H 최적화. 자기 비드 DNA 추출을 통한 파일로리 검출

소개

마그네틱 비드 기반 핵산 추출 현재 헬리코박터 파일로리(Helicobacter pylori)의 분자 검출에 중요한 역할을 하는 주류이자 표준 기술입니다. (시간. 파일로리). 오늘, 우리는 응용 프로그램을 자세히 살펴볼 것입니다, 특정 프로토콜, 헬리코박터 파일로리 핵산 검사에서의 자기비드 기반 핵산 추출 기술의 향후 전망 및 전망.

1. 애플리케이션: 마그네틱 비드 방법이 H에 특히 적합한 이유. pylori 핵산 검사?

H에 대한 샘플. pylori 검출에는 일반적으로 위점막 조직이 포함됩니다. (생검), 발판, 타액, 아니면 치과 플라크. 이 샘플은 구성이 복잡합니다., 다량의 숙주세포를 함유하고 있는, 점액, 음식 찌꺼기, 담즙산, 다양한 PCR 억제제.

그러므로, 효율적이고 순수한 핵산 추출은 후속 핵산 테스트의 정확성을 보장하는 데 중요합니다. (qPCR과 같은, 디지털 PCR, 그리고 시퀀싱).

1.1 자기 비드 방법은 이러한 맥락에서 상당한 이점을 제공합니다.

• 높은 순도와 수율: 자성비드는 핵산을 효과적으로 흡착하고 단백질 등의 불순물을 제거합니다., 다당류, 여러 세척 단계를 통한 지질. 이는 복잡한 위장관 샘플에서 PCR 억제제를 제거하는 데 특히 효과적입니다., 검출 민감도와 특이도 대폭 향상.
• 자동화 및 높은 처리량: 마그네틱 비드 방식은 자동화 가능성이 매우 높습니다.. 수십 또는 수백 개의 샘플을 동시에 처리할 수 있는 다양한 자동화된 핵산 추출 장비를 사용할 수 있습니다., 효율성이 크게 향상됨, 인적 오류 감소, 대규모 임상시험 및 역학조사 요구에 부응.
• 안전성과 단순성: 전체 공정은 밀봉된 딥웰 플레이트에서 수행됩니다., 에어로졸 오염 최소화 및 작업자 감소’ 위험한 시약에 노출, 이를 통해 생물안전성을 강화합니다..
• 유연성: 이 방법은 다양한 시료 유형에 적합합니다., 위 조직을 포함한, 발판, 및 구강 샘플, 용해 완충액 및 작동 매개변수를 약간 조정하여.
• 표준화: 자동화된 프로세스로 높은 표준화 보장, 신뢰할 수 있는 결과, 실험실 간 비교 및 ​​품질 관리를 용이하게 합니다..

2. 규약: H에 대한 자기 비드 기반 핵산 추출 및 검출 워크플로우. 파일로리

다음은 H 추출을 위한 표준 자동 자기 비드 기반 프로토콜입니다.. 파일로리 DNA (위 조직이나 대변 샘플을 예로 사용):

2.1 샘플 전처리

위점막 조직: 생검 조직을 PBS 함유 원심분리 튜브에 넣고 조직 분쇄기를 사용하여 철저하게 균질화합니다..

대변 ​​샘플: 소액 일시정지 (예를 들어, 100-200mg) 특정 검체 보존 용액 또는 PBS 완충액에 대변 검체를 담음, 혼합하는 소용돌이, 그리고 원심분리기로 상청액을 수집한다..

2.2 핵산 추출 (96웰 자동 추출 시스템 사용)

용해: 가져가다 200 처리된 샘플 상청액의 μL를 단백질분해효소 K가 포함된 강력한 용해 완충액에 첨가합니다. (예를 들어, 구아니딘 HCl 기반 변성 염 시스템). 60~70°C에서 10~20분 동안 배양하여 세포와 박테리아를 완전히 용해시킵니다., 핵산을 방출하다, 잠재적인 뉴클레아제를 비활성화합니다..

제본: 용해물에 결합 완충액과 자기 비드 현탁액을 추가하고 혼합합니다.. 변성염의 높은 이온 세기 하에서, DNA는 자성 비드 표면에 특이적으로 흡착됩니다.. 몇 분 동안 배양한 후, 자기 스탠드를 사용하여 비드-DNA 복합체를 포착하고 상층액을 버립니다..

세탁:

세척 완충제 I: 일반적으로 단백질을 제거하기 위해 고농도의 소금과 에탄올이 포함되어 있습니다., 지질, 그리고 다른 불순물.

세척 완충제 II: 일반적으로 염분과 잔류 억제제를 제거하기 위해 저농도의 염분과 에탄올이 함유되어 있습니다..

각 세탁 단계 후에, 구슬을 다시 매달다, 그들을 잡아라, 그리고 액체는 버려주세요. 2~3회 반복.

건조: Wash buffer를 완전히 제거한 후, 튜브를 실온에서 몇 분 동안 열어두거나 약한 열을 가하여 잔류 에탄올이 완전히 증발하도록 합니다., 후속 PCR 반응에 대한 간섭 방지.

용출: 저염 또는 무염 용출 완충액 추가 (예를 들어, Tris-EDTA 완충액 또는 멸균수), 구슬을 다시 매달다, 그리고 55~65°C에서 5~10분 동안 배양하여 비드에서 DNA를 분리합니다.. 마지막으로, 자석 스탠드를 사용하여 구슬을 캡처, 생성된 상등액에는 정제된 H가 포함되어 있습니다.. pylori DNA 템플릿.

2.3 핵산 검출

Add the extracted DNA template to a real-time quantitative PCR (qPCR) reaction system.

Target Genes: Commonly selected highly specific conserved genes of H. pylori include:

• Urease A gene (ureA): Most commonly used, with extremely high specificity.
• 16S rRNA gene: Highly conserved, suitable for genus-level identification.
• cagA gene: A virulence gene used to distinguish high-virulence strains.

Reaction: Perform amplification in a qPCR instrument and monitor the fluorescence signal to determine results. Positive samples will show a characteristic S-shaped amplification curve.

품질 관리

Internal Control (IC): Added at the beginning of extraction to monitor the success of the entire process and avoid false negatives.

Positive and Negative Controls: Included in each experiment to ensure the effectiveness of extraction and PCR reagents.

3. Prospects and Future Directions

The prospects for magnetic bead-based nucleic acid extraction technology in H. pylori detection are vast and will develop in the following directions:

• Fully Integrated “Sample-in, Result-out” 시스템: Future trends involve integrating nucleic acid extraction, 확대, and detection into a single microfluidic chip or cartridge. Users need only add the sample, and the instrument automatically completes the entire process and generates a report. This will greatly simplify operations, shorten detection time (potentially to within 1 시간), and make it highly suitable for outpatient clinics, primary care hospitals, and even home use.
• Multiplex Detection and Drug Resistance Gene Analysis: High-quality nucleic acids extracted via the magnetic bead method support multiplex qPCR testing. A single reaction can not only determine H. pylori infection but also detect multiple drug resistance genes (예를 들어, clarithromycin resistance mutation 23S rRNA, levofloxacin resistance mutation gyrA), integrating molecular diagnosis and drug susceptibility testing to provide direct guidance for precise clinical treatment.
• Metagenomics and Strain Typing: High-quality DNA extraction is a prerequisite for metagenomic sequencing (mNGS). The magnetic bead method can provide high-quality templates for mNGS, enabling research on H. pylori microbiota diversity, evolutionary relationships, and interactions with other microorganisms in the infection microenvironment, thereby advancing deeper mechanistic studies.
• Popularization of Non-Invasive Testing: Stool-based H. pylori DNA testing (stool antigen test, SAT) is an excellent non-invasive method. The maturation of automated magnetic bead-based extraction will make large-scale stool screening feasible, suitable for children, individuals intolerant to endoscopy, and post-treatment efficacy monitoring.
• Continuous Technological Optimization: 자기구슬, buffer formulations, and instrument designs will continue to be optimized to achieve faster (shortening to within 20 분), more cost-effective (reducing per-test costs), and greener (using more environmentally friendly reagents) extraction of higher-purity nucleic acids.

4. 제품 추천

상하이 링쥔 생명공학 유한회사, 주식회사. 병원체 질병 진단에 널리 사용되는 다양한 실리카 기반 자성 비드 모델을 제공합니다., particularly the 160013 자기 구슬, which are suitable for Helicobacter pylori nucleic acid extraction. 그만큼 160013 magnetic beads provide extremely high detection sensitivity, enabling early screening during infection and valuable time for disease control and prevention.

【제품사양】

제품 코드: 160013

솔리드 컨텐츠: 50 mg/mL

포장: 2 밀리리터 / 10 밀리리터 / 50 밀리리터 / 500 밀리리터 / 1000 밀리리터

【제품 매개변수】

활성 그룹: 시오

자기 비드 매트릭스: 이산화규소

평균 입자 크기: 1.2 μm

자기 포화 강도: 65 ± 5 에뮤/g

【제품의 장점】

높은 흡착률: 최대 복구율 초과 95%.

Excellent suspension and strong magnetic properties for easy operation.

핵산 추출의 고순도 및 감도.

Mature production process with excellent batch-to-batch consistency.

결론

마그네틱 비드 기반 핵산 추출 기술, with its advantages of automation, 높은 처리량, 고순도, 그리고 높은 안전성, has become the gold standard method for nucleic acid preparation in Helicobacter pylori molecular diagnostics. It not only ensures the reliability of current qPCR testing but also serves as a key technological foundation for advancing rapid, 정밀한, and non-invasive diagnosis of H. pylori infection. As molecular technologies continue to evolve and integrate, the application of magnetic bead-based methods in this field will only become more profound and widespread.

공급자

상하이 링쥔 생명공학 유한회사, 주식회사에 설립되었습니다 2016 생체자성재료 및 핵산추출시약 전문제조업체입니다..

핵산 추출 및 정제 분야에서 풍부한 경험을 보유하고 있습니다., 단백질 정제, 세포 분리, 화학발광, 및 기타 기술 분야.

우리의 제품은 많은 분야에서 널리 사용됩니다., 의료 테스트와 같은, 유전자 검사, 대학 연구, 유전자 육종, 등. 우리는 제품을 제공할 뿐만 아니라 OEM도 수행할 수 있습니다., ODM, 그리고 다른 필요. 관련된 필요사항이 있는 경우, 저희에게 연락하게 자유롭게 느끼십시오 .