Strategi dan metode dasar de-endotoksinisasi selama pemurnian DNA plasmid

Penggunaan plasmid bebas endotoksin harus dipertimbangkan ketika DNA plasmid yang diekstraksi digunakan untuk transfeksi DNA primer, penangguhan, atau sel sensitif, studi pembungkaman gen, mikromanipulasi injeksi sel, terapi gen atau vaksin DNA,dan eksperimen lain yang sangat menuntut.

De-endotoksinisasi plasmid mengacu pada langkah menghilangkan endotoksin (lipopolisakarida, LPS) selama pemurnian DNA plasmid. Endotoksin adalah kompleks lipopolisakarida dan protein pada dinding sel bakteri Gram negatif yang dilepaskan ketika bakteri tersebut lisis.. Kehadiran endotoksin sangat mempengaruhi efisiensi transfeksi dan dapat mengaktifkan reaksi non-spesifik sel imun, menghasilkan positif palsu dalam percobaan. Karena itu, untuk memastikan tingkat transfeksi yang tinggi dan kelangsungan hidup sel yang ditransfusikan, endotoksin harus dikeluarkan dari proses persiapan plasmid.

Pentingnya penghapusan endotoksin adalah:

1.Mempengaruhi efisiensi transfeksi: endotoksin akan mengurangi efisiensi transfeksi sel primer dan sel kultur sensitif, dan mengganggu transfeksi sel imun secara in vitro.

2.Aktifkan respon imun: endotoksin juga dapat menyebabkan demam, hipotensi, gangguan pernapasan, koagulasi intravaskular, dan sindrom syok endotoksik, endotoksin dapat merangsang sintesis faktor inflamasi IL-1, IL-6, IL-10, dan TNF-α dengan mengaktifkan TLR4.

3,.Persyaratan peraturan obat: Badan Pengawas Obat Negara menetapkan bahwa kandungan endotoksin dalam produk vaksin DNA tidak boleh lebih tinggi dari 0.01 UE/μg, dan dosis untuk penggunaan pribadi tidak boleh melebihi 20 UE.

Ada dua strategi untuk menghilangkan endotoksin:

1. Penghapusan pada tahap pengikatan: endotoksin dihilangkan pada tahap pengikatan DNA plasmid.

2. Penghapusan setelah elusi: menghilangkan endotoksin setelah elusi DNA plasmid.

Metode penghilangan endotoksin saat ini terutama meliputi:

1. Penghapusan non-selektif: seperti adsorpsi, ultrafiltrasi, dan kromatografi eksklusi.

2. Curah hujan selektif: misalnya, menggunakan polimiksin B, histidin, dan kromatografi afinitas poli-L-lisin.

3. Kromatografi interaksi hidrofobik dan kromatografi penukar ion.

Kita kit ekstraksi DNA plasmid bebas endotoksin (metode manik magnetik) mengadopsi formula solusi unik yang hanya memerlukan beberapa kali pencucian sederhana untuk menghilangkan endotoksin, protein, polisakarida, dan kotoran lainnya, dan kemudian memperoleh DNA plasmid berkualitas tinggi. Produk ini mengekstrak dan memurnikan DNA plasmid dengan sedikit kerusakan pada plasmid, konsentrasi ekstraksi yang tinggi, dan sebagian besar super-helix. DNA plasmid yang diekstraksi dapat digunakan untuk pencernaan, PCR, pengurutan, ligasi,n dan transformasi.

Pemasok

Shanghai Lingjun Bioteknologi Co., Ltd.didirikan pada 2016 yang merupakan produsen profesional bahan biomagnetik dan reagen ekstraksi asam nukleat.

Kami memiliki pengalaman yang kaya dalam ekstraksi dan pemurnian asam nukleat, pemurnian protein, pemisahan sel, chemiluminescence dan bidang teknis lainnya.

Produk kami banyak digunakan di berbagai bidang, misalnya tes kesehatan, pengujian genetik, penelitian universitas, pemuliaan genetik, dan sebagainya. Kami tidak hanya menyediakan produk tetapi juga dapat melakukan OEM, ODM, dan kebutuhan lainnya. Jika Anda memiliki kebutuhan terkait, jangan ragu untuk menghubungi kami dipenjualan01@lingjunbio.com.

• Kit Ekstraksi RNA Total Universal: The Key to Preventing RNA Degradation in Routine Experiments
• Ekstraksi Asam Nukleat Manik Magnetik: Pemburu Tak Terlihat Menangkap “Virus Nipah”
• Teknologi ekstraksi asam nukleat berbasis manik magnetik: Memimpin revolusi efisiensi dalam industri biofarmasi
• Evaluasi Praktis Kit Ekstraksi RNA Total Universal Berbasis Manik Magnetik Tujuan Umum
• Ekstraksi Asam Nukleat Berbasis Manik Magnetik untuk Pengobatan Presisi