Basis Strategien a Methoden fir De-Endotoxiniséierung wärend der Plasmid DNA Reinigung

D'Benotzung vun Endotoxin-gratis Plasmiden sollt berücksichtegt ginn wann déi extrahéiert Plasmid DNA fir Transfektioun vu primäre benotzt gëtt, Suspensioun, oder sensibel Zellen, Gene Silencing Studien, Zellinjektioun Mikromanipulatioun, Gentherapie oder DNA Impfungen,an aner extrem exigent Experimenter.

Plasmid De-Endotoxiniséierung bezitt sech op de Schrëtt fir Endotoxin ze läschen (lipopolysaccharide, LPS) während der Reinigung vu Plasmid DNA. Endotoxin ass e Lipopolysaccharid- a Proteinkomplex an der Zellmauer vu Gram-negativen Bakterien déi fräigelooss gëtt wann d'Bakterien lyséieren. D'Präsenz vun Endotoxin beaflosst staark d'Transfektiounseffizienz a kann net spezifesch Reaktiounen vun Immunzellen aktivéieren, doraus zu falschen Positiven am Experiment. Dofir, fir eng héich transfection Taux an héich Iwwerliewe vun transfected Zellen ze garantéieren, Endotoxin muss aus dem Prozess vun der Plasmidpräparatioun geläscht ginn.

D'Wichtegkeet vun Endotoxin Entfernung ass:

1.Afloss op d'Transfektiounseffizienz: Endotoxin reduzéiert d'Transfektiounseffizienz vun primären Zellen a sensibel kultivéierten Zellen, a stéieren mat der in vitro Transfektioun vun Immunzellen.

2.Aktivéiert d'Immunreaktioun: Endotoxin kann och zu Féiwer féieren, Hypotonie, Otemschwieregkeeten, intravaskulär Koagulatioun, an endotoxesch Schock Syndrom, Endotoxin kann d'Synthese vun entzündleche Faktoren IL-1 stimuléieren, IL-6, IL-10, an TNF-α andeems TLR4 aktivéiert gëtt.

3,.Drogen reglementaresche Ufuerderunge: D'Staat Drogenverwaltung stellt fest, datt den Inhalt vun Endotoxin an DNA Impfstoffprodukter net méi héich wéi 0.01 EU/μg, an d'Dosis fir perséinlech Benotzung sollt net iwwerschreiden 20 EU.

Et ginn zwou Strategien fir Endotoxin Entfernung:

1. Ewechhuele bei der verbindlecher Etapp: Endotoxin gëtt an der Plasmid DNA Bindungsstadium geläscht.

2. Entfernung no der Eluéierung: Endotoxin no der plasmid-DNA-Elutioun entfernen.

Déi aktuell Endotoxin Entfernungsmethoden enthalen haaptsächlech:

1. Net-selektiv Ewechhuele: wéi Adsorptioun, ultrafiltration, an Ausgrenzungschromatographie.

2. Selektiv Nidderschlag: z.B., benotzt Polymyxin B, histidines, a Poly-L-Lysin Affinitéitschromatographie.

3. Hydrophobe Interaktiounschromatographie an Ionenaustauschchromatographie.

Eis endotoxin-gratis Plasmid DNA Extraktioun Kit (magnetesch Perle Method) adoptéiert eng eenzegaarteg Léisungsformel déi nëmmen e puer einfache Wäschen erfuerdert fir Endotoxin ze läschen, Proteinen, polysaccharides, an aner Gëftstoffer, a kritt dann héichwäerteg Plasmid DNA. Dëst Produkt extrahéiert a purifizéiert Plasmid DNA mat wéineg Schued un Plasmiden, héich Extraktioun Konzentratioun, an en héijen Undeel vun Super-Helikus. Déi extrahéiert Plasmid DNA ka fir Verdauung benotzt ginn, PCR, sequencing, ligation,n an Transformatioun.

Fournisseur

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd., Ltd.gouf etabléiert an 2016 deen e professionnelle Hiersteller vu biomagnetesche Materialien an Nukleinsäure Extraktiounsreagenz ass.

Mir hu räich Erfahrung an Nukleinsäure Extraktioun an Offäll, Protein Reinigung, Zell Trennung, Chemilumineszenz an aner technesch Felder.

Eis Produkter gi wäit a ville Beräicher benotzt, wéi medizinesch Tester, genetesch Tester, Universitéit Fuerschung, genetesch Zucht, an esou weider. Mir bidden net nëmmen Produkter, awer och kënnen OEM ënnerhuelen, ODM, an aner Besoinen.Wann Dir e verbonne Besoin hutt, weg fillen gratis eis ze kontaktéieren umsales01@lingjunbio.com.

• Universal Total RNA Extraktioun Kit: De Schlëssel fir d'RNA Degradatioun a Routine Experimenter ze vermeiden
• Magnéitesch Bead Nukleinsäure Extraktioun: The Invisible Hunter Capturing the “Nipah Virus”
• Magnéitesch Perle-baséiert Nukleinsäure Extraktioun Technologie: Féierung vun der Effizienzrevolutioun an der biopharmazeutescher Industrie
• Praktesch Evaluatioun vun engem allgemeng Zweck Magnetic Bead-baséiert Universal Total RNA Extraktioun Kit
• Magnéitesch Bead-baséiert Nukleinsäure Extraktioun fir Präzisiounsmedizin