生体磁気ビーズの専門メーカー
の結果を改善する方法 260/230 試薬抽出に磁気ビーズ法を使った計算は？
磁気ビーズ法で核酸を抽出する場合, 低い 260/230 比率 (いつもの < 1.8) 有機化合物の存在を示します(グアニジン塩など, フェノール, エタノール, EDTA) またはサンプル中の残留塩, 下流の実験に影響を与える可能性があります (PCRなどの, 順序付け).
体系的な最適化計画は次のとおりです:
- 抽出ステップの最適化
ある. 完全なサンプル溶解
問題: 不完全な溶解は不純物の不完全な放出につながります.
改善: 溶解時間を長くする (例えば, まで延長する 30 分) または温度 (56℃).
複雑なサンプルの場合は、粉砕ステップまたは追加のプロテイナーゼ K 消化を追加します。 (植物などの, 糞便).
b. 磁性ビーズをよく洗います
重要なステップ: 洗い残しが主な原因 260/230 低い.
改善: 洗濯の回数を増やす: 2 回→ 3 回 (特に不純物が多いサンプルの場合).
洗浄液配合: 必ず作りたてを使用してください 80% エタノール (過剰な水分含有量や汚染を避ける).
洗浄動作: 毎回ボルテックスまたはシェイクして磁気ビーズを混合します, ビーズの塊の形成を避ける.
上清を徹底的に吸引する (簡単に遠心分離して残留液体を除去できます).
c. 磁性ビーズの完全乾燥
問題: 残留エタノールを大幅に削減できる 260/230.
改善: キャップを開けてしばらく乾燥させます 5-10 分 (室温または37℃で), エタノール臭がなくなるまで. 過度の乾燥を避ける (さもないと, 核酸の溶出効率が低下します。).
d. 溶出条件の最適化
予熱した溶出バッファーを使用する (65℃ TE バッファーまたは滅菌水など), そしてそれをそのままにしておきます 5 収集の数分前.
溶出量が少なすぎることを避ける (推奨します ≥ 50 塩分濃度を下げるためのμL).
Ⅱ.品質管理 試薬および消耗品の説明
ある. 新しい試薬と交換してください:
エタノールや洗浄液が汚れていないか確認してください (密封せずに長期間保管した場合).
期限切れの磁気ビーズ試薬の使用を避ける (磁気ビーズの劣化により不純物が吸着される可能性があります).
b. 消耗品の選択:
ヌクレアーゼやパイロジェンを含まない遠心チューブとピペットを使用してください。 (プラスチック添加剤による干渉を避けるため).
Ⅲ.サンプルの前処理
- 複雑なサンプル (土や植物など):
CTAB または SDS 前処理を増やして多糖類とポリフェノールを除去します。.
- 血液サンプル用:
まず赤血球溶解液を使用してヘモグロビンを除去します。.
- 阻害剤が豊富なサンプル (糞便や体液など):
サンプルを希釈するか、専用の溶解バッファーを使用します (Carrier RNAを含むものなど).
Ⅳ.検証と是正措置
ある. 電気泳動または Qubit の検証:
劣化をチェックする (尾引き現象) アガロースゲル電気泳動を使用する.
蛍光メーターを使用して Nanodrop の結果と比較します。 (量子ビット) 不純物吸収による干渉を排除するため.
b. 浄化修復:
の比率であれば、 260/230 低いまま, シリカカラムを使用するか、再度エタノール沈殿によって核酸を精製します。.
V. 対照実験
抽出ごとに, 既知の標準サンプル (λDNAや培養細胞など) 試薬の安定性を確認するために設置されています.
もし 260/230 対照サンプルの比率は正常です, 問題はテスト対象のサンプル自体にある可能性があります.
一般的な問題のトラブルシューティング チェックリスト
| 現象 | 考えられる原因 | 解決 |
| 260/230 低いですが 260/280 正常です | タンパク質またはフェノールの汚染 | 洗浄・乾燥工程の強化 |
| 両方 260/230 そして 260/280 低いです | タンパク質またはフェノールの汚染 | 溶解を最適化する, 溶解液を交換する |
| のみ 230 ピークは高い | 有機溶剤による汚染 | エタノールまたは緩衝液の純度を確認してください |
以下の手順に従ってください, の比率 260/230 大幅に増加する可能性があります (ターゲット > 1.8). 問題が解決しない場合, Shanghai Lingjun Biotechnology までお気軽にお問い合わせください。 18103799069.
サプライヤー
上海霊軍生物技術有限公司, 株式会社に設立されました 2016 生体磁性材料と核酸抽出試薬の専門メーカーです.
核酸抽出・精製の経験が豊富です。, タンパク質の精製, 細胞分離, 化学発光, その他の技術分野.
当社の製品はさまざまな分野で広く使用されています, 医療検査など, 遺伝子検査, 大学の研究, 遺伝子育種, 等々. 製品のご提供だけでなくOEMも承ります, ODM, その他のニーズ. 関連するニーズがある場合, お気軽にお問い合わせください .
