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プラスミド DNA 精製中の脱エンドトキシン化のための基本的な戦略と方法
エンドトキシンフリーのプラスミドの使用 抽出されたプラスミド DNA を一次遺伝子のトランスフェクションに使用する場合は考慮する必要があります。, サスペンション, または敏感な細胞, 遺伝子サイレンシング研究, 細胞注入マイクロマニピュレーション, 遺伝子治療または DNA ワクチン,その他の非常に要求の厳しい実験.
プラスミドの脱エンドトキシン化とは、エンドトキシンを除去するステップを指します。 (リポ多糖類, LPS) プラスミド DNA の精製中. エンドトキシンは、グラム陰性菌の細胞壁にあるリポ多糖とタンパク質の複合体で、細菌が溶解するときに放出されます。. エンドトキシンの存在はトランスフェクション効率に大きく影響し、免疫細胞の非特異的反応を活性化する可能性があります。, 実験で偽陽性が発生する. したがって, 高いトランスフェクション率とトランスフェクトされた細胞の高い生存率を確保するため, エンドトキシンはプラスミド調製プロセスから除去する必要がある.
エンドトキシン除去の重要性は、:
1.トランスフェクション効率に影響を与える: エンドトキシンは初代細胞および感受性の高い培養細胞のトランスフェクション効率を低下させます。, 免疫細胞のインビトロトランスフェクションを妨害します.
2.免疫反応を活性化する: エンドトキシンは発熱の原因にもなる, 低血圧, 呼吸困難, 血管内凝固, およびエンドトキシンショック症候群, エンドトキシンは炎症因子IL-1の合成を刺激する可能性があります, IL-6, IL-10, TLR4の活性化によるTNF-α.
3,.医薬品規制要件: 国家薬品監督管理局は、DNA ワクチン製品に含まれるエンドトキシンの含有量は以下を規定しています。 0.01 EU/μg, 個人使用のための用量は超えてはなりません 20 欧州連合.
エンドトキシン除去には 2 つの戦略があります:
1. 結合段階での除去: エンドトキシンはプラスミドDNA結合段階で除去されます.
2. 溶出後の除去: プラスミド DNA 溶出後にエンドトキシンを除去.
現在のエンドトキシン除去方法には主に以下のものがあります。:
1. 非選択的除去: 吸着などの, 限外濾過, および排除クロマトグラフィー.
2. 選択的沈殿: 例えば, ポリミキシンBを使用, ヒスチジン, およびポリ-L-リジンアフィニティークロマトグラフィー.
3. 疎水性相互作用クロマトグラフィーおよびイオン交換クロマトグラフィー.
私たちの エンドトキシンフリーのプラスミド DNA 抽出キット (磁気ビーズ法) 独自の溶液処方を採用しており、数回の簡単な洗浄だけでエンドトキシンを除去します。, タンパク質, 多糖類, およびその他の不純物, 高品質のプラスミド DNA を取得します. プラスミドへのダメージが少なく、プラスミドDNAを抽出・精製します。, 高い抽出濃度, スーパーヘリックスの割合が高い. 抽出されたプラスミド DNA は消化に使用できます。, PCR, 順序付け, 結紮,nと変換.
サプライヤー
上海霊軍生物技術有限公司, 株式会社に設立されました 2016 生体磁性材料と核酸抽出試薬の専門メーカーです.
核酸抽出・精製の経験が豊富です。, タンパク質の精製, 細胞分離, 化学発光およびその他の技術分野.
当社の製品はさまざまな分野で広く使用されています, 医療検査など, 遺伝子検査, 大学の研究, 遺伝子育種, 等々. 製品のご提供だけでなくOEMも承ります, ODM, 関連するニーズがある場合, お気軽にお問い合わせください。sales01@lingjunbio.com.
