So verbessern Sie die Ergebnisse der 260/230 Berechnung mit der Magnetkügelchen-Methode zur Extraktion von Reagenzien？

Bei der Extraktion von Nukleinsäuren mit der Magnetbead-Methode, ein Tief 260/230 Verhältnis (normalerweise < 1.8) weist auf das Vorhandensein organischer Verbindungen hin(wie Guanidinsalze, Phenol, Ethanol, EDTA) oder Restsalze in der Probe, Dies kann sich auf nachgelagerte Experimente auswirken (wie PCR, Sequenzierung).

 Hier ist ein systematischer Optimierungsplan:

1. Optimierung der Extraktionsschritte

A. Vollständige Probenlyse

Problem: Eine unvollständige Lyse führt zu einer unvollständigen Freisetzung von Verunreinigungen.

Verbesserung: Erhöhen Sie die Lysezeit (z.B., erstrecken sich auf 30 Minuten) oder Temperatur (56℃).

Fügen Sie bei komplexen Proben einen Mahlschritt oder einen zusätzlichen Proteinase-K-Aufschluss hinzu (wie Pflanzen, Kot).

B. Waschen Sie die Magnetperlen gründlich

Schlüsselschritt: Unvollständiges Waschen ist die Hauptursache 260/230 niedrig.

Verbesserung: Erhöhen Sie die Anzahl der Wäschen: 2 mal → 3 mal (insbesondere für Proben mit hohen Verunreinigungen).

Formel der Waschlösung: Achten Sie darauf, frisch zubereitet zu verwenden 80% Ethanol (Vermeiden Sie übermäßigen Wassergehalt oder Verunreinigungen).

Waschvorgang: Vortexen oder schütteln, um die magnetischen Perlen jedes Mal zu vermischen, Vermeidung der Bildung von Perlenklumpen.

Den Überstand gründlich absaugen (kann kurz zentrifugiert werden, um Restflüssigkeit zu entfernen).

C. Vollständige Trocknung der Magnetperlen

Problem: Restliches Ethanol kann deutlich reduziert werden 260/230.

Verbesserung: Öffnen Sie die Kappe und lassen Sie es trocknen 5-10 Minuten (bei Raumtemperatur oder 37°C), bis kein Ethanolgeruch mehr vorhanden ist. Vermeiden Sie übermäßiges Trocknen (ansonsten, Dadurch wird die Effizienz der Nukleinsäureelution verringert).

 D. Optimieren Sie die Elutionsbedingungen

Verwenden Sie vorgewärmten Elutionspuffer (wie 65°C TE-Puffer oder steriles Wasser), und lass es stehen 5 Minuten vor der Abholung.

Vermeiden Sie die Verwendung eines zu kleinen Elutionsvolumens (empfehlen ≥ 50 μL zur Reduzierung der Salzkonzentration).

Ⅱ.Qualitätskontrolle von Reagenzien und Verbrauchsmaterialien

A. Durch frische Reagenzien ersetzen:

Überprüfen Sie, ob Ethanol und Waschlösung verunreinigt sind (bei längerer Lagerung ohne Versiegelung).

Vermeiden Sie die Verwendung abgelaufener Magnetkügelchen-Reagenzien (Durch den Abbau der Magnetkügelchen können Verunreinigungen adsorbiert werden).

B. Auswahl der Verbrauchsmaterialien:

Verwenden Sie Zentrifugenröhrchen und Pipetten ohne Nuklease oder Pyrogen (um Störungen durch Kunststoffzusätze zu vermeiden).

Ⅲ.Probenvorverarbeitung

1. Komplexe Proben (wie Boden und Pflanzen):

Erhöhen Sie die CTAB- oder SDS-Vorbehandlung, um Polysaccharide und Polyphenole zu entfernen.

• Für Blutproben:

 Entfernen Sie zunächst Hämoglobin mit einer Erythrozyten-Lyse-Lösung.

• Mit Inhibitoren angereicherte Proben (wie Kot und Körperflüssigkeiten):

Verdünnen Sie die Proben oder verwenden Sie spezielle Lysepuffer (wie solche, die Carrier-RNA enthalten).

Ⅳ.Überprüfung und Abhilfemaßnahmen

A. Elektrophorese oder Qubit-Verifizierung:

Auf Verschlechterung prüfen (Tailing-Phänomen) mittels Agarosegelelektrophorese.

Vergleichen Sie die Ergebnisse mit denen von Nanodrop mithilfe eines Fluoreszenzmessgeräts (Qubit) um Störungen durch die Absorption von Verunreinigungen zu beseitigen.

B. Reinigungssanierung:

Wenn das Verhältnis von 260/230 bleibt niedrig, Reinigen Sie die Nukleinsäure erneut mit einer Silica-Säule oder durch Ethanolfällung.

V. Kontrollversuch

Für jede Extraktion, eine bekannte Standardprobe (wie λDNA oder kultivierte Zellen) dient zur Bestätigung der Stabilität der Reagenzien.

Wenn die 260/230 Das Verhältnis der Kontrollprobe ist normal, Das Problem kann in der zu testenden Probe selbst liegen.

Checkliste zur Fehlerbehebung bei häufigen Problemen

Phänomen	Mögliche Ursache	Lösung
260/230 ist niedrig, aber 260/280 ist normal	Protein- oder Phenolverunreinigung	Verstärken Sie die Wasch- und Trocknungsschritte
Beide 260/230 Und 260/280 sind gering	Protein- oder Phenolverunreinigung	Optimieren Sie die Lyse, Ersetzen Sie die Lyselösung
Nur die 230 Der Höhepunkt ist hoch	Verunreinigung durch organische Lösungsmittel	Überprüfen Sie die Reinheit von Ethanol oder Puffer

Indem Sie diese Schritte befolgen, das Verhältnis von 260/230 deutlich gesteigert werden kann (Ziel > 1.8). Wenn das Problem weiterhin besteht, Bitte kontaktieren Sie Shanghai Lingjun Biotechnology unter 18103799069.

Anbieter

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd.wurde gegründet in 2016 Das ist ein professioneller Hersteller von biomagnetischen Materialien und Nukleinsäure-Extraktionsreagenzien.

Wir verfügen über umfangreiche Erfahrung in der Extraktion und Reinigung von Nukleinsäuren, Proteinreinigung, Zelltrennung, Chemilumineszenz, und anderen technischen Bereichen.

Unsere Produkte werden in vielen Bereichen weit verbreitet eingesetzt, wie zum Beispiel medizinische Tests, Gentests, universitäre Forschung, genetische Zucht, und so weiter. Wir liefern nicht nur Produkte, sondern können auch OEM übernehmen, ODM, und andere Bedürfnisse. Wenn Sie einen entsprechenden Bedarf haben, Nehmen Sie gerne Kontakt zu uns auf .