Hの最適化. 磁気ビーズ DNA 抽出によるピロリ菌の検出

導入

磁気ビーズベースの核酸抽出 現在主流であり、ヘリコバクター ピロリの分子検出において重要な役割を果たしているゴールドスタンダード技術です。 (H. ピロリ菌). 今日, アプリケーションを詳しく調査します, 特定のプロトコル, ヘリコバクター・ピロリ核酸検査における磁気ビーズベースの核酸抽出技術と今後の展望.

1. 応用: 磁気ビーズ法が H に特に適している理由. ピロリ菌核酸検査?

Hのサンプル. ピロリ菌の検出には通常、胃粘膜組織が含まれます (生検), スツール, 唾液, 歯垢とか. これらのサンプルは組成が複雑です, 大量の宿主細胞を含む, 粘液, 食べ物の残骸, 胆汁酸, およびさまざまな PCR 阻害剤.

したがって, 効率的で純粋な核酸抽出は、その後の核酸検査の精度を確保するために重要です。 (qPCRなど, デジタル PCR, そしてシーケンス).

1.1 この点において、磁気ビーズ法は大きな利点をもたらします。

• 高純度および高収率: 磁気ビーズが効率的に核酸を吸着し、タンパク質などの不純物を除去します。, 多糖類, 複数の洗浄ステップを通じて脂質を除去. 複雑な胃腸サンプル中の PCR 阻害剤の除去に特に効果的です。, 検出感度と特異性が大幅に向上.
• 自動化と高スループット: 磁気ビーズ法は自動化に非常に適しています. 数十、さらには数百のサンプルを同時に処理できる自動核酸抽出装置が多数利用可能です。, 効率を大幅に向上, 人的ミスを減らす, 大規模な臨床検査や疫学スクリーニングの需要にも対応します。.
• 安全性とシンプルさ: 全プロセスは密閉されたディープウェルプレート内で行われます, エアロゾル汚染を最小限に抑え、オペレーターを減らす’ 危険な試薬への曝露, それによりバイオセーフティを強化します.
• 柔軟性: このメソッドはさまざまな種類のサンプルに適しています, 胃組織を含む, スツール, および経口サンプル, 溶解バッファーの配方と操作パラメーターを若干調整して.
• 標準化: 自動化されたプロセスにより高度な標準化が保証されます, 信頼できる結果, 研究室間の比較と品質管理を促進します.

2. プロトコル: H の磁気ビーズベースの核酸抽出および検出ワークフロー. ピロリ菌

以下は、H を抽出するための標準的な自動磁気ビーズベースのプロトコルです。. ピロリ菌のDNA (例として胃組織または便サンプルを使用する):

2.1 サンプルの前処理

胃粘膜組織: 生検組織を PBS の入った遠心管に入れ、組織グラインダーを使用して完全に均質化します。.

便サンプル: 少量を一時停止する (例えば, 100–200mg) 特定のサンプル保存溶液または PBS バッファーに溶解した便サンプル, ボルテックスして混ぜる, そして遠心分離して上清を回収します.

2.2 核酸抽出 (96 ウェル自動抽出システムの使用)

溶解: 取る 200 処理されたサンプル上清 μL をプロテイナーゼ K を含む強力な溶解バッファーに加えます。 (例えば, 塩酸グアニジンベースの変性塩システム). 60 ～ 70°C で 10 ～ 20 分間インキュベートして、細胞と細菌を完全に溶解します, 核酸を放出する, 潜在的なヌクレアーゼを不活性化します.

バインディング: 結合バッファーと磁気ビーズ懸濁液をライセートに加えて混合します。. 変性塩の高いイオン強度の下で, DNAが磁性ビーズの表面に特異的に吸着します. 数分間インキュベートした後, 磁気スタンドを使用してビーズ-DNA 複合体を捕捉し、上清を廃棄します。.

洗浄:

ウォッシュバッファーI: 通常、タンパク質を除去するために高濃度の塩とエタノールが含まれています。, 脂質, およびその他の不純物.

ウォッシュバッファー II: 通常、塩と残留阻害剤を除去するために低濃度の塩とエタノールが含まれています。.

各洗浄ステップの後, ビーズを再懸濁する, 彼らを捕まえる, そして液体を捨てます. 2～3回繰り返します.

乾燥: 洗浄バッファーを完全に除去した後, チューブを開けたまま室温で数分間放置するか、穏やかに熱して残留エタノールを完全に蒸発させます。, 後続の PCR 反応への干渉を回避する.

溶出: 低塩または無塩の溶出バッファーを追加します。 (例えば, Tris-EDTA 緩衝液または滅菌水), ビーズを再懸濁する, 55 ～ 65°C で 5 ～ 10 分間インキュベートして、ビーズから DNA を解離させます。. ついに, 磁気スタンドを使用してビーズをキャプチャします, 得られた上清には精製された H が含まれています。. ピロリ菌のDNAテンプレート.

2.3 核酸検出

抽出した DNA テンプレートをリアルタイム定量 PCR に追加します。 (qPCR) 反応系.

標的遺伝子: 一般的に選択された高度に特異的な H の保存遺伝子. ピロリ菌が含まれている:

• ウレアーゼA遺伝子 (尿素): 最も一般的に使用される, 極めて高い特異性を持った.
• 16S rRNA 遺伝子: 高度に保存されている, 属レベルの識別に適しています.
• cagA遺伝子: 高毒性株を区別するために使用される毒性遺伝子.

反応: qPCR 機器で増幅を実行し、蛍光シグナルを監視して結果を判断します. 陽性サンプルは特徴的な S 字型の増幅曲線を示します。.

品質管理

内部統制 (IC): プロセス全体の成功を監視し、偽陰性を回避するために、抽出の開始時に追加されます。.

ポジティブコントロールとネガティブコントロール: 抽出試薬と PCR 試薬の有効性を保証するために各実験に含まれています.

3. 展望と今後の方向性

H における磁気ビーズベースの核酸抽出技術の展望. ピロリ菌の検出は広範囲にわたり、次の方向に発展するでしょう。:

• 完全に統合 “サンプルイン, 結果アウト” システム: 将来のトレンドには核酸抽出の統合が含まれます, 増幅, 単一のマイクロ流体チップまたはカートリッジへの検出. ユーザーはサンプルを追加するだけで済みます, 機器はプロセス全体を自動的に完了し、レポートを生成します。. これにより操作が大幅に簡素化されます, 検出時間を短縮する (潜在的に内部まで 1 時間), 外来診療に非常に適しています, プライマリケア病院, そして家庭用でも.
• 多重検出と薬剤耐性遺伝子解析: 磁気ビーズ法により抽出された高品質の核酸がマルチプレックス qPCR 検査をサポート. 単一の反応で H を測定できるだけではありません. ピロリ菌感染だけでなく複数の薬剤耐性遺伝子も検出 (例えば, クラリスロマイシン耐性変異 23S rRNA, レボフロキサシン耐性変異gyrA), 分子診断と薬剤感受性検査を統合して、正確な臨床治療への直接的なガイダンスを提供します.
• メタゲノミクスと株のタイピング: 高品質の DNA 抽出はメタゲノム シーケンスの前提条件です (mNGS). 磁気ビーズ法は、mNGS 用の高品質のテンプレートを提供できます。, H に関する研究を可能にする. ピロリ菌の多様性, 進化的関係, 感染微小環境における他の微生物との相互作用, それにより、より深いメカニズムの研究を進めることができます.
• 非侵襲的検査の普及: 大便ベースのH. ピロリ菌のDNA検査 (便抗原検査, 土) 優れた非侵襲的方法です. 自動磁気ビーズベースの抽出の成熟により、大規模な便スクリーニングが可能になります, 子供に適した, 内視鏡検査に耐えられない人, 治療後の有効性モニタリング.
• 継続的な技術最適化: 磁気ビーズ, 緩衝液製剤, 機器の設計は、より高速なパフォーマンスを実現するために引き続き最適化されます。 (内側に短縮する 20 分), より費用対効果の高い (テストごとのコストを削減する), そしてより環境に優しい (より環境に優しい試薬を使用する) より高純度の核酸の抽出.

4. 製品の推奨事項

上海霊軍生物技術有限公司, 株式会社. 病原体疾患の診断に広く使用されているシリカベースの磁気ビーズのさまざまなモデルを提供しています, 特に 160013 磁気ビーズ, ヘリコバクター・ピロリの核酸抽出に適しています. の 160013 磁気ビーズは非常に高い検出感度を提供します, 感染時の早期スクリーニングを可能にし、病気の制御と予防に貴重な時間を費やすことができます。.

【製品仕様】

製品コード: 160013

固形コンテンツ: 50 mg/mL

包装: 2 mL / 10 mL / 50 mL / 500 mL / 1000 mL

【製品パラメータ】

アクティブグループ: Si-OH

磁気ビーズマトリックス: 二酸化ケイ素

平均粒子径: 1.2 μm

磁気飽和強度: 65 ± 5 エミュ/g

【製品の利点】

高い吸着率: 最大回収率超過 95%.

優れたサスペンションと強力な磁気特性により操作が容易.

核酸抽出における高純度および高感度.

バッチ間の優れた一貫性を備えた成熟した生産プロセス.

結論

磁性ビーズを用いた核酸抽出技術, 自動化の利点を活かして, 高スループット, 高純度, そして高い安全性, ヘリコバクター ピロリの分子診断における核酸調製のゴールドスタンダード法となっています。. 現在の qPCR 検査の信頼性を確保するだけでなく、迅速な検査を進めるための重要な技術基盤としても機能します。, 正確な, H の非侵襲的診断. ピロリ菌感染症. 分子技術が進化し統合され続けるにつれて, この分野における磁気ビーズベースの手法の応用は、さらに奥深く、広範囲に及ぶだろう。.

サプライヤー

上海霊軍生物技術有限公司, 株式会社に設立されました 2016 生体磁性材料と核酸抽出試薬の専門メーカーです.

核酸抽出・精製の経験が豊富です。, タンパク質の精製, 細胞分離, 化学発光, その他の技術分野.

当社の製品はさまざまな分野で広く使用されています, 医療検査など, 遺伝子検査, 大学の研究, 遺伝子育種, 等々. 製品のご提供だけでなくOEMも承ります, ODM, その他のニーズ. 関連するニーズがある場合, お気軽にお問い合わせください .