एंडोटॉक्सिन का पता लगाने की सामान्य विधियाँ

प्लास्मिड में एंडोटॉक्सिन सामग्री का पता लगाने के लिए आमतौर पर निम्नलिखित विधियों का उपयोग किया जाता है:

1, घोड़े की नाल केकड़ा अभिकर्मक रंग विकास विधि:

यह घोड़े की नाल केकड़े अभिकर्मक पर आधारित एक पता लगाने की विधि है (लियोफ़िलाइज़्ड अमीबोसाइट लाइसेट, लाल), हॉर्सशू केकड़ा अभिकर्मक में C कारक होता है, बी कारक, कोगुलेज़ प्रोटीन, कोगुलेज़ प्रोटीन, और अन्य घटक, उपयुक्त परिस्थितियों में, एंडोटॉक्सिन सी फैक्टर को सक्रिय करता है, एंजाइमेटिक प्रतिक्रियाओं की एक श्रृंखला को ट्रिगर करना, और अंततः कोगुलेज़ प्रोटीन को सक्रिय करके कोगुलेज़ एंजाइम बनाता है, जो रंग विकसित करने वाले एजेंट को तोड़ता है और पीला पी-नाइट्रोएनिलिन उत्पन्न करता है (पीएनए, λमैक्स = 405एनएम). पीएनए उत्पादन एंडोटॉक्सिन की सांद्रता के समानुपाती होता है ताकि नमूने में एंडोटॉक्सिन सांद्रता का मात्रात्मक रूप से पता लगाया जा सके।.

2， समापन बिंदु विधि विकृत सेल लाइसेट डिटेक्शन किट:

यह किट प्रोटीन में एंडोटॉक्सिन सामग्री का सटीक पता लगा सकती है, पेप्टाइड, या एंटीबॉडी नमूने. नमूने में एंडोटॉक्सिन सांद्रता को एंडोटॉक्सिन की उपस्थिति में उत्पन्न रंग संकेत द्वारा मापा जाता है, जिसे एंजाइम मार्कर पर 405 एनएम पर पता लगाया जा सकता है. ई का उपयोग करके एक मानक वक्र बनाया जाता है. कोलाई एंडोटॉक्सिन मानक प्रत्येक किट में शामिल है, और एंडोटॉक्सिन स्तर की गणना भीतर की जाती है 16-36 मिनट (नीचे तक 0.01 ईयू/एमएल) वांछित संवेदनशीलता पर निर्भर करता है.

3， गतिशील रंग विकास विधि:

इस विधि में, एलपीएस (lipopolysaccharide) हॉर्सशू केकड़े अभिकर्मक में प्रोएंजाइम को सक्रिय करता है, क्रोमोजेनिक सब्सट्रेट के रंग विकास को उत्प्रेरित करना, और एक पीला उत्पाद बना रहा है. पीले रंग में वृद्धि सकारात्मक रूप से एलपीएस की सांद्रता से संबंधित है.

4, फोटोमेट्रिक विधि:

फोटोमेट्रिक विधि को मैलापन और क्रोमोजेनिक सब्सट्रेट विधियों में विभाजित किया गया है. टर्बिडिमेट्रिक विधि हॉर्सशू केकड़े अभिकर्मक और एंडोटॉक्सिन प्रतिक्रिया प्रक्रिया की गड़बड़ी में परिवर्तन और एंडोटॉक्सिन सामग्री के निर्धारण का पता लगाने का उपयोग करती है।. क्रोमोजेनिक सब्सट्रेट विधि विशिष्ट सब्सट्रेट को क्रोमोफोर्स की मात्रा जारी करने और एंडोटॉक्सिन की मात्रा निर्धारित करने के लिए हॉर्सशू क्रैब अभिकर्मक और कोगुलेज़ की एंडोटॉक्सिन प्रतिक्रिया प्रक्रिया का पता लगाने का उपयोग करती है।.

5, जेल अर्ध-मात्रात्मक परीक्षण:

प्रतिक्रिया के समापन बिंदु पर एकाग्रता का निर्धारण करके परीक्षण सामग्री में एंडोटॉक्सिन की मात्रा निर्धारित करें. यह विधि पतला परीक्षण लेख में एंडोटॉक्सिन सामग्री की मात्रा निर्धारित करती है और यह निर्धारित करती है कि परीक्षण लेख निर्दिष्ट एंडोटॉक्सिन सीमाओं को पूरा करता है या नहीं.

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