Grunnleggende strategier og metoder for de-endotoksinisering under plasmid DNA-rensing

Bruk av endotoksinfrie plasmider bør vurderes når det ekstraherte plasmid-DNA brukes til transfeksjon av primær, suspensjon, eller sensitive celler, studier av gendemping, celleinjeksjon mikromanipulasjon, genterapi eller DNA-vaksiner,og andre ekstremt krevende eksperimenter.

Plasmidde-endotoksinisering refererer til trinnet med å fjerne endotoksin (lipopolysakkarid, LPS) under rensingen av plasmid-DNA. Endotoksin er et lipopolysakkarid- og proteinkompleks i celleveggen til gramnegative bakterier som frigjøres når bakteriene lyserer. Tilstedeværelsen av endotoksin påvirker i stor grad transfeksjonseffektiviteten og kan aktivere uspesifikke reaksjoner av immunceller, resulterer i falske positiver i eksperimentet. Derfor, for å sikre en høy transfeksjonsrate og høy overlevelse av transfekterte celler, endotoksin må fjernes fra prosessen med plasmidfremstilling.

Viktigheten av endotoksinfjerning er:

1.Påvirker transfeksjonseffektiviteten: endotoksin vil redusere transfeksjonseffektiviteten til primære celler og sensitive dyrkede celler, og forstyrre in vitro-transfeksjonen av immunceller.

2.Aktiver immunrespons: endotoksin kan også føre til feber, hypotensjon, pustebesvær, intravaskulær koagulasjon, og endotoksisk sjokksyndrom, endotoksin kan stimulere syntesen av inflammatoriske faktorer IL-1, IL-6, IL-10, og TNF-α ved å aktivere TLR4.

3,.Legemiddelregulerende krav: Statens legemiddelverk fastsetter at innholdet av endotoksin i DNA-vaksineprodukter ikke skal være høyere enn 0.01 EU/μg, og dosen for personlig bruk bør ikke overstige 20 EU.

Det er to strategier for fjerning av endotoksin:

1. Fjerning på bindingsstadiet: endotoksin fjernes ved plasmid-DNA-bindingsstadiet.

2. Fjerning etter eluering: fjerne endotoksin etter plasmid-DNA-eluering.

De nåværende metodene for fjerning av endotoksin inkluderer hovedsakelig:

1. Ikke-selektiv fjerning: som adsorpsjon, ultrafiltrering, og eksklusjonskromatografi.

2. Selektiv nedbør: f.eks., bruker polymyxin B, histidiner, og poly-L-lysin affinitetskromatografi.

3. Hydrofob interaksjonskromatografi og ionebytterkromatografi.

Vår endotoksinfritt plasmid DNA-ekstraksjonssett (magnetisk perlemetode) bruker en unik løsningsformel som krever bare noen få enkle vaskinger for å fjerne endotoksin, proteiner, polysakkarider, og andre urenheter, og oppnår deretter høykvalitets plasmid-DNA. Dette produktet ekstraherer og renser plasmid-DNA med liten skade på plasmider, høy ekstraksjonskonsentrasjon, og en høy andel av superhelix. Det ekstraherte plasmid-DNA kan brukes til fordøyelse, PCR, sekvensering, ligering,n og transformasjon.

Leverandør

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd.ble etablert i 2016 som er en profesjonell produsent av biomagnetiske materialer og nukleinsyreekstraksjonsreagenser.

Vi har rik erfaring innen utvinning og rensing av nukleinsyre, proteinrensing, celleseparasjon, kjemiluminescens og andre tekniske felt.

Våre produkter er mye brukt på mange felt, som medisinsk testing, genetisk testing, universitetsforskning, genetisk avl, og så videre. Vi leverer ikke bare produkter, men kan også påta oss OEM, ODM, og andre behov. Hvis du har et relatert behov, ta gjerne kontakt med oss ​​påsales01@lingjunbio.com.

• PEG/saltbufferoptimalisering | Maksimer magnetisk perlestabilitet & Analysekonsistens
• Hvordan magnetisk perle-nukleinsyreekstraksjon øker hastigheten på laboratoriene?
• DNA-fragmentutvalgseffektivitet: Optimalisering av silica magnetiske perleinngang og forhold
• Teknisk optimalisering av total RNA-ekstraksjon fra komplekse dyrevev: Evaluering av en mini-ekstraksjonsprotokoll basert på den magnetiske perlemetoden
• Manuell magnetisk perleutvinning om vinteren: Viktige forholdsregler for lavtemperaturhåndtering