Wéi z'ënnerscheeden Plasmid DNA aus Chromosomal DNA wärend der Extraktioun?

Plasmid DNA Extraktioun ass eng fundamental a wichteg Technik an der molekulare Biologie Fuerschung. De Schlëssel fir Plasmid DNA vu chromosomal DNA z'ënnerscheeden läit an hiren Ënnerscheeder a physikaleschen a chemeschen Eegeschaften. Hei sinn e puer gemeinsam Methoden fir Differenzéierung.

1. Alkalesch Lysis

Déi alkalesch Lysis ass eng vun de meescht benotzte Methoden fir Plasmid DNA Extraktioun. Säi Prinzip baséiert op den Ënnerscheeder an der topologescher Struktur tëscht chromosomal DNA a Plasmid DNA. D'bakteriell Zellmauer an d'Zellmembran sinn an engem staarken alkalesche Ëmfeld gestéiert, chromosomal DNA a Plasmid DNA fräiginn. Linear DNA duebel Helix Struktur gëtt zerstéiert an denaturéiert, wärend kovalent zougemaach kreesfërmeg Plasmid DNA, obwuel denaturéiert ënner staark alkaline(pH 12.6) Konditiounen, huet nach ëmmer zwee komplementär Strécke déi matenee verbonne sinn an enk verbonne sinn. Wann pH 4,8 acetate Kalium(oder Natriumacetat) Héich-Salzbufferléisung gëtt bäigefüügt fir d'Neutralitéit ze restauréieren, kovalent zougemaach kreesfërmeg Plasmid DNA renatures séier, wärend linear chromosomal DNA lues renaturéiert. Bakteriell Proteinen, gebrach Zellmaueren, an denaturéiert chromosomal DNA wäerte sech a grousse Komplexe verwéckelen, déi mat Natriumdodecylsulfat bedeckt sinn(SDS). Plasmid DNA kann aus dem Supernatant no der Zentrifugéierung erëmfonnt ginn fir den Denaturant ze läschen.

2. Kachen Lysis

Kachen Lysis ass besonnesch gëeegent fir kleng Plasmide vu manner wéi 15 kb vun. Dës Method beinhalt d'Suspension vun Bakterien an engem Puffer mat Triton X-100 a Lysozym, deen d'Zellmauer verdaue kann, dann op 100°C erhëtzt fir Lysis ze verursaachen. Heizung zerstéiert net nëmmen d'Zellmauer, awer hëlleft och d'DNA Strang Base Pairing an d'Proteine ​​​​an chromosomal DNA ze denaturéieren. Zougemaach kreesfërmeg Plasmid DNA trennt sech net vuneneen, well hir Phosphodiester Réckgraten an enger topologescher Struktur vernetzt sinn. Wann d'Temperatur fällt, d'Basis vun der zougemaach kreesfërmeg DNA zréck an hir Positiounen, eng supercoiled Molekül bilden. Plasmid-DNA kann aus dem Supernatant no Zentrifugéierung erholl ginn fir denaturéiert chromosomal Nukleoproteine ​​ze läschen.

3. Mini-Prep One-Step Extraktioun

D'Mini-Prep One-Step Extraktioun baséiert op der Tatsaach datt bakteriell chromosomal DNA vill méi grouss ass wéi Plasmid DNA. Bakteriell chromosomal DNA gëtt a verschiddene Gréisste vu linear Fragmenter geschäerft, déi un Zellschutt hänken an ënner mechanescher Kraaft denaturéiert ginn. Och wann Plasmid DNA och denaturéiert ass, et renatures séier no der mechanesch Kraaft verschwënnt, bleift löslech an der Léisung, wärend bakteriell chromosomal DNA lues renaturéiert, eng onlöslech retikulär Struktur bilden. Plasmid DNA kann duerch Héich-Vitesse Zentrifugéierung getrennt ginn.

4. Uwendung vun Purification Columns

Purification Saile besteet normalerweis aus enger Schicht Silikonmembran,  déi DNA selektiv adsorbéiere kann, an dëse Prozess ass reversibel. D'Silanolgruppen op der Uewerfläch vun der Silikonmembran ginn negativ gelueden no der Dissoziatioun an der Léisung, eng elektresch Bréck mat positiv gelueden Salzionen an negativ gelueden DNA bilden, doduerch DNA adsorbéiert. D'Silikon Membran adsorbéiert selektiv DNA ënner héich-Salz niddereg-pH Konditiounen, an der Silikon Membran verëffentlecht DNA ënner niddereg-Salz héich-pH Konditiounen, .

5. Nukleinsäure Extraktioun duerch magnetesch Perlen Method

DNA Moleküle binden un déi positiv gelueden Moleküle (wéi positiv gelueden chemesch Gruppen) op der Uewerfläch vun magnetesch Perlen duerch hir negativ gelueden Phosphat-Réckgraten iwwer elektrostatesch Bindung bei spezifesche pH, Salz Konzentratioun, an Temperatur. Dës Bindung ass spezifesch, garantéiert datt nëmmen d'Zil-DNA-Moleküle un d'magnetesch Perlen binden. An e puer Fäll, wéi wann PEG (polyethylene glycol) a Salzione ginn dobäigesat, d'Konformatioun vun DNA-Moleküle mécht drastesch Ännerungen. De linear Zoustand ass an e gekrauselten Kugelzoustand kompriméiert, wat mécht DNA méi einfach mat magnetesche Perlen ze binden. Gläichzäiteg, DNA Molekülle vu verschiddene Längt ënnerleien selektiv Nidderschlag ënner der Handlung vu PEG a Salzionen, esou d'Trennung vun DNA Fragmenter vu verschiddene Gréissten erreechen.

Dual Magnéitesch Bead Method: Dëst ass eng Technologie entwéckelt baséiert op dem Prinzip vun der Plasmidextraktioun, benotzt zwou Zorte vu magnetesche Perlen mat verschiddene Funktiounen. Magnéitesch Perle I gëtt benotzt fir bakteriell Debris no Lysis ze läschen, wärend magnetesch Perle II fir déi spezifesch Trennung vun Nukleinsäuremoleküle benotzt gëtt. Ënnert der Aktioun vum Lysisbuffer, SDS kombinéiert mat bakteriellen Debris, Proteinen, an aner Gëftstoffer fir en onlösleche Kalium ze bilden (oder Natrium) Salz Nidderschlagskomplex, déi eng positiv Ladung huet wéinst der Kombinatioun vun enger grousser Quantitéit K⁺ (oder Na⁺). Magnéitesch Perle I, mat enger grousser Zuel vun negativ gelueden polycarboxylate magnetesche Perlen, kann speziell Gëftstoffer duerch elektrostatesch Adsorptioun a Koordinatioun mam positiv geluedenen K adsorbéieren⁺ (oder Na⁺) komplex. Magnéitesch Perle II huet eng Uewerfläch modifizéiert mat vill Silanolgruppen, déi spezifesch Nukleinsäuren an engem Alkoholléisungsmëttelëmfeld adsorbéiere kënnen, baséiert op dësem Prinzip, déi spezifesch Trennung vu Plasmid DNA kann erreecht ginn.

Plasmid DNA kann effektiv vun den Hostzellen getrennt ginn a seng Rengheet an Integritéit kënnen duerch déi uewe genannte Methoden gesuergt ginn, e zolitte Grondlag fir spéider molekulare Biologesch Experimenter ze leeën.

Fournisseur

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd., Ltd.gouf etabléiert an 2016 deen e professionnelle Hiersteller vu biomagnetesche Materialien an Nukleinsäure Extraktiounsreagenz ass.

Mir hu räich Erfahrung an Nukleinsäure Extraktioun an Offäll, Protein Reinigung, Zell Trennung, Chemilumineszenz an aner technesch Felder.

Eis Produkter gi wäit a ville Beräicher benotzt, wéi medizinesch Tester, genetesch Tester, Universitéit Fuerschung, genetesch Zucht, an esou weider. Mir bidden net nëmmen Produkter, awer och kënnen OEM ënnerhuelen, ODM, an aner Besoinen.Wann Dir e verbonne Besoin hutt, weg fillen gratis eis ze kontaktéieren umsales01@lingjunbio.com.