Основные стратегии и методы деэндотоксинизации при очистке плазмидной ДНК

The use of endotoxin-free plasmids should be considered when the extracted plasmid DNA is used for transfection of primary, приостановка, или чувствительные клетки, исследования подавления генов, микроманипуляция с инъекцией клеток, gene therapy or DNA vaccines,and other extremely demanding experiments.

Plasmid de-endotoxinization refers to the step of removing endotoxin (липополисахарид, ЛПС) during the purification of plasmid DNA. Endotoxin is a lipopolysaccharide and protein complex in the cell wall of Gram-negative bacteria that is released when the bacteria lyse. The presence of endotoxin greatly affects the transfection efficiency and may activate non-specific reactions of immune cells, resulting in false positives in the experiment. Поэтому, in order to ensure a high transfection rate and high survival of transfected cells, endotoxin must be removed from the process of plasmid preparation.

The importance of endotoxin removal is:

1.Affect the transfection efficiency: endotoxin will reduce the transfection efficiency of primary cells and sensitive cultured cells, and interfere with the in vitro transfection of immune cells.

2.Activate immune response: endotoxin can also lead to fever, hypotension, respiratory distress, intravascular coagulation, and endotoxic shock syndrome, endotoxin can stimulate the synthesis of inflammatory factors IL-1, IL-6, IL-10, and TNF-α by activating TLR4.

3,.Drug regulatory requirements: The State Drug Administration stipulates that the content of endotoxin in DNA vaccine products should not be higher than 0.01 EU/μg, and the dose for personal use should not exceed 20 EU.

There are two strategies for endotoxin removal:

1. Removal at the binding stage: endotoxin is removed at the plasmid DNA binding stage.

2. Removal after elution: remove endotoxin after plasmid DNA elution.

The current endotoxin removal methods mainly include:

1. Non-selective removal: such as adsorption, ultrafiltration, and exclusion chromatography.

2. Selective precipitation: например, using polymyxin B, histidines, and poly-L-lysine affinity chromatography.

3. Hydrophobic interaction chromatography and ion exchange chromatography.

Наш endotoxin-free plasmid DNA extraction kit (метод магнитных шариков) adopts a unique solution formula that requires only a few simple washes to remove endotoxin, белки, полисахариды, и другие примеси, and then obtains high-quality plasmid DNA. This product extracts and purifies plasmid DNA with little damage to plasmids, high extraction concentration, and a high proportion of super-helix. The extracted plasmid DNA can be used for digestion, ПЦР, секвенирование, перевязка,n and transformation.

Поставщик

Шанхайская биотехнологическая компания Линцзюнь., ОООбыл создан в 2016 который является профессиональным производителем биомагнитных материалов и реагентов для экстракции нуклеиновых кислот..

Мы имеем богатый опыт в экстракции и очистке нуклеиновых кислот., очистка белка, разделение клеток, хемилюминесценция и другие области техники.

Наша продукция широко используется во многих областях., например, медицинское тестирование, генетическое тестирование, университетские исследования, генетическое разведение, и так далее. Мы не только поставляем продукцию, но и можем взять на себя OEM, ОДМ, и другие потребности. Если у вас есть соответствующие потребности, пожалуйста, не стесняйтесь обращаться к нам по адресуsales01@lingjunbio.com.

• Оптимизация ПЭГ/солевого буфера | Максимизируйте стабильность магнитных шариков & Консистенция анализа
• Как магнитная экстракция нуклеиновой кислоты ускоряет работу лабораторий?
• Эффективность отбора фрагментов ДНК: Оптимизация количества и соотношений магнитных шариков кремнезема
• Техническая оптимизация экстракции тотальной РНК из сложных тканей животных: Оценка протокола мини-экстракции на основе метода магнитных шариков
• Ручное извлечение магнитных шариков зимой: Основные меры предосторожности при работе при низких температурах