Hoe DNA uit botten te halen

In wetenschappelijk onderzoek of identificatiegebieden zoals archeologie, forensische wetenschap, en paleontologie, wetenschappers moeten vaak genetische informatie over een organisme verkrijgen uit oude bot- of tandmonsters. Deze informatie is belangrijk voor onderzoeken zoals soortidentificatie, identiteit, en veranderingen in het milieu. Echter, het extraheren van DNA uit botten is een complexe en technisch veeleisende techniek vanwege de bewaaromstandigheden van de monsters. In dit artikel wordt gedetailleerd beschreven hoe u dit effectief kunt doen DNA eruit halen uit botten.

I. Voorbereiding

Selectie van geschikte monsters: Ideale monsters moeten goed bewaarde botdelen zijn die niet ernstig besmet zijn. Bijvoorbeeld, menselijke resten gevonden op archeologische vindplaatsen of dierlijke botten bewaard in specifieke omgevingen.

Reiniging en verwerking: Gebruik steriele hulpmiddelen om oppervlaktevuil en andere verontreinigingen te verwijderen om de impact van extern DNA op de resultaten te minimaliseren. Soms chemische methoden (bijv., weken in alcohol) zijn nodig voor verdere reiniging.

2. Breken en demineralisatie

Verpletteren van botten: Om de werking van de reagentia te versterken, de botten worden meestal tot fijne deeltjes vermalen. Deze stap moet onder strikte controle worden uitgevoerd om de introductie van vreemd DNA te voorkomen.

Demineralisatie: Door toevoeging van een chelaatvormeroplossing zoals EDTA (ethyleendiaminetetra-azijnzuur), het calciumzoutgehalte van het bot kan effectief worden opgelost, waardoor de ingekapselde cellen vrijkomen. Dit proces kan uren of zelfs dagen duren.

3. DNA-extractie

Cellyse: Proteïnase K en lyseringsoplossing worden aan het gedemineraliseerde beendermeel toegevoegd om celruptuur door verhitting te bevorderen, waardoor de vrijgave van intern DNA mogelijk wordt. Vervolgens, een centrifuge werd gebruikt om het supernatant te scheiden, d.w.z. de vloeistof die het doel-DNA bevat.

Zuiveringsstap: DNA-zuivering wordt uitgevoerd met behulp van de magnetische parelmethode voor nucleïnezuurextractie, silicagelkolommen, of andere in de handel verkrijgbare kits. Deze methoden verwijderen onzuiverheden zoals eiwitten en polysachariden terwijl pure DNA-fragmenten worden geconcentreerd en behouden.

4. Kwaliteitstesten en analyses

Concentratiemeting: Meet de totale hoeveelheid geëxtraheerd DNA en de zuiverheid ervan met behulp van een UV-spectrofotometer, fluorescentie kwantitatieve PCR, enz.

Beoordeling van integriteit: controleer via gelelektroforese of de DNA-keten compleet is, of voer direct sequencing uit om in eerste instantie de geschiktheid ervan te beoordelen.

5. Voorzorgsmaatregelen tijdens het extractieproces

Degradatie probleem: Met de verlenging van de bewaartijd van het monster, DNA is gevoelig voor breuk, hydrolyse, en andere verschijnselen, waardoor de extractie moeilijker wordt. Daarom, Er moet speciale aandacht worden besteed aan snelle extractie en vermindering van verlies bij het omgaan met eeuwenoude monsters.

Besmettingscontrole: Aseptische bedrijfsnormen moeten tijdens het hele proces strikt in acht worden genomen om vermenging van modern, van mensen afkomstig DNA te voorkomen, wat de authenticiteit van de eindresultaten zal beïnvloeden.

De extractie van hoogwaardig DNA uit botten is niet alleen afhankelijk van de steun van geavanceerde wetenschap en technologie, maar stelt ook de professionele kennis en nauwgezette bedieningsvaardigheden van onderzoekers op de proef.. Terwijl het onderzoek op dit gebied zich blijft ontwikkelen, we hopen in de toekomst meer mysteries van het leven te ontrafelen.

Leverancier

Shanghai Lingjun Biotechnologie Co., Ltd.werd opgericht in 2016 dat een professionele fabrikant is van biomagnetische materialen en reagentia voor nucleïnezuurextractie.

We hebben een rijke ervaring in de extractie en zuivering van nucleïnezuren, eiwit zuivering, cel scheiding, chemiluminescentie en andere technische gebieden.

Onze producten worden op veel gebieden veel gebruikt, zoals medische testen, genetische testen, universitair onderzoek, genetische veredeling, enzovoort. Wij leveren niet alleen producten, maar kunnen ook OEM ondernemen, ODM, en andere behoeften. Als u een gerelateerde behoefte heeft, neem dan gerust contact met ons op viasales01@lingjunbio.com.

• Magnetische parelnucleïnezuurextractie: The Invisible Hunter Capturing the “Nipah Virus”
• Op magnetische kralen gebaseerde nucleïnezuurextractietechnologie: Leidt de efficiëntierevolutie in de biofarmaceutische industrie
• Praktische evaluatie van een op magnetische kralen gebaseerde universele totaal-RNA-extractiekit voor algemeen gebruik
• Magnetische parelgebaseerde nucleïnezuurextractie voor precisiegeneeskunde
• Optimalisatie van temperatuur en tijd voor op silica gebaseerde magnetische kralen bij de selectie van DNA-fragmenten