Grundlæggende strategier og metoder til de-endotoksinisering under plasmid-DNA-oprensning

Anvendelse af endotoksinfri plasmider bør overvejes, når det ekstraherede plasmid-DNA anvendes til transfektion af primær, affjedring, eller følsomme celler, undersøgelser af gendæmpning, celleinjektion mikromanipulation, genterapi eller DNA-vacciner,og andre ekstremt krævende eksperimenter.

Plasmid-de-endotoksinisering refererer til trinnet med fjernelse af endotoksin (lipopolysaccharid, LPS) under oprensningen af ​​plasmid-DNA. Endotoksin er et lipopolysaccharid- og proteinkompleks i cellevæggen af ​​gramnegative bakterier, der frigives, når bakterierne lyserer. Tilstedeværelsen af ​​endotoksin påvirker i høj grad transfektionseffektiviteten og kan aktivere uspecifikke reaktioner af immunceller, resulterer i falske positiver i eksperimentet. Derfor, for at sikre en høj transfektionshastighed og høj overlevelse af transficerede celler, endotoxin skal fjernes fra plasmidfremstillingsprocessen.

Vigtigheden af ​​endotoksin fjernelse er:

1.Påvirker transfektionseffektiviteten: endotoksin vil reducere transfektionseffektiviteten af ​​primære celler og følsomme dyrkede celler, og interfererer med in vitro-transfektion af immunceller.

2.Aktiver immunrespons: endotoksin kan også føre til feber, hypotension, åndedrætsbesvær, intravaskulær koagulation, og endotoksisk shock syndrom, endotoksin kan stimulere syntesen af ​​inflammatoriske faktorer IL-1, IL-6, IL-10, og TNF-a ved at aktivere TLR4.

3,.Lægemiddellovgivningskrav: Statens Lægemiddelforvaltning stiller krav om, at indholdet af endotoksin i DNA-vaccineprodukter ikke må være højere end 0.01 EU/μg, og dosis til personlig brug bør ikke overstige 20 EU.

Der er to strategier til fjernelse af endotoksin:

1. Fjernelse på bindingsstadiet: endotoksin fjernes på plasmid-DNA-bindingsstadiet.

2. Fjernelse efter eluering: fjern endotoksin efter eluering af plasmid-DNA.

De nuværende metoder til fjernelse af endotoksin omfatter hovedsageligt:

1. Ikke-selektiv fjernelse: såsom adsorption, ultrafiltrering, og eksklusionskromatografi.

2. Selektiv nedbør: f.eks., ved hjælp af polymyxin B, histidiner, og poly-L-lysin affinitetskromatografi.

3. Hydrofob interaktionskromatografi og ionbytterkromatografi.

Vores endotoksin-frit plasmid DNA ekstraktionssæt (magnetisk perlemetode) vedtager en unik løsningsformel, der kun kræver et par enkle vaske for at fjerne endotoksin, proteiner, polysaccharider, og andre urenheder, og opnår derefter plasmid-DNA af høj kvalitet. Dette produkt ekstraherer og renser plasmid-DNA med lille skade på plasmider, høj ekstraktionskoncentration, og en høj andel af superhelix. Det ekstraherede plasmid-DNA kan bruges til fordøjelse, PCR, sekventering, ligering,n og transformation.

Leverandør

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd.blev etableret i 2016 som er en professionel producent af biomagnetiske materialer og nukleinsyreekstraktionsreagenser.

Vi har stor erfaring med udvinding og oprensning af nukleinsyre, proteinoprensning, celleadskillelse, kemiluminescens og andre tekniske områder.

Vores produkter er meget udbredt inden for mange områder, såsom medicinsk test, genetisk testning, universitetsforskning, genetisk avl, og så videre. Vi leverer ikke kun produkter, men kan også påtage os OEM, ODM, og andre behov.Hvis du har et relateret behov, er du velkommen til at kontakte os påsales01@lingjunbio.com.

• DNA Fragment selektionseffektivitet: Optimering af silica magnetiske perle input og forhold
• Teknisk optimering af total RNA-ekstraktion fra komplekse dyrevæv: Evaluering af en mini-ekstraktionsprotokol baseret på den magnetiske perlemetode
• Manuel magnetisk perleudtrækning om vinteren: Vigtige forholdsregler for lav-temp håndtering
• Magnetiske perler: Hvordan man opnår “Et-trins aspiration” i RNA-ekstraktion?
• Nipah-virusforebyggelse og tidlig detektion ved hjælp af magnetisk perleteknologi – nye strategier til udbrudskontrol