Bagaimana untuk mengekstrak DNA dari tulang

Dalam penyelidikan saintifik atau bidang pengenalan seperti arkeologi, sains forensik, dan paleontologi, saintis selalunya perlu mendapatkan maklumat genetik tentang organisma daripada sampel tulang atau gigi purba. Maklumat ini penting untuk kajian seperti pengenalpastian spesies, identiti, dan perubahan persekitaran. Namun begitu, mengekstrak DNA daripada tulang adalah teknik yang kompleks dan memerlukan teknikal kerana keadaan penyimpanan sampel. Artikel ini akan memperincikan proses bagaimana untuk berkesan ekstrak DNA daripada tulang.

saya. Persediaan

Pemilihan sampel yang sesuai: Sampel yang ideal hendaklah bahagian tulang yang dipelihara dengan baik dan tidak tercemar dengan serius. Contohnya, mayat manusia yang ditemui di tapak arkeologi atau tulang haiwan yang dipelihara dalam persekitaran tertentu.

Pembersihan dan pemprosesan: Gunakan alat steril untuk membuang tanah permukaan dan bahan cemar lain untuk meminimumkan kesan DNA luaran pada hasilnya. Kadang-kadang kaedah kimia (cth., berendam dalam alkohol) diperlukan untuk pembersihan selanjutnya.

2. Penghancuran dan Penyahmineralan

Menghancurkan tulang: Untuk meningkatkan kesan reagen, tulang biasanya dikisar menjadi zarah halus. Langkah ini perlu dijalankan di bawah kawalan ketat untuk mengelakkan pengenalan DNA asing.

Penyahmineralan: Dengan menambah penyelesaian agen pengkelat seperti EDTA (asid ethylenediaminetetraacetic), kandungan garam kalsium tulang boleh dibubarkan dengan berkesan, dengan itu melepaskan sel-sel yang terkapsul. Proses ini mungkin mengambil masa berjam-jam atau bahkan berhari-hari.

3. Pengekstrakan DNA

Lisis sel: Proteinase K dan larutan lysing ditambah kepada tepung tulang yang telah dinyahmineral untuk menggalakkan pecah sel melalui pemanasan, membenarkan pembebasan DNA dalaman. Seterusnya, centrifuge digunakan untuk mengasingkan supernatan, i.e. cecair yang mengandungi DNA sasaran.

Langkah pemurnian: Pembersihan DNA dilakukan menggunakan kaedah manik magnet pengekstrakan asid nukleik, tiang gel silika, atau kit lain yang tersedia secara komersial. Kaedah ini menghilangkan kekotoran seperti protein dan polisakarida sambil menumpukan dan mengekalkan serpihan DNA tulen.

4. Ujian dan analisis kualiti

Pengukuran kepekatan: Ukur jumlah keseluruhan DNA yang diekstrak dan ketulenannya menggunakan spektrofotometer UV, PCR kuantitatif pendarfluor, dll.

Penilaian integriti: semak sama ada rantai DNA lengkap melalui elektroforesis gel, atau secara langsung menjalankan penjujukan untuk menilai kesesuaiannya pada mulanya.

5. Langkah berjaga-jaga ke atas proses pengekstrakan

Masalah degradasi: Dengan pemanjangan masa pemeliharaan sampel, DNA terdedah kepada pecah, hidrolisis, dan fenomena lain, mengakibatkan peningkatan kesukaran dalam pengekstrakan. Oleh itu, perhatian khusus harus diberikan kepada pengekstrakan cepat dan pengurangan kerugian apabila berurusan dengan sampel yang sudah tua.

Kawalan pencemaran: Norma operasi aseptik mesti dipatuhi dengan ketat semasa keseluruhan proses untuk mengelakkan percampuran DNA moden yang berasal dari manusia, yang akan menjejaskan ketulenan keputusan akhir.

Pengekstrakan DNA berkualiti tinggi daripada tulang bukan sahaja bergantung pada sokongan sains dan teknologi canggih tetapi juga menguji pengetahuan profesional dan kemahiran operasi yang teliti penyelidik.. Apabila penyelidikan dalam bidang ini terus berkembang, kami berharap dapat merungkai lebih banyak misteri kehidupan pada masa hadapan.

Pembekal

Shanghai Lingjun Biotechnology Co., Ltd.ditubuhkan pada 2016 yang merupakan pengilang profesional bahan biomagnet dan reagen pengekstrakan asid nukleik.

Kami mempunyai pengalaman yang kaya dalam pengekstrakan dan penulenan asid nukleik, penulenan protein, pemisahan sel, chemiluminescence dan bidang teknikal lain.

Produk kami digunakan secara meluas dalam pelbagai bidang, seperti ujian perubatan, ujian genetik, penyelidikan universiti, pembiakan genetik, dan seterusnya. Kami bukan sahaja menyediakan produk tetapi juga boleh menjalankan OEM, ODM, dan keperluan lain.Jika anda mempunyai keperluan yang berkaitan, sila hubungi kami disales01@lingjunbio.com.

• Pengekstrakan Asid Nukleik Manik Magnet: Pemburu Halimunan Menangkap “Nipah Virus”
• Teknologi pengekstrakan asid nukleik berasaskan manik magnet: Menerajui revolusi kecekapan dalam industri biofarmaseutikal
• Penilaian Praktikal Kit Pengekstrakan Jumlah RNA Sejagat Berasaskan Manik Magnet Tujuan Am
• Pengekstrakan Asid Nukleik Berasaskan Manik Magnetik untuk Perubatan Ketepatan
• Mengoptimumkan Suhu dan Masa untuk Manik Magnet Berasaskan Silika dalam Pemilihan Serpihan DNA