Stratégies et méthodes de base pour la désendotoxination lors de la purification de l'ADN plasmidique

L'utilisation de plasmides sans endotoxines doit être pris en compte lorsque l’ADN plasmidique extrait est utilisé pour la transfection de, suspension, ou cellules sensibles, études de silençage génétique, micromanipulation par injection cellulaire, thérapie génique ou vaccins à ADN,et d'autres expériences extrêmement exigeantes.

La désendotoxination plasmidique fait référence à l'étape d'élimination de l'endotoxine (lipopolysaccharide, LPS) lors de la purification de l'ADN plasmidique. L'endotoxine est un complexe lipopolysaccharide et protéine présent dans la paroi cellulaire des bactéries à Gram négatif qui est libéré lors de la lyse des bactéries.. La présence d'endotoxine affecte grandement l'efficacité de la transfection et peut activer des réactions non spécifiques des cellules immunitaires, ce qui entraîne des faux positifs dans l'expérience. Donc, afin d'assurer un taux de transfection élevé et une survie élevée des cellules transfectées, l'endotoxine doit être éliminée du processus de préparation du plasmide.

L’importance de l’élimination des endotoxines est:

1.Affecte l’efficacité de la transfection: l'endotoxine réduira l'efficacité de la transfection des cellules primaires et des cellules sensibles en culture, et interférer avec la transfection in vitro des cellules immunitaires.

2.Activer la réponse immunitaire: l'endotoxine peut également entraîner de la fièvre, hypotension, détresse respiratoire, coagulation intravasculaire, et syndrome de choc endotoxique, l'endotoxine peut stimuler la synthèse des facteurs inflammatoires IL-1, IL-6, IL-10, et TNF-α en activant TLR4.

3,.Exigences réglementaires en matière de médicaments: La State Drug Administration stipule que la teneur en endotoxines des produits vaccinaux à ADN ne doit pas être supérieure à 0.01 UE/μg, et la dose pour usage personnel ne doit pas dépasser 20 UE.

Il existe deux stratégies pour éliminer les endotoxines:

1. Retrait au stade de la reliure: l'endotoxine est éliminée au stade de la liaison à l'ADN plasmidique.

2. Retrait après élution: éliminer l'endotoxine après l'élution de l'ADN plasmidique.

Les méthodes actuelles d'élimination des endotoxines comprennent principalement:

1. Suppression non sélective: comme l'adsorption, ultrafiltration, et chromatographie d'exclusion.

2. Précipitations sélectives: par ex., en utilisant la polymyxine B, histidines, et chromatographie d'affinité poly-L-lysine.

3. Chromatographie d'interaction hydrophobe et chromatographie d'échange d'ions.

Notre kit d'extraction d'ADN plasmidique sans endotoxine (méthode des billes magnétiques) adopte une formule de solution unique qui ne nécessite que quelques lavages simples pour éliminer l'endotoxine, protéines, polysaccharides, et autres impuretés, puis obtient un ADN plasmidique de haute qualité. Ce produit extrait et purifie l'ADN plasmidique avec peu de dommages aux plasmides, concentration d'extraction élevée, et une forte proportion de super-hélice. L'ADN plasmidique extrait peut être utilisé pour la digestion, RAP, séquençage, ligature,n et transformation.

Fournisseur

Société de biotechnologie Shanghai Lingjun., Ltd.a été établi en 2016 qui est un fabricant professionnel de matériaux biomagnétiques et de réactifs d'extraction d'acide nucléique.

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