Conas DNA Plasmid a idirdhealú ó DNA crómasómach le linn eastóscadh?

Eastóscadh DNA plasma is teicníocht bhunúsach thábhachtach i dtaighde bitheolaíocht mhóilíneach. Is iad na difríochtaí idir airíonna fisiceacha agus ceimiceacha an eochair chun DNA plasmid a idirdhealú ó DNA crómasómach. Seo a leanas roinnt modhanna coitianta le haghaidh difreála.

1. Lysis alcaileach

Tá an lysis alcaileach ar cheann de na modhanna is mó a úsáidtear le haghaidh eastóscadh DNA plasmid. Tá a phrionsabal bunaithe ar na difríochtaí i struchtúr topological idir DNA crómasómach agus DNA plasmid. Cuirtear isteach ar bhalla cealla baictéarach agus membrane cille i dtimpeallacht láidir alcaileach, DNA crómasómach agus DNA plasmid a scaoileadh. Déantar struchtúr héilics dúbailte DNA líneach a scriosadh agus a dhínádúrú, agus DNA plasmid ciorclach dúnta go comhfhiúsach, cé go dínádúraithe faoi alcaileach láidir(pH 12.6) coinníollacha, tá dhá shnáithe chomhlántacha ann fós atá fite fuaite lena chéile agus a bhfuil dlúthbhaint acu leo. Nuair a pH 4.8 potaisiam aicéatáit(nó aicéatáit sóidiam) cuirtear réiteach maolánach ard-salann leis chun neodracht a athbhunú, Athnaíonn DNA plasmid ciorclach atá dúnta go comhfhiúsach go tapa, agus athnuachan DNA crómasómach líneach go mall. Próitéiní baictéarach, ballaí cille réabtha, agus rachaidh DNA crómasómach dínádúraithe isteach i gcoimpléisc mhóra, atá clúdaithe le sulfáit dodecyl sóidiam(SDS). Is féidir DNA Plasmid a aisghabháil ón sástán tar éis lártheifneoraithe chun an dínádúraithe a bhaint.

2. Lysis fiuchphointe

Tá lysis fiuchphointe oiriúnach go háirithe do plasmids beaga níos lú ná 15 kb. Is éard atá i gceist leis an modh seo ná baictéir a fhionraí i maolán ina bhfuil Triton X-100 agus lísisím a fhéadfaidh an balla cille a dhíleá, téamh ansin go 100°C chun lysis a chur faoi deara. Ní hamháin go scriosann téamh an balla cille ach cuidíonn sé freisin le péireáil bonn snáithe DNA agus próitéiní dínádúraithe agus DNA crómasómach a réiteach. Ní scarann ​​DNA ciorclach plasmideach óna chéile toisc go bhfuil a gcnámh droma fosfaidiester fite fuaite i struchtúr toipeolaíoch. Nuair a thiteann an teocht, filleann bunanna an DNA ciorclach dúnta go dtí a suíomhanna, foirmiú móilín supercoiled. Is féidir DNA plasmid a aisghabháil ón sástán tar éis lártheifneoraithe chun núicléapróitéiní crómasómacha dínádúraithe a bhaint.

3. Sliocht Aon-Chéim Mini-Prep

Tá eastóscadh aonchéime mion-prep bunaithe ar an bhfíric go bhfuil DNA crómasómach baictéarach i bhfad níos mó ná DNA plasmid. Déantar DNA crómasómach baictéarach a lomadh i méideanna éagsúla blúirí líneacha a chloíonn le smionagar cille agus a dhínádúraítear faoi fhórsa meicniúil. Cé go bhfuil DNA plasmid dínádúraithe freisin, athnaíonn sé go tapa tar éis don fhórsa meicniúil imithe, fágtha intuaslagtha sa tuaslagán, cé go renatures DNA crómasómach baictéarach go mall, struchtúr dothuaslagtha reticular a fhoirmiú. Is féidir DNA plasmid a dheighilt le lártheifneoiriú ardluais.

4. Feidhm Colúin Íonúcháin

Go ginearálta tá colúin íonúcháin comhdhéanta de shraith de membrane silicone,  ar féidir leo DNA a adsorb go roghnach, agus tá an próiseas seo inchúlaithe. Déantar na grúpaí silanol ar dhromchla an membrane silicone a mhuirearú go diúltach tar éis díthiomsú sa réiteach, droichead leictreach a dhéanamh le hiain salainn atá luchtaithe go deimhneach agus DNA luchtaithe go diúltach, mar sin adsorbing DNA. Déanann an membrane silicone adsorbú go roghnach DNA faoi choinníollacha ard-salann íseal-pH, agus scaoileann an membrane silicone DNA faoi choinníollacha ard-phH salainn íseal, .

5. Eastóscadh aigéad núicléach trí mhodh coirníní maighnéadacha

Ceanglaíonn móilíní DNA leis na móilíní atá luchtaithe go deimhneach (cosúil le grúpaí ceimiceacha luchtaithe go dearfach) ar dhromchla na coirníní maighnéadacha trína gcnámh droma fosfáit luchtaithe go diúltach trí cheangal leictreastatach ag pH ar leith, tiúchan salainn, agus teocht. Tá an ceangal seo sonrach, ag cinntiú nach gceanglaíonn ach na sprioc-mhóilíní DNA leis na coirníní maighnéadacha. I gcásanna áirithe, mar shampla nuair PEG (glycol poileitiléin) agus cuirtear iain salainn leis, déantar athruithe móra ar chomhfhoirmiú móilíní DNA. Tá an stát líneach comhbhrúite i stát sféarúil cuachta, rud a fhágann gur fusa DNA a cheangal le coirníní maighnéadacha. Ag an am céanna, Téann móilíní DNA de fhaid éagsúla faoi fhrasaíocht roghnaíoch faoi ghníomhú PEG agus iain salainn, ar an gcaoi sin scaradh blúirí DNA de mhéideanna éagsúla a bhaint amach.

Modh Bead Maighnéadach Dual: Is teicneolaíocht é seo a forbraíodh bunaithe ar phrionsabal an eastóscadh plasmid, ag baint úsáide as dhá chineál coirníní maighnéadacha le feidhmeanna éagsúla. Úsáidtear coirnín maighnéadach I chun smionagar baictéarach a bhaint tar éis lysis, agus úsáidtear coirnín maighnéadach II chun móilíní aigéid núicléacha a scaradh go sonrach. Faoi ghníomh maolán lysis, Comhcheanglaíonn SDS le smionagar baictéarach, próitéiní, agus neamhíonachtaí eile chun potaisiam dothuaslagtha a fhoirmiú (nó sóidiam) casta deascadh salann, a bhfuil lucht deimhneach mar gheall ar an meascán de méid mór K⁺ (nó Na⁺). Coirnín maighnéadach I, le líon mór de choirníní maighnéadacha polycarboxylate luchtaithe go diúltach, is féidir leis neamhíonachtaí a asú go sonrach trí asaithe leictreastatach agus comhordú leis an K a luchtaítear go dearfach⁺ (nó Na⁺) casta. Tá dromchla modhnaithe ag bead maighnéadach II le grúpaí silanol flúirseach, ar féidir leo aigéid núicléacha a asú go sonrach i dtimpeallacht tuaslagóir alcóil, bunaithe ar an bprionsabal seo, is féidir scaradh sonrach DNA plasmid a bhaint amach.

Is féidir DNA plasmid a dheighilt go héifeachtach ó na cealla óstacha agus is féidir a íonacht agus a sláine a áirithiú leis na modhanna thuas, ag leagan bonn láidir do thurgnaimh bhitheolaíocht mhóilíneach ina dhiaidh sin.

Soláthraí

Shanghai Lingjun Biteicneolaíocht Co., Teo.bunaíodh i 2016 atá ina mhonaróir gairmiúil d'ábhair bithmhaighnéadacha agus imoibrithe eastóscadh aigéid núicléacha.

Tá taithí shaibhir againn in eastóscadh agus íonú aigéad núicléasach, íonú próitéine, scaradh cille, chemiluminescence agus réimsí teicniúla eile.

Úsáidtear ár gcuid táirgí go forleathan i go leor réimsí, mar thástáil leighis, tástáil ghéiniteach, taighde ollscoile, pórú géiniteach, agus mar sin de. Ní chuirimid ar fáil ach táirgí ach freisin is féidir tabhairt faoi OEM, ODM, agus riachtanais eile.Má tá riachtanas gaolmhar agat, bíodh leisce ort teagmháil a dhéanamh linn agdíolacháin01@lingjunbio.com.