal Kit Pengekstrakan Jumlah RNA Sejagat Berasaskan Manik Magnet Tujuan Am
• Pengekstrakan Asid Nukleik Berasaskan Manik Magnetik untuk Perubatan Ketepatan