ट्राइज़ोल विधि की तुलना में आरएनए निष्कर्षण के लिए चुंबकीय मनका विधि के क्या फायदे हैं??

1.दोनों विधियों के बीच अंतर को समझना, सबसे पहले उनके सिद्धांतों को समझना आवश्यक है:

 ट्राइज़ोल विधि में कोशिकाओं को नष्ट करने के लिए फिनोल और क्लोरोफॉर्म जैसे कार्बनिक सॉल्वैंट्स का उपयोग करना शामिल है, जिससे आरएनए को डीएनए और प्रोटीन से अलग किया जा सके. आरएनए जलीय चरण में घुल जाता है और आइसोप्रोपेनॉल के साथ वर्षा के बाद शुद्ध हो जाता है. चुंबकीय मनका विधि लसीका समाधान के माध्यम से आरएनए जारी करती है, जहां सिलिका मैट्रिक्स या चुंबकीय मोतियों पर विशिष्ट कार्यात्मक समूह विशेष रूप से उच्च नमक वाले वातावरण में आरएनए को सोख लेते हैं. धोने के बाद, आरएनए कम नमक वाले घोल में घुल जाता है.

• इसके अलावा, दोनों की संचालन प्रक्रिया में कुछ अंतर हैं:

कदम	चुंबकीय मनका विधि	ट्राइज़ोल तरीका
लसीका	लाइसेट का तीव्र लसीका (स्वचालित)	मैन्युअल रूप से पीसना/चूर्ण करना + ट्राइज़ोल लसीका
अलग	चुंबकीय मोती अधिशोषित आरएनए और चुंबकीय फ्रेम पृथक्करण	केन्द्रापसारक स्तरीकरण (जलीय/जैविक चरण)
धोना	चुंबकीय मोतियों को इथेनॉल/उच्च नमक बफर से धोया गया था	75% अवक्षेप को साफ करने के लिए इथेनॉल का उपयोग किया गया था
वापस पाना	कम नमक बफर क्षालन	आइसोप्रोपेनॉल अवक्षेपण + हवा में सुखाना
समय	40-60 मिनट (पूरी तरह से स्वचालित)	40-60 मिनट (पूरी तरह से स्वचालित)

• दोनों तरीकों से निकाले गए आरएनए की गुणवत्ता में अंतर:

 पवित्रता:

ट्राइज़ोल विधि: OD260/280≈1.8-2.0, जो फिनोल अवशेष या प्रोटीन संदूषण से आसानी से प्रभावित होता है.

चुंबकीय मनका विधि: उच्च शुद्धता (OD260/280 अक्सर होता है>1.9), कम अशुद्धता अवशेष के साथ.、

मामला: एक ग्राहक ने अनुवर्ती कोशिकाओं न्यूरो2ए से सेल आरएनए को मैन्युअल रूप से निकालने के लिए ट्राइज़ोल विधि और चुंबकीय मनका विधि का उपयोग किया.

सेल आरएनए निकालने से पहले, त्रुटियों को कम करने के लिए घटकों की गणना की गई, और परिणाम इस प्रकार हैं

नमूना	कोशिका गिनती
1-1	4.11ई6
2-1	5.93ई6
3-1	6.98E5
1-2	4.35ई6
2-2	5.72ई6
3-2	6.82E5

फिर नमूनों को मैन्युअल रूप से निकालने के लिए ट्राइज़ोल विधि और चुंबकीय मनका विधि का उपयोग किया गया, और परिणाम इस प्रकार हैं

नमूना	तरीका	ए260/ए280	ए260/ए230	सान्द्र.(का/यूएल)	ईबी	उपज（यूजी)
1-1	मैग-मोती	2.093	2.222	2742.5	50उल	137.125
2-1		2.072	2.080	2835.4		141.77
3-1		2.038	2.001	470.08		23.504
1-2	ट्राइज़ोल	1.792	0.587	331.68	100उल	33.168
2-2		1.728	0.655	374.68		37.468
3-2		1.650	0.618	107.72		10.772

उपज की दृष्टि से, चुंबकीय मनका विधि सभी नमूनों में ट्राइज़ोल विधि से काफी बेहतर प्रदर्शन करती है, खासकर नमूनों में 1 और 2, जहां उपज 100ug से अधिक है, ट्राइज़ोल विधि के लिए 30-40ug की तुलना में. यह इंगित करता है कि चुंबकीय मनका विधि उच्च निष्कर्षण दक्षता प्रदान करती है.

पवित्रता की दृष्टि से, चुंबकीय मनका विधि द्वारा निकाले गए आरएनए के A260/A280 और A260/A230 मान दोनों ऊपर हैं 2, उच्च गुणवत्ता वाले आरएनए मानकों को पूरा करना. इसके विपरीत, ट्राइज़ोल विधि कम शुद्धता के साथ आरएनए उत्पन्न करती है, A260/A280 मान से लेकर 1.6 को 1.7, अपूर्ण प्रोटीन निष्कासन का संकेत. इसके अतिरिक्त, A260/A230 मान नीचे हैं 0.7, संभावित अवशिष्ट कार्बनिक या नमक यौगिकों का सुझाव देना.

 कुल मिलाकर, इस प्रयोग में चुंबकीय मनका विधि उत्कृष्ट है, उच्च उपज की पेशकश, उच्च शुद्धता, और संचालन में आसानी, इसे पारंपरिक ट्राइज़ोल विधि से बेहतर बनाना और उच्च गुणवत्ता की आवश्यकता वाले डाउनस्ट्रीम प्रयोगों के लिए आदर्श बनाना. निकाले गए आरएनए का उपयोग जीन अभिव्यक्ति परिवर्तनों की जांच के लिए क्यूपीसीआर प्रयोगों में किया जाएगा.

 इसके अतिरिक्त, चुंबकीय मनका विधि अतिरिक्त लाभ प्रदान करती है, जैसे उच्च-थ्रूपुट नमूनों के लिए स्वचालन (96-अच्छी प्लेटों की तरह), खून, लार, और अन्य आसानी से संसाधित नमूने, और मजबूत अनुकूलता, इसे क्लिनिकल या बड़े पैमाने पर स्क्रीनिंग के लिए विशेष रूप से उपयुक्त बनाना.

सारांश: जटिल नमूनों से निपटते समय ट्राइज़ोल विधि चुनें (जैसे कि पॉलीसेकेराइड और पॉलीफेनोल्स से समृद्ध ऊतक) और जब बजट की कमी चिंता का विषय हो. उच्च-थ्रूपुट के लिए चुंबकीय मनका विधि चुनें, स्वचालित, और तेजी से निष्कर्षण, या जब शुद्धता और सुरक्षा पर ध्यान केंद्रित किया जा रहा हो (जैसे नैदानिक ​​निदान में). रुझान: इसके उच्च मानकीकरण के कारण, चुंबकीय मनका विधि तेजी से लोकप्रिय हो रही है, विशेषकर सटीक चिकित्सा में.

Lnjnbio यूनिवर्सल छोटे आरएनए निष्कर्षण अभिकर्मक (चुंबकीय मनका विधि)

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