Grundlegende Strategien und Methoden zur De-Endotoxinisierung während der Plasmid-DNA-Reinigung

The use of endotoxin-free plasmids should be considered when the extracted plasmid DNA is used for transfection of primary, Suspension, oder empfindliche Zellen, Studien zur Gen-Stummschaltung, Zellinjektions-Mikromanipulation, gene therapy or DNA vaccines,and other extremely demanding experiments.

Plasmid de-endotoxinization refers to the step of removing endotoxin (lipopolysaccharide, LPS) during the purification of plasmid DNA. Endotoxin is a lipopolysaccharide and protein complex in the cell wall of Gram-negative bacteria that is released when the bacteria lyse. The presence of endotoxin greatly affects the transfection efficiency and may activate non-specific reactions of immune cells, resulting in false positives in the experiment. daher, in order to ensure a high transfection rate and high survival of transfected cells, endotoxin must be removed from the process of plasmid preparation.

The importance of endotoxin removal is:

1.Affect the transfection efficiency: endotoxin will reduce the transfection efficiency of primary cells and sensitive cultured cells, and interfere with the in vitro transfection of immune cells.

2.Activate immune response: endotoxin can also lead to fever, hypotension, respiratory distress, intravascular coagulation, and endotoxic shock syndrome, endotoxin can stimulate the synthesis of inflammatory factors IL-1, IL-6, IL-10, and TNF-α by activating TLR4.

3,.Drug regulatory requirements: The State Drug Administration stipulates that the content of endotoxin in DNA vaccine products should not be higher than 0.01 EU/μg, and the dose for personal use should not exceed 20 EU.

There are two strategies for endotoxin removal:

1. Removal at the binding stage: endotoxin is removed at the plasmid DNA binding stage.

2. Removal after elution: remove endotoxin after plasmid DNA elution.

The current endotoxin removal methods mainly include:

1. Non-selective removal: such as adsorption, ultrafiltration, and exclusion chromatography.

2. Selective precipitation: z.B., using polymyxin B, histidines, and poly-L-lysine affinity chromatography.

3. Hydrophobic interaction chromatography and ion exchange chromatography.

Unser endotoxin-free plasmid DNA extraction kit (Magnetperlenmethode) adopts a unique solution formula that requires only a few simple washes to remove endotoxin, Proteine, Polysaccharide, und andere Verunreinigungen, and then obtains high-quality plasmid DNA. This product extracts and purifies plasmid DNA with little damage to plasmids, high extraction concentration, and a high proportion of super-helix. The extracted plasmid DNA can be used for digestion, PCR, Sequenzierung, Ligation,n and transformation.

Anbieter

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