Basisstrategieën en methoden voor de-endotoxinen tijdens plasmide-DNA-zuivering

Het gebruik van endotoxinevrije plasmiden moet worden overwogen wanneer het geëxtraheerde plasmide-DNA wordt gebruikt voor transfectie van primair, oponthoud, of gevoelige cellen, onderzoeken naar genuitschakeling, micromanipulatie met celinjectie, gentherapie of DNA-vaccins,en andere extreem veeleisende experimenten.

Plasmide-endotoxinenisatie verwijst naar de stap van het verwijderen van endotoxine (lipopolysacharide, LPS) tijdens de zuivering van plasmide-DNA. Endotoxine is een lipopolysacharide- en eiwitcomplex in de celwand van Gram-negatieve bacteriën dat vrijkomt wanneer de bacteriën lyseren. De aanwezigheid van endotoxine heeft een grote invloed op de efficiëntie van de transfectie en kan niet-specifieke reacties van immuuncellen activeren, resulterend in valse positieven in het experiment. Daarom, om een ​​hoge transfectiesnelheid en hoge overleving van getransfecteerde cellen te garanderen, endotoxine moet uit het proces van plasmidebereiding worden verwijderd.

Het belang van de verwijdering van endotoxinen is:

1.Beïnvloed de transfectie-efficiëntie: endotoxine zal de transfectie-efficiëntie van primaire cellen en gevoelige gekweekte cellen verminderen, en interfereren met de in vitro transfectie van immuuncellen.

2.Activeer de immuunrespons: endotoxine kan ook tot koorts leiden, hypotensie, ademhalingsproblemen, intravasculaire coagulatie, en endotoxisch shocksyndroom, endotoxine kan de synthese van ontstekingsfactoren IL-1 stimuleren, IL-6, IL-10, en TNF-a door TLR4 te activeren.

3,.Regelgevende vereisten voor geneesmiddelen: De State Drug Administration bepaalt dat het gehalte aan endotoxine in DNA-vaccinproducten niet hoger mag zijn dan 0.01 EU/μg, en de dosis voor persoonlijk gebruik mag niet overschrijden 20 EU.

Er zijn twee strategieën voor het verwijderen van endotoxinen:

1. Verwijdering in de bindende fase: endotoxine wordt verwijderd in de plasmide-DNA-bindingsfase.

2. Verwijdering na elutie: verwijder endotoxine na elutie van plasmide-DNA.

De huidige methoden voor het verwijderen van endotoxinen omvatten voornamelijk::

1. Niet-selectieve verwijdering: zoals adsorptie, ultrafiltratie, en uitsluitingschromatografie.

2. Selectieve neerslag: bijv., gebruik van polymyxine B, histidines, en poly-L-lysine-affiniteitschromatografie.

3. Hydrofobe interactiechromatografie en ionenuitwisselingschromatografie.

Ons endotoxinevrije plasmide-DNA-extractiekit (magnetische kralenmethode) gebruikt een unieke oplossingsformule die slechts een paar eenvoudige wasbeurten vereist om endotoxine te verwijderen, eiwitten, polysachariden, en andere onzuiverheden, en verkrijgt vervolgens plasmide-DNA van hoge kwaliteit. Dit product extraheert en zuivert plasmide-DNA met weinig schade aan plasmiden, hoge extractieconcentratie, en een hoog aandeel superhelix. Het geëxtraheerde plasmide-DNA kan worden gebruikt voor vertering, PCR, sequentiebepaling, ligatie,n en transformatie.

Leverancier

Shanghai Lingjun Biotechnologie Co., Ltd.werd opgericht in 2016 dat een professionele fabrikant is van biomagnetische materialen en reagentia voor nucleïnezuurextractie.

We hebben een rijke ervaring in de extractie en zuivering van nucleïnezuren, eiwit zuivering, cel scheiding, chemiluminescentie en andere technische gebieden.

Onze producten worden op veel gebieden veel gebruikt, zoals medische testen, genetische testen, universitair onderzoek, genetische veredeling, enzovoort. Wij leveren niet alleen producten, maar kunnen ook OEM ondernemen, ODM, en andere behoeften. Als u een gerelateerde behoefte heeft, neem dan gerust contact met ons op viasales01@lingjunbio.com.

• Universele totaal RNA-extractiekit: De sleutel tot het voorkomen van RNA-degradatie bij routinematige experimenten
• Magnetische parelnucleïnezuurextractie: De onzichtbare jager die de gevangen neemt “Nipah-virus”
• Op magnetische kralen gebaseerde nucleïnezuurextractietechnologie: Leidt de efficiëntierevolutie in de biofarmaceutische industrie
• Praktische evaluatie van een op magnetische kralen gebaseerde universele totaal-RNA-extractiekit voor algemeen gebruik
• Magnetische parelgebaseerde nucleïnezuurextractie voor precisiegeneeskunde