Die gängigen Nachweismethoden für Endotoxin

Die folgenden Methoden werden üblicherweise zum Nachweis des Endotoxingehalts in Plasmiden verwendet:

1, Farbentwicklungsmethode für Pfeilschwanzkrebsreagenzien:

Hierbei handelt es sich um eine Nachweismethode, die auf dem Pfeilschwanzkrebs-Reagenz basiert (Lyophilisiertes Amöbozytenlysat, LAL), Pfeilschwanzkrebs-Reagenz enthält den C-Faktor, B-Faktor, Koagulase-Proteine, Koagulase-Proteine, und andere Komponenten, unter den entsprechenden Bedingungen, Endotoxin aktiviert den C-Faktor, eine Reihe enzymatischer Reaktionen auslösen, und letztendlich die Koagulase-Proteine ​​aktivieren, um das Koagulase-Enzym zu bilden, Dadurch wird das Farbentwicklungsmittel zersetzt und gelbes p-Nitroanilin entsteht (pNA, λmax = 405 nm). Die pNA-Erzeugung ist proportional zur Endotoxinkonzentration, sodass die Endotoxinkonzentration in der Probe quantitativ erfasst werden kann.

2， Kit zum Nachweis deformierter Zelllysate nach der Endpunktmethode:

Dieses Kit kann den Endotoxingehalt in Proteinen genau bestimmen, Peptid, oder Antikörperproben. Die Endotoxinkonzentration in der Probe wird anhand des in Gegenwart von Endotoxin erzeugten Farbsignals gemessen, welches bei 405 nm auf einem Enzymmarker nachgewiesen werden kann. Eine Standardkurve wird mit E erstellt. In jedem Kit ist ein Coli-Endotoxin-Standard enthalten, und der Endotoxinspiegel wird darin berechnet 16-36 Minuten (bis hin zu 0.01 EU/ml) je nach gewünschter Empfindlichkeit.

3， Dynamische Farbentwicklungsmethode:

Bei dieser Methode, LPS (Lipopolysaccharid) aktiviert das Proenzym im Pfeilschwanzkrebs-Reagenz, Katalysieren der Farbentwicklung des chromogenen Substrats, und es entsteht ein gelbes Produkt. Die Zunahme der Gelbfärbung korreliert positiv mit der LPS-Konzentration.

4, photometrische Methode:

Die photometrische Methode gliedert sich in die Trübungs- und die chromogene Substratmethode. Die turbidimetrische Methode nutzt den Nachweis von Pfeilschwanzkrebsreagenz und Trübungsänderungen im Endotoxin-Reaktionsprozess sowie die Bestimmung des Endotoxingehalts. Die chromogene Substratmethode nutzt den Nachweis von Pfeilschwanzkrebs-Reagenz und den Endotoxin-Reaktionsprozess der Koagulase, um das spezifische Substrat dazu zu bringen, die Menge an Chromophoren freizusetzen und die Menge an Endotoxin zu bestimmen.

5, Semiquantitativer Gel-Test:

Quantifizieren Sie die Menge an Endotoxin im Testmaterial, indem Sie die Konzentration am Endpunkt der Reaktion bestimmen. Diese Methode quantifiziert den Endotoxingehalt im verdünnten Testartikel und bestimmt, ob der Testartikel die angegebenen Endotoxingrenzwerte einhält.

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