추출 중 염색체 DNA와 플라스미드 DNA를 구별하는 방법?

플라스미드 DNA 추출 분자생물학 연구에 있어서 기본적이고 중요한 기술입니다.. 플라스미드 DNA와 염색체 DNA를 구별하는 열쇠는 물리적, 화학적 특성의 차이에 있습니다.. 다음은 차별화를 위한 몇 가지 일반적인 방법입니다..

1. 알칼리성 용해

알칼리 용해는 플라스미드 DNA 추출에 가장 널리 사용되는 방법 중 하나입니다.. 그 원리는 염색체 DNA와 플라스미드 DNA 사이의 위상학적 구조의 차이에 기초합니다.. 세균의 세포벽과 세포막은 강알칼리성 환경에서 파괴됩니다., 염색체 DNA와 플라스미드 DNA 방출. 선형 DNA 이중 나선 구조가 파괴되고 변성됨, 공유결합으로 닫힌 원형 플라스미드 DNA, 강알칼리성에서는 변성되지만(pH 12.6) 정황, 여전히 서로 얽혀 있고 밀접하게 연관되어 있는 두 개의 상보적인 가닥을 갖고 있습니다.. pH 4.8 아세트산칼륨일 때(또는 아세트산나트륨) 중성을 회복하기 위해 고염완충액을 첨가, 공유결합으로 닫힌 원형 플라스미드 DNA는 빠르게 재생됩니다., 선형 염색체 DNA는 천천히 재생되는 반면. 세균성 단백질, 파열된 세포벽, 변성된 염색체 DNA는 큰 복합체로 얽히게 됩니다., 나트륨 도데실 황산염으로 덮여 있습니다.(SDS). 변성제를 제거하기 위해 원심분리 후 상층액에서 플라스미드 DNA를 회수할 수 있습니다..

2. 끓는 용해

끓는 용해는 특히 작은 플라스미드에 적합합니다. 15 kb. 이 방법은 Triton X-100과 세포벽을 소화할 수 있는 라이소자임을 함유한 완충액에 박테리아를 현탁시키는 것과 관련됩니다., 그런 다음 100°C로 가열하여 용해를 유발합니다.. 가열은 세포벽을 파괴할 뿐만 아니라 DNA 가닥 염기쌍을 풀고 단백질과 염색체 DNA를 변성시키는 데 도움이 됩니다.. 폐쇄형 원형 플라스미드 DNA는 포스포디에스테르 골격이 위상학적 구조로 얽혀 있기 때문에 서로 분리되지 않습니다.. 기온이 떨어지면, 닫힌 원형 DNA의 염기가 원래 위치로 돌아옴, 슈퍼코일 분자 형성. 변성된 염색체 핵단백질을 제거하기 위해 원심분리 후 상층액에서 플라스미드 DNA를 회수할 수 있습니다..

3. Mini-Prep 원스텝 추출

Mini-prep 원스텝 추출은 세균 염색체 DNA가 플라스미드 DNA보다 훨씬 크다는 사실에 기초합니다.. 세균의 염색체 DNA는 다양한 크기의 선형 단편으로 절단되어 세포 잔해에 부착되고 기계적 힘에 의해 변성됩니다.. 플라스미드 DNA도 변성되었지만, 기계적 힘이 사라진 후 빠르게 재생됩니다., 용액에 남아있는 용해성, 반면에 세균 염색체 DNA는 천천히 재생됩니다., 불용성 망상 구조를 형성. Plasmid DNA는 고속 원심분리로 분리 가능.

4. 정제 컬럼의 적용

정제 컬럼은 일반적으로 실리콘 멤브레인 층으로 구성됩니다.,  DNA를 선택적으로 흡착할 수 있는, 이 과정은 되돌릴 수 있습니다.. 실리콘 막 표면의 실라놀 그룹은 용액에서 해리된 후 음전하를 띠게 됩니다., 양전하를 띤 염 이온과 음전하를 띤 DNA로 전기 다리를 형성, DNA를 흡착함으로써. 실리콘 멤브레인은 고염, 저pH 조건에서 DNA를 선택적으로 흡착합니다., 실리콘 막은 저염, 고pH 조건에서 DNA를 방출합니다., .

5. 자기비드법에 의한 핵산 추출

DNA 분자는 양전하를 띤 분자에 결합합니다 (양전하를 띤 화학 그룹과 같은) 표면에 자기 구슬 특정 pH에서 정전기적 결합을 통해 음으로 하전된 인산염 백본을 통해, 소금 농도, 그리고 온도. 이 바인딩은 구체적입니다., 표적 DNA 분자만 자기 비드에 결합하도록 보장. 어떤 경우에는, 예를 들어 언제 못 (폴리에틸렌 글리콜) 그리고 염이온을 첨가하면, DNA 분자의 구조는 급격한 변화를 겪는다. 선형 상태가 구부러진 구형 상태로 압축됩니다., DNA가 자기 비드와 결합하기 쉽게 만드는 것. 동시에, 길이가 다른 DNA 분자는 PEG와 염 이온의 작용으로 선택적 침전을 겪습니다., 따라서 다양한 크기의 DNA 단편을 분리할 수 있습니다..

듀얼 마그네틱 비드 방식: 플라스미드 추출 원리를 기반으로 개발된 기술입니다., 서로 다른 기능을 지닌 두 가지 유형의 자기 비드를 사용하여. 마그네틱 비드 I은 용해 후 박테리아 잔해를 제거하는 데 사용됩니다., 자기 비드 II는 핵산 분자의 특정 분리에 사용됩니다.. 용해 완충액의 작용하에, SDS는 박테리아 잔해와 결합됩니다., 단백질, 불용성 칼륨을 형성하는 기타 불순물 (또는 나트륨) 소금 침전 복합체, 다량의 K가 결합하여 양전하를 띠는 것⁺ (또는 나⁺). 자석구슬 I, 다수의 음전하를 띤 폴리카르복실레이트 자기 비드 포함, 양으로 하전된 K와의 정전기 흡착 및 배위를 통해 불순물을 특이적으로 흡착할 수 있습니다.⁺ (또는 나⁺) 복잡한. 마그네틱 비드 II는 풍부한 실라놀 그룹으로 표면이 개질된 표면을 가지고 있습니다., 알코올 용매 환경에서 핵산을 특이적으로 흡착할 수 있는 물질, 이 원칙을 바탕으로, 플라스미드 DNA의 특정 분리가 가능합니다..

위의 방법을 통해 플라스미드 DNA를 숙주세포로부터 효과적으로 분리할 수 있으며, 그 순도와 완전성을 확보할 수 있습니다., 후속 분자생물학 실험을 위한 탄탄한 기반 마련.

공급자

상하이 링쥔 생명공학 유한회사, 주식회사에 설립되었습니다 2016 생체자성재료 및 핵산추출시약 전문제조업체입니다..

핵산 추출 및 정제 분야에서 풍부한 경험을 보유하고 있습니다., 단백질 정제, 세포 분리, 화학발광 및 기타 기술 분야.

우리의 제품은 많은 분야에서 널리 사용됩니다., 의료 테스트와 같은, 유전자 검사, 대학 연구, 유전자 육종, 등. 우리는 제품을 제공할 뿐만 아니라 OEM도 수행할 수 있습니다., ODM, 및 기타 요구 사항. 관련 요구 사항이 있는 경우, 언제든지 저희에게 연락해주세요.sales01@lingjunbio.com.