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플라스미드 DNA 정제 중 내독소 제거를 위한 기본 전략 및 방법
내독소가 없는 플라스미드의 사용 추출된 플라스미드 DNA를 1차 형질감염에 사용할 때 고려해야 할 사항, 보류, 또는 민감한 세포, 유전자 침묵 연구, 세포 주입 미세 조작, 유전자 치료 또는 DNA 백신,기타 매우 까다로운 실험.
플라스미드 탈내독소화는 내독소를 제거하는 단계를 의미합니다. (지질다당류, LPS) 플라스미드 DNA를 정제하는 동안. 내독소는 박테리아가 용해될 때 방출되는 그람 음성 박테리아의 세포벽에 있는 지질다당류와 단백질 복합체입니다.. 내독소의 존재는 형질감염 효율에 큰 영향을 미치며 면역 세포의 비특이적 반응을 활성화할 수 있습니다., 실험에서 거짓 양성 결과가 발생함. 그러므로, 높은 형질감염률과 형질감염된 세포의 높은 생존율을 보장하기 위해, 플라스미드 제조 과정에서 엔도톡신을 제거해야 합니다..
엔도톡신 제거의 중요성은 다음과 같습니다.:
1.형질감염 효율에 영향을 미침: 내독소는 일차 세포와 민감한 배양 세포의 형질감염 효율을 감소시킵니다., 면역 세포의 시험관 내 형질감염을 방해합니다..
2.면역반응 활성화: 내독소는 발열을 유발할 수도 있습니다., 저혈압, 호흡곤란, 혈관 내 응고, 및 내독소 쇼크 증후군, 내독소는 염증 인자 IL-1의 합성을 자극할 수 있습니다., IL-6, IL-10, TLR4를 활성화하여 TNF-α.
3,.약물 규제 요건: 국가약품관리국(State Drug Administration)은 DNA 백신 제품의 내독소 함량이 다음 수준을 초과해서는 안 된다고 규정합니다. 0.01 EU/μg, 개인 용도의 복용량은 다음을 초과해서는 안됩니다. 20 EU.
내독소 제거에는 두 가지 전략이 있습니다.:
1. 바인딩 단계에서 제거: 내독소는 플라스미드 DNA 결합 단계에서 제거됩니다..
2. 용출 후 제거: 플라스미드 DNA 용출 후 엔도톡신 제거.
현재 내독소 제거 방법은 주로 다음과 같습니다.:
1. 비선택적 제거: 흡착과 같은, 한외여과, 및 배제 크로마토그래피.
2. 선택적 강수량: 예를 들어, 폴리믹신 B를 사용하여, 히스티딘, 및 폴리-L-라이신 친화성 크로마토그래피.
3. 소수성 상호작용 크로마토그래피 및 이온교환 크로마토그래피.
우리의 내독소가 없는 플라스미드 DNA 추출 키트 (자기비드 방식) 몇 번의 간단한 세척만으로 엔도톡신을 제거할 수 있는 독특한 솔루션 포뮬러를 채택했습니다., 단백질, 다당류, 그리고 다른 불순물, 고품질의 플라스미드 DNA를 얻습니다.. 플라스미드에 손상이 거의 없는 플라스미드 DNA를 추출, 정제하는 제품입니다., 높은 추출 농도, 그리고 슈퍼나선의 비율이 높다.. 추출된 플라스미드 DNA를 소화에 사용할 수 있습니다., PCR, 시퀀싱, 결찰,n과 변환.
공급자
상하이 링쥔 생명공학 유한회사, 주식회사에 설립되었습니다 2016 생체자성재료 및 핵산추출시약 전문제조업체입니다..
핵산 추출 및 정제 분야에서 풍부한 경험을 보유하고 있습니다., 단백질 정제, 세포 분리, 화학발광 및 기타 기술 분야.
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