Как улучшить результаты 260/230 расчет с использованием метода магнитных шариков для извлечения реагентов？

При экстракции нуклеиновых кислот методом магнитных шариков, низкий 260/230 соотношение (обычно < 1.8) указывает на наличие органических соединений(такие как соли гуанидина, фенол, этанол, ЭДТА) или остаточные соли в образце, что может повлиять на дальнейшие эксперименты (например, ПЦР, секвенирование).

 Вот систематический план оптимизации:

1. Оптимизация этапов экстракции

а. Полный лизис образца

Проблема: Неполный лизис приводит к неполному выделению примесей..

Улучшение: Увеличить время лизиса (например, распространяться на 30 минуты) или температура (56℃).

Добавьте этап измельчения или дополнительное расщепление протеиназой К для сложных образцов. (такие как растения, фекалии).

б. Тщательно промойте магнитные шарики.

Ключевой шаг: Неполная стирка является основной причиной 260/230 низкий.

Улучшение: Увеличьте количество стирок.: 2 раз → 3 раз (особенно для образцов с высоким содержанием примесей).

Формула моющего раствора: Обязательно используйте свежеприготовленный 80% этанол (избегать чрезмерного содержания воды или загрязнения).

Операция стирки: Каждый раз перемешивайте магнитные шарики на вортексе или встряхивайте., избежание образования комков бисера.

Тщательно аспирируйте супернатант (можно кратковременно центрифугировать для удаления остатков жидкости).

с. Полное высыхание магнитных шариков.

Проблема: Остаточный этанол может значительно снизить 260/230.

Улучшение: Откройте крышку и дайте ей высохнуть в течение 5-10 минуты (при комнатной температуре или 37°C), пока не исчезнет запах этанола. Избегайте чрезмерного высыхания (в противном случае, это снизит эффективность элюирования нуклеиновой кислоты).

 д. Оптимизация условий элюирования

Используйте предварительно нагретый буфер для элюирования. (например, буфер TE 65°C или стерильная вода.), и пусть это стоит за 5 минут до сбора.

Избегайте использования слишком малого объема элюата. (рекомендовать ≥ 50 мкл для снижения концентрации соли).

Ⅱ.Контроль качества реагентов и расходных материалов

а. Замените свежими реагентами.:

Проверьте, не были ли загрязнены этанол и промывной раствор. (при длительном хранении без герметизации).

Избегайте использования реагентов для магнитных шариков с истекшим сроком годности. (деградация магнитных шариков может адсорбировать примеси).

б. Выбор расходных материалов:

Используйте центрифужные пробирки и пипетки без нуклеазы или пирогена. (во избежание помех от пластиковых добавок).

Ⅲ.Предварительная обработка образца

1. Сложные образцы (такие как почва и растения):

Увеличьте предварительную обработку CTAB или SDS для удаления полисахаридов и полифенолов..

• Для образцов крови:

 Сначала удалите гемоглобин с помощью раствора для лизиса эритроцитов..

• Образцы, обогащенные ингибиторами (такие как фекалии и жидкости организма):

Разбавьте образцы или используйте специальные буферы для лизиса. (например, содержащие РНК-носитель).

Ⅳ.Проверка и меры по исправлению положения

а. Электрофорез или проверка кубита:

Проверьте на деградацию (явление хвоста) с помощью электрофореза в агарозном геле.

Сравните результаты с результатами Nanodrop, используя флуоресцентный метр. (Кубит) для устранения помех от поглощения примесей.

б. Восстановление очистки:

Если соотношение 260/230 остается низким, очистите нуклеиновую кислоту, используя колонку с силикагелем или снова осаждав этанолом.

В. Контрольный эксперимент

За каждое извлечение, известный стандартный образец (такие как λДНК или культивируемые клетки) устанавливается для подтверждения стабильности реагентов.

Если 260/230 соотношение контрольной пробы в норме, проблема может заключаться в самом тестируемом образце.

Контрольный список для устранения распространенных проблем

Феномен	Возможная причина	Решение
260/230 низкий, но 260/280 это нормально	Белковое или фенольное загрязнение	Усиление этапов стирки и сушки
Оба 260/230 и 260/280 низкие	Белковое или фенольное загрязнение	Оптимизация лизиса, заменить раствор для лизиса
Только 230 пик высокий	Загрязнение органическими растворителями	Проверьте чистоту этанола или буфера

Выполнив эти шаги, соотношение 260/230 может быть значительно увеличено (цель > 1.8). Если проблема не устранена, пожалуйста, свяжитесь с Shanghai Lingjun Biotechnology по адресу: 18103799069.

Поставщик

Шанхайская биотехнологическая компания Линцзюнь., ОООбыл создан в 2016 который является профессиональным производителем биомагнитных материалов и реагентов для экстракции нуклеиновых кислот..

Мы имеем богатый опыт в экстракции и очистке нуклеиновых кислот., очистка белка, разделение клеток, хемилюминесценция, и другие технические области.

Наша продукция широко используется во многих областях., например, медицинское тестирование, генетическое тестирование, университетские исследования, генетическое разведение, и так далее. Мы не только поставляем продукцию, но и можем взять на себя OEM, ОДМ, и другие потребности. Если у вас есть соответствующая потребность, пожалуйста, не стесняйтесь обращаться к нам .